Revers transcriptaza (revers transcriptaza)

Revers transcriptază - o enzimă care sintetizează cADN dintr-un șablon de ARN.

Unele dintre genomului viral nu este ADN-ul, ca de obicei, și ARN. Aceste virusuri au fost numite retrovirusuri (retro - revers). In 1970 g. D.Baltimor H.M.Temin a deschis și un mecanism de transmitere a informațiilor de ARN viral la ADN, adică, contrar a ceea ce are loc în celulele organismelor superioare. Acest proces se numește transcriere inversă. și enzima, ea desfasoara, a fost numită revers transcriptazei sau transcriptaza (revertase) invers.

Transcriptaza inversă sau revers transcriptaza enzima ARN polimerază dependentă de ADN, prin care transcrierea inversă - - sinteza ADN-ului pe un șablon de ARN (revers transcriptaza, [lat transcriptio - rescrierea.); codificate de genomul unor virusuri ARN si elemente genetice mobile ale genomului organismelor superioare, un important „instrument“ pentru ingineria genenoy. Revers transcriptaza are cel puțin trei activități enzimatice:

1) polimeraza ADN, folosind ca matriță atât ARN și ADN;

2) activitatea RNazei H hidrolizeaza ARN în hibrid ARN-ADN, dar nu singur sau ARN dublu catenar și

3) o activitate endonucleazică ADN.

Deschide independent D. H. Temin și Baltimore în 1970, în ARN virusurile oncogene (premiul Nobel pentru 1975, împreună cu R. Dulbecco).

Astfel, revers transcriptaza capabil sa efectueze sinteza ADN pe matriță ARN, polimerizeze cele patru trifosfații deoxiribonucleozidă. Și, la fel ca ADN polimerază, sunt disponibile numai în semințe.

Transcriptaza inversă utilizate în sinteza ADN-ului dublu catenar complementar la ARN (în particular ARNm), pentru donarea ulterioară în vectori plasmidici în prepararea bibliotecilor (klonotek) ADNc. reverstranscriptazei, ADN polimerazele ca, pot fi utilizate pentru a introduce un marker radioactiv sau fluorescent in sonde ADN compuse trifosfatii deoxiribonucleozidă etichetate corespunzător.

Capacitatea de a sintetiza ADN-ul unui șablon de ARN, în anumite condiții, a fost demonstrată pentru termostabilă ADN polimerază Thermus thermophilus. Acest lucru permite utilizarea pentru detectarea directă a ARN-ului specific în probe biologice prin PCR. Versiunile moderne ale acestei abordări fac posibilă într-un singur amestec de reacție (și tubul) pentru a sintetiza o reacție de transcripție inversă, un număr mic de copii ale fragmentelor de ADN amplificate pe un matriță ARN care este utilizat imediat aceeași enzimă ca matriță într-un PCR convențional (un tub PCR).

Revers Activitatea virusului mieloblastozei aviare transcriptază în polimerizarea plus posedă 5 „-> 3“ și 3 „-> 5“ activități ekzoribonukleaznymi și scindează ARN în hibrizi ADN-ARN prin mecanismul processivity.