testul antiglobulinic Coombs - metode, standarde de performanță

testul antiglobulinic Coombs - metode, standarde de performanță

testul antiglobulină Principiul Coombs. Antieritrotsitnye molecula de anticorp și tip parțial de complement (C), situate pe suprafața eritrocitelor vyyavimy - test direct - aglutinare lor în contact cu ser animal conținând anticorpi la antiglobulină uman (ser antiglobulină). Anticorpii serici liberi detectate incomplet - test indirect - fixarea lor pe un amestec de eritrocite normale grupa 0, toate care aparțin antigene cunoscute sistemului Rh suplimentar agglyutiniruemye ser antiglobulină expus.

Materiale, Coombs antiglobulină reactivi de testare. 10/100 ml tuburi; pipete gradate 1, 2 ml; pipete Pasteur; trepiede; sticlă neșlefuit subiect; 8,5 ‰ soluție de NaCl; eritrocite. Eritrocitele ale pacientului, precum și aparținând grupei 0 se obține din proaspăt recoltat substanță anticoagulanți din sânge (EDTA).

Globulele rosii sunt departe de grup 0 în așa fel încât au venit de la persoane fizice în condiții normale și a conținut toate antigenele sistemului Rh. Ele pot stoca până la 7 zile în plasmă autologă la o temperatură de + 4 ° C In absenta grupa 0 eritrocitare cunoscut mozaic antigenic este posibil să se utilizeze un amestec de eritrocite grupa 0, Rh pozitiv pentru eritrocite Rh negativ.

serul pacientului trebuie să fie proaspăt trase.

ser antiglobulină este produs de către Institutul de ele. Dr. I. Cantacuzino disponibil sub formă liofilizată în fiole conținând 1 ml. După dizolvarea serului depozitate la -20 ° C,

Tehnica de testare antiglobulină Coombs.
a) testul Coombs direct. pacient eritrocite clătită de 3 ori cu o soluție de 8,5 ‰ NaCl.
Mai multe slide-uri puse pe marile picături de diluții de ser antiglobulină, iar următorul - pentru o mică picătură de celule roșii din sânge pacientului sedimente; Se amestecă picături de sticlă unghi. Materialul amestecat lăsat pe masă timp de 5 minute. apoi examinate pentru prezența aglutinează. În cazul unui rezultat pozitiv pentru a determina titrul maxim Aglutinabilitatea.

b) testul Coombs indirect. grupa eritrocite 0 rezuspolozhitelnye și Rh negativ se spală de 3 ori cu 8,5 ‰ soluție de NaCl și expusă la rata de ser pacient de 2 picături de eritrocite 8-10 picaturi de ser, apoi, timp de 60 min. se incubează la 37 ° C Apoi, se spală din nou de trei ori cu celulele roșii din sânge și le afectează antiglobulină ser, pe instrucțiunile pentru testul Coombs direct.

Când este vorba de sensibilizarea anticorpilor de grup activ rece 0 eritrocit dețin 60 min. la + 4 ° C

Notă. 1) Nu efectua testul Coombs direct pe eritrocite stocate una sau mai multe zile la + 4 ° C sau la temperatura camerei, deoarece rezultatele pot fi pozitive false datorită fixării disponibile în ser normal nonguvernamentală, anticorp activ la rece. 2) In cazurile severe hiperproteinemie de 4-5 ori pentru a spăla eritrocitele și pentru a verifica absența proteinelor serice în ultimul lichid de spălare prin intermediul acidului sulfosalitsilovoy.

Posibila reziduuri de 2 mg / ml IgG de ambalate celule roșii din sânge în sediment poate neutraliza serul antiglobulină. Testul Coombs poate fi condusă folosind monospecific anti-IgG, IgM, IgA -C3 C4 seruri și pentru a clarifica forma, pe suprafața eritrocitelor glubolin, de exemplu, cei care suferă de anemie hemolitică autoimună.