Tehnica de preparare a mediilor de cultură de bază
microbi in laborator Cutura stare-condiți pregătite medii de cultură, ținând seama de cerințele nutriționale ale fiecărui tip separat. Mediul în componența sa ar trebui să conțină de carbon, hidrogen, oxigen, azot, fosfor, sulf, magneziu, fier, microelemente și biostimulatori.
Distinge mediu nutritiv natural (lapte, ouă, cartofi și așa mai departe. P.), artificiale realizate din produse animale sau vegetație TION origine isinteticheskie (mediu Czapek, Sabouraud). Consistența mediului poate fi lichid, semi-solid și dens.
Pentru a pregăti mediul dens se adaugă în mediul lichid de agar-agar sau gelatină. Agar este un produs de tipul de alge marine ahnfeltia uscate, constând în principal din polizaharide. In gonflează agar apa rece și se înmoaie într-o fierbinte (90-100 ° C), se topește, formând o masă adezivă cum ar fi. agar solidificat la 40 ° C pentru a forma un jeleu. Ca microbi agar nutritiv utilizat.
Gelatina este produs prin digestia pielii, oasele și tendoanele de animale. Atunci când sunt încălzite cu apă formează o soluție coloidală de gelatină, care se pot întări la 18-20 ° C, într-un gel coloidal omogen și dez-plavlyayuschiysya la 25-27 ° C
În practică frecvent utilizate media bacteriologică de origine animală și vegetală, cuprinzând peptone, extractibile din carne, sânge, ser, carbohidrați must și m. P.
nutrienți esențiali trebuie conținut în mediul într-o formă accesibilă și în anumite proporții.
Mediile de cultură trebuie să fie sterile, transparente (cultivate pe ele md microorganismele care trebuie să fie vizibile în mod clar și au definit divizat pH) (trebuie furnizate prepararea culturilor pure de microorganisme).
Stocați mediu gata făcute într-un loc răcoros în dulapuri închise ermetic sau sertare care le împiedică uscarea rapid. Depozitat permanent printre microbi slab sau dezvoltă nu cresc.
Mediile de cultură pot fi împărțite în trei grupe:
1) standardul (universal) - destinat cultivării majorității germenilor;
2) speciale elective, alegerile - sunt menite să crească de tip picior definit doar de germeni, creșterea altor microorganisme în aceste medii este suprimat;
3) diagnostic diferențial - conceput pentru a studia proprietățile biochimice ale microorganismelor în scopul diferențierii diferitelor specii de microorganisme.
Medii de cultură standard
bulion de carne-peptonă (BCH). Compozitia BCH include apa de carne, peptonă și sare. Pentru prepararea de utilizare a apei din carne de bovine de carne proaspătă sau cai. fără carne din oase, grăsime și tendoanele și a trecut printr-o mașină de tocat carne. Tocătura rezultată se toarnă apă în proporție de 1: 2 (de exemplu, 1 kg de carne tocată se toarnă 2 litri de apă). Pune timp de 18-20 ore într-un loc rece (4-6 ° C), apoi se aduce la reflux timp de o oră și se filtrează printr-un filtru de bumbac-tifon. stoarce tocatã, la filtrat s-a adăugat apă la volumul inițial, se toarnă în flacoane sau sticle și sterilizate într-o autoclavă la o presiune de 0,1 MPa, timp de 30 min. Sau revărsată de două ori cantitatea de apă se fierbe ore Techa-set, se lasă să se răcească, se filtrează prin filtru de bumbac tifon. stoarce tocatã, la filtrat s-a adăugat apă la volumul inițial și se sterilizează timp de 30 min la o presiune de 0,1 MPa.
Când apa de gătit carne apare pe suprafața unei cantități de lichid de grăsime care q.s. Dimo ședere.
Pentru a prepara o apa BCH de carne adăugat 1% peptonă și 0,5% clorură de sodiu pură chimic, fierte timp de 10 min, se filtrează printr-un filtru de hârtie, ajustat la pH 7,2-7,4 prin adăugare de bicarbonat alcalin sau de sodiu și din nou fierte timp de 10 min. Bulionul filtrat ar trebui să fie de culoarea paiului și cristaline. Bulion distribuite în eprubete și flacoane au fost închise cu dopuri de bumbac legat de hârtie pergament și sterilizate timp de 20-30 minute la o presiune de 0,1 MPa.
gelatina din carne-peptonă (NRM). Pentru bulion de carne-peptonă, 10% în timpul iernii și nu mai puțin de 18-20% din gelatină de vară pulverizat și se încălzește într-un aparat tekucheparovom până la dizolvarea completă a gelatinei. Medium alcalinizat la pH 7,2 prin adăugarea a 10% rastvoraNaON putere. După răcire la 60 ° C este clarificat ou alb (în aceeași cantitate ca și pentru IPA), încălzit la 20-30 min aparat tekucheparovom. Fierbinte se filtrează printr-un filtru de bumbac sau tifon și eliberate în eprubete. Steri-lizuyut fracționată 15-20 min, timp de trei zile consecutiv, la o temperatură de 100 ° C
Cartofi miercuri. Sângera cartofi mari, se spală cu o perie sub jet de apă, coji de fructe îndepărtate și zonele deteriorate. Tuberculii sunt din nou spălate sub jet de apă de la robinet și plasată într-o soluție 1% de bicarbonat de sodiu timp de 2-3 ore pentru mediu acid-tralizare. Cartofi bare sondă tăiate al căror diametru trebuie să corespundă lățimii tuburilor vat. Barele sunt plasate în cupe cu apă și se taie în diagonală în două părți, hârtie de filtru uscată vayut și plasat într-un tub de testare cu jumătăți de interceptare în partea inferioară (partea de jos a acestor tuburi curge apa eliberată în timpul sterilizării). Pentru lipsa de tuburi speciale folosite tuburi Nye obișnuite prin plasarea în partea de jos a sticlei sau bastoane de lemn Nye, și pe ele - cartofi. Sterilizați la o suprapresiune de 0,1 MPa timp de 20-25 de minute.
apă peptonată. Pregătiți-l în diverse moduri. La 1 litru de apă distilată, se dizolvă 5 g de clorură de sodiu pură chimic și 10 g de peptonă și-ste rilizuyut într-o autoclavă la o presiune de 0,1 MPa timp de 10 minute. Pentru creșterea bacteriilor putrefacție preparate în apă peptonată oarecum diferit în 1 litru de apă di-stillirovannoy se dizolvă 30 g de peptonă. Formular-a sterilizat la o suprapresiune de 0,1 MPa timp de 20 minute. Glyukozopeptonnaya concentrat miercuri. La 1 litru de apă se dizolvă 100 g de peptonă și 50 g de clorură de sodiu, se încălzește la fierbere, se filtrează, 50 g glucoză, ajustat la pH 7,6 7,4- (folosind o soluție saturată de carbonat de sodiu), se toarnă în 10 balon ml și recipiente cu o capacitate de 250 ml și se sterilizează cu flotoare de 3 zile cu abur care curge timp de 30 minute. Divorțat glyukozopeptonnaya miercuri. La 1 litru de apă se dizolvă 10 g de peptonă și 5 g de clorură de sodiu, se încălzește până la fierbere și se adaugă 5 g de glucoză. Mediul a fost ajustat la pH 7,4-7,6, turnat în fiole de 10 ml și se sterilizează cu flotoare de 3 zile de abur care curge timp de 30 minute.
agar nutritiv uscat. Conține pește sau carne bulion, agar, clorură de sodiu și fosfat. La adăugat 5 g de pulbere de agar 100 ml apă distilată clorhidric rece. Temeinic agitat și încălzit, cu agitare, până la dizolvarea completă a agarului, evitând lipirea. Atunci când este necesar, se filtrează soluția, umplut în tuburi și sterilizate la o suprapresiune de 0,1 MPa timp de 20 minute.