mediu microbiologic nutritiv

Nevoia de cultură microbiană legată nu numai pentru a izola agentul patogen din materialul de testat și de a determina tipul acestuia, ci și pentru acumularea unei mase microbiene în producția de produse biologice: vaccinuri, antigene și alergeni. Pentru cultivarea diferitelor microorganisme medii nutritive artificiale folosite in laborator.

medii nutritive sunt: ​​consistență - lichid, solid, semi-solid; origine - animală, vegetală și mediu sintetic de compoziție constantă; intenționat - convenționale sau cu majoritate simplă pentru microorganisme în creștere; Special - pentru cultivarea de microbi, care nu cresc sau slab cultivate pe medii de cultură convenționale; diagnostic diferențial - este utilizat pentru a determina caracteristicile generice sau specifice studiate culturi bacteriene (hemolitice, saccarolitic, proteolitică, reducerea și alte proprietăți); selectiv - unul pentru izolarea gen microbiene sau specii dintr-un material care conține un amestec de diferite specii de microorganisme, în care unele specii cresc bine, în timp ce altele nu cresc; mediu de îmbogățire (acumulativ).

Baza multor medii nutritive este de apă carne origine animală. Acesta este preparat din carne de vită proaspătă macră, eliberat din oase, tendoane, fascia. carne tocată (bucăți mici sau tocate) este umplută cu apă distilată la un raport de 1 2 (per 1 kg de carne 2 litri de apă). Extrasă de 12-24 ore, fierte timp de 1,5 2 ore, se filtrează și se adaugă apă distilată până la volumul inițial, se toarnă în sticle, flacoane, închise cu vată dopuri și sterilizate prin autoclavare.

Comună (ordinară) mediu.

Carne-peptonă (BCH) - un mediu nutritiv lichid. Pentru prepararea sa la 1 litru de apă carne adăugat 1% peptonă, 0,5% sare chimic pură și fierte. Carnea apa usor acida, se alcalinizează cu toate acestea BCH - o cantitate mică de 10- 15% rastvoraKON sau NaOH, fiert timp de 2-3 minute, pH-ul este verificat cu ajutorul comparator Mihaelnsa (Figura 30.) Or elektropotentsiometrom. Bulionul de carne-peptonă a fost filtrat printr-un filtru de hârtie, turnată în flacoane au fost autoclavizat.

agar Carne-peptonă (MPA) - mediu nutritiv dens. Prin BCH adăugat (substanță non-azotate organice derivate din alge marine) 2% agar și se încălzește până la topirea acestuia, pH-ul ajustat la cald fiert timp de 5-10 minute, se filtrează fierbinte prin filtru de bumbac-tifon, imbuteliat tuburi sau flacoane, autoclavizat. După sterilizare, tuburile de agar fierbinți sunt așezate oblic sub un unghi de 5-6 °. Când se formează durificare teșite suprafață densă.

Carne-peptonă semisolid agar se prepară în același mod ca și IPA; diferența constă în faptul că agar-agar, se adaugă mai puțin - 0,15-0,20-0,25%.

Medii de cultură specială.

Hottinger bulion preparat din tripsină digest (digest) deșeuri de carne - fascia, grăsime, tendoane. 1 kg de garnituri din carne turnat 2 litri de apă clocotită, fierte timp de 5 min, se răcește la 45 ° și se adaugă 5,0-10,0 pancreatina, alcalinizat la pH 7,8-8,0 cu carbonat de sodiu, agitat și completat cu cloroform (10 ml per 1 l), aproape ermetic, păstrate într-un loc cald timp de 10 zile, agitând zilnic. Digestul rezultată a fost acidulată cu acid clorhidric până la pH 5,5. Depozitați într-un loc întunecos. Pentru prepararea mediului nutritiv se adaugă 1 litru de apă 100-200 ml digest, fiert timp de 1-2 minute, se filtrează, se alcalinizează și se sterilizează. Hottinger agar se prepară în același mod ca și un IPA convențional.

Zahăr (glucoză) bulion (sau agar) fabricat ca mediu obișnuit, dar se adaugă 1-2% glucoză și sterilizat prin care curge abur sau autoclavizat la 0,5 atm.

Carne-peptonă gelatină. Prin BCH adăugat 10-20% gelatină (produsul obținut din țesuturi animale kleydayuschih), topit și fierbinte să stabilească un mediu de reacție adecvat, este trecut printr-un filtru de bumbac-tifon, distribuit în flacoane și sterilizate cu abur care curge fracționată.

Carnea și peptona ficat bulion Kitt - Tarotstsi - mediu lichid pentru cultivarea anaerobilor. ficat bovin a fost tăiat în bucăți mici, este umplut cu apă 1: 1, se fierbe, se filtrează și se adaugă apă hepatică la BCH 2. 1 (2 l 1 l bulion de ficat BCH), se fierbe, ajustat la pH, distribuit în eprubete de coloană înaltă în care felii de pre-fierte sunt stabilite de ficat. Mediul este turnat peste tuburile 1-2 ml de ulei de parafină și sterilizate într-o autoclavă la 0,5 atmosfere timp de 30 minute. ^

Și zer bulion de carne-peptonă agar este preparat prin adăugarea aseptic la flacoanele topit sau BCH n răcit la 45-50 ° IPA 5-10% sânge de cal steril ser (sau oaie, iepure) bulion de ser a fost apoi distribuit în tuburi sterile ( ).

MPA ser sau în flacoane (coloană). sau într-un vas Petri.

mediu de diagnostic diferențial. Sânge IPA utilizat pentru a detecta proprietățile hemolitice ale bacteriilor. Anterior, într-un flacon steril cu perle de sticlă se recoltează sânge aseptic (de la oaie, cal sau iepure), se agită timp de 15-20 minute pentru a separa fibrinei de restul sângelui. cheaguri de fibrină depus pe perle și de sânge defibrinat (5-10%) a adăugat steril la topit și ostuzhennoy IPA, conuri de rotație blânde se amestecă uniform și se toarnă în vase sterile Petri.

mediu Hiss. Apa peptonă (constând în apă distilată, 0,5% NaCI și 1% peptonă) a fost adăugat 0,5% glucide (zahăr sau alcool polihidric) și 0,5% Indicatorul Andrede. pregătit în mod tipic set de medii cu diferite glucide, individual. Indicatorul utilizat este de 0,5 g de acid fucsin, 16 ml de soluție de NaOH 4%, 100 ml de apă distilată. Medium cu carbohidratii distribuit în tuburi de „gazovkami“ (flotante) coborâte în tuburi cu susul în jos. Mediu sunt sterilizate cu abur care curge carbohidrați fracționată. medie Hiss poate fi lichid și poluzhidkie- (fără gazovok) conținând 0,25% agar. Atunci când se formează fermentarea unui carbohidrat _inogo germeni de creștere în mediu de acid, care este recuperat prin acțiunea indicatorului culorii vopselei. Miercuri devine roșu. Formată fermentație carbohidrat cons produse gazoase se acumulează în flotoare.

Miercuri Endo. IPA topit (pH 7,4- 7,6) este realizată din 0,5-1% lactoză și 0,5% din soluția alcoolică saturată de fucsină bazic, decolorată prin adăugarea în picături de sulfat de sodiu 10%. Mediul este încălzit și se toarnă în vase Petri. Bacteriile care fermentează lactoza, cresc pe acest mediu sub formă de colonii roșii.

Levin miercuri. Se prepară 2% agar bulion Hottinger, pH 7,2-7,4 și sterilizate prin autoclavare. La 100 ml de agar gata topit s-a adăugat 2 ml dintr-o soluție 0,5% de albastru de metilen,% eozina 1,5 ml de 2 (alcaline bacteriologice), 2 g de lactoză și 0,2 g de fosfat dibazic de potasiu (KaNRO4). Soluțiile de coloranți sunt preparate folosind apă distilată și se sterilizează prin aparat Koch. Metilen soluție albastră înainte de utilizare este preîncălzit într-o baie de apă și se adaugă la agarul sub formă de căldură. După adăugarea acestor componente, mediul se amestecă bine și se toarnă în cutii Petri. violet miercuri.

Sulfit de bismut agar (Vilson- Blair miercuri). IPA (pH 7,5), cu un indicator care cuprinde un acid citrat de bismut, sulfat de sodiu, sare Mohr (sare sernoammoniynaya de fier), fosfat dibazic de sodiu, glucoză și verde strălucitor. În prezent, bismut agar sulfit (ca Endo agar, miercuri Ploskireva) industria produce într-o formă de pulbere uscată. 6 g de pulbere uscată a fost dizolvată în 100 ml de apă distilată, se încălzește cu agitare, se toarnă în tuburi sterile și lăsat într-o poziție oblică. Folosit ca mediu de substanțe chimice, care își schimbă culoarea, ca rezultat al redox (reducere) procese cauzate de enzimele bacteriene. Pentru a face acest lucru, se prepară cu lapte de metilen NKO si d. lapte degresat proaspăt de vacă a fost alcalinizat cu bicarbonat de sodiu până la reacție slab alcalină cu hârtie de turnesol, a adăugat o soluție apoasă 1% de metilen colorare cu albastru și albastru. Sterilizată cu abur care curge fracțional.

Dacă există presupunerea că există un număr mic de bacterii din material, se recomandă să se utilizeze un mediu de stocare (îmbogățire). C p și U Shustova: IPA (pH 7,4), s-a adăugat 10% soluție apoasă 50% de hipofosfit și soluție Lugol 2%. Aplicată la bacterii de acumulare germen. Miercuri Rappoport: BCH adăugat la glucoză 1%, 10% și 1% bilă indicator Andrede. Sterilizată cu abur care curge.

media sintetice sunt folosite pentru a studia metabolismul bacteriilor si a altor caracteristici biologice. Ele sunt compuse din substanțe chimic pure solubile în apă, cantități strict specificate :. fosfat de amoniu, fosfat de potasiu, clorură de sodiu, sulfatul de magneziu, glucoză sau un alt carbohidrat, nicotinamida etc. După cum este necesar mediu sintetic dens preparat prin adăugarea de agar. Sterilizată într-o autoclavă. (Model de mediu sintetic Sottona

Pentru cultivarea drojdii și mucegaiuri în urma utilizării mass-media

mediu sintetic van Iterson. Azotatul de amoniu (NaH4NO3) 0,5, fosfat monobazic de potasiu (KH2PO4) 0,5, 1L apa de la robinet. Autoclavat la 1 atm timp de 20 minute.

Glucoza agar Sabouraud: glucoză 4,0, peptonă 1,0, 1,8 agar, 100 ml apă. Avtoklavirovaiiem sterilizat.

Agar Litman cu bilă bovin: peptonă 10,0, glucoză 10,0, bilă deshidratat bovin 15 ml cristal violet 0.01, 1 litru de apă, agar 20,0. Sterilizată într-o autoclavă la 1 atm timp de 15 minute. * Se toarnă în pahare cu un strat gros, pentru a preveni deshidratarea mediului.