vaccin viu împotriva viței colibaciloza

C12N1 - Microorganisme, de exemplu, protozoare; compoziția lor (preparate medicamentoase ce conțin materiale din microorganisme A61K 35/66; prepararea compozițiilor farmaceutice care conțin antigene sau anticorpi bacteriene, de exemplu vaccinurile bacteriene A61K 39/00); metode de înmulțire, întreținere sau conservare a microorganismelor sau a compozițiilor acestora; metode de preparare sau izolarea compozițiilor care conțin microorganisme; medii de cultură

A61P31 / 04 - antibacterieni

A61K39 / 108 - Escherichia; Klebsiella

Proprietarii brevetului RU 2288006:

Saratov Stat științific Instituția Stațiunea de Cercetare Veterinară al Academiei Române de Științe Agricole (RU)

Invenția se referă la microbiologie veterinară și biotehnologie și pot fi utilizate pentru a obține vaccinuri vii împotriva animalelor de fermă colibaciloza, în special viței.

Kolibakterioz (ehsherihiozom) - o boală infecțioasă cauzată de enteropatogenic Escherichia, este larg răspândit în multe țări ale lumii și cauzează pierderi economice semnificative creșterii animalelor datorită mortalității ridicate de viței și purcei.

Vaccin Cunoscută împotriva animalelor de fermă colibaciloza (a se vedea. PatentRumyniya№2053792 Cl. A 61 K 39/108, publ. 10.02.96 g) conținând antigene adezive K99 inactivat formol, K88av, K88as, K88ad, F41, Att25, 987R, căldură conjugat labil și enterotoxine stabile termic de Escherichia și un adjuvant sub formă de hidroxid de aluminiu.

Cu toate acestea, vaccinurile inactivate, împreună cu o acțiune pozitivă, în unele cazuri, poate provoca reacții alergice datorită adăugarea de adjuvanți la acestea și poate perturba, de asemenea, procesele naturale ale digestiei prin schimbarea compoziției calitative și cantitative a microflorei. În plus, producția de vaccinuri inactivate necesită un efort considerabil.

Cu toate acestea, vaccinul este destinat administrării subcutanate. În plus, este nevoie de o mulțime de forță de muncă pentru fabricarea și utilizarea, deoarece permite două tulpini de E. coli și dublă administrare la animale. Mecanismul de acțiune are ca scop creșterea imunității umorale, indicând dezvoltarea infecției la animalele vaccinate, nu pentru a le proteja de boli.

Cu toate acestea, acest instrument este destinat administrării pe cale orală. În plus, introducerea unui mijloc de a primi colostru poate afecta negativ biocenozei intestinale naturale, cauzând disbacterioza.

Invenția se referă la problema de a crea un vaccin viu avirulent împotriva vițeilor colibaciloza pentru injecție intramusculară, ușor de fabricat și utilizat.

Acest lucru ne permite să tragem concluzia că prezența inventivă în prezenta invenție.

Tulpina destinate fabricării unui vaccin depus în Vserumynskom stat Institutul de Cercetare Controlul de Standardizare și Certificare preparatelor și veterinare pentru furaj (VGNKI) (Certificat de depozit inclus). Tulpina caracterizată prin următoarele proprietăți.

Caracteristicile culturale și morfologice.

Cultivarea se efectuează mai întâi pe carne-peptonă bulion (BCH), apoi pe carne peptonă agar (MPA) la 37 # x000B0 C timp de 18 până la 48 de ore în condiții aerobe. Astfel, la coloniile CCB cresc prolix, formând turbiditate intensă și precipitat ușor de spart format inițial pe MPA neted, bombat, colonii lucioase cu margini netede S-formă. În cele ce urmează, formarea de tranziție de la S la colonii R-formă și colonii R formă sec zimțate (50%). Endo agar format colonii de culoare roșu închis, cu un luciu metalic.

Microorganismul are exponate de mobilitate catalază activitate, dă o reacție pozitivă cu roșu de metil, produce indol, glucoza ferment cu flatulență și lactoză, arabinoză, manitol, maltoză, xiloză, sorbitol, dulcitol.

Condițiile și compoziția mediilor pentru producerea de toxine: Hottinger bulion.

Produsul a fost sintetizat printr-o tulpină de Escherichia coli B-5 - exotoxină termolabile care nu sunt afectate de neutralizarea seruri polivalenți anti-toxic împotriva colibaciloza (ehsherihioza), animale de fermă

tulpina moleculara caracteristica genetica - tulpina in piesele S-, iar R formele au o dimensiune replicon de aproximativ 0,3 metri pătrați, în acest replicon are o genă care codifică subunitatea B a căldurii toxina labilă (LT), care produce activitatea imunogenă a tulpinii. gene structurale LT integreze în continuare în cromozomul celulei bacteriene. Celulele din tulpina a transporta replicon proprietățile de reglementare ale informației genetice necesare pentru sinteza RT-produse. Tulpinile disponibile epitop imunogen, dar nu există nici un replicon responsabil pentru reactogenitatea Escherichia.

Sensibilitatea la antibiotice (creșterea zonei de inhibiție în mm): polimixină - 11, streptomicina - 25, cloramfenicol - 25 Rifampicină - 9, carbenicilina - 15; Nu este sensibil la oxacilina, doxiciclina, lincomicina, tetraciclină, oleandomicină, ampicilină, penicilină.

Intraperitoneală cultura sușă administrare la o concentrație de 5 # x000B7; MK 10 august / cm3 și un volum de 0,5 ml șoareci de moarte albe cauze. LD50 - 1,2 # x000B7, octombrie de 10 MK / cm 3. șoareci Moartea alb apare în câteva zile.

Determinarea proprietăților de deformare enterotoxigenă.

Pentru a determina tulpina cultivării toxină a fost realizată în compoziție nutritivă Mundeli timp de 20 ore. Rezultată bulion de cultură a fost separat în materialul toksinosoderzhaschy și bakmassu prin sterilizare filtrare. Lichidul de cultură, lipsit de component bacterian servit material conținând exotoxină E. coli.

Stabilitatea a fost determinată prin încălzire la o temperatură toksinosoderzhaschego material în timpul fierbere de 10 minute la 100 # x000B0 C și introducerea sa ulterioară în șoareci albi.

Determinarea TL-toxină a fost realizată utilizând materialul toksinosoderzhaschego încălzit nu se încălzește și mediul nutritiv Mundeli - ca martor negativ.

Cultivarea tulpinii poate fi realizată, de exemplu, dezvoltat și patentat Saratov Nieves (patent №2142505) mediul nutritiv cu următoarea compoziție (% în greutate.): 5-20 aminokrovin; peptonă, 0,6-1,5; clorură de amoniu 0,08-0,18; clorură de sodiu 0,09-0,11; cazeină hidrolizată, 9-20; reproducție la sol „ac“ 52-61; apă distilată - restul. Pe acest mediu de cultură a fost efectuat timp de 7 zile, la o temperatură de 37 # x000B0 C, apoi suspensia a fost centrifugată la 6000 rot / min timp de 30 minute. Supernatantul a fost imagini enterotoxigenă.

O metodă de fabricare a unui vaccin viu împotriva vițeilor colibaciloză este după cum urmează.

Se efectuează cultivarea tulpinii. În acest scop, tulpina E. coli „B-5“ inițial însămânțate în eprubete de pe bulion de carne-peptonă (BCH), apoi pe carne peptonă agar (MPA) la 37 # x000B0 C timp de 18 ore în condiții aerobe.

Suspensia este destinată numai administrării la viței.

Pentru a evalua intensitatea imunității folosind două grupuri de șoareci albi. Primul grup de șoareci (10 animale) au fost supuse unei culturi unice imunizarea tulpina E.coli B-5, al doilea grup de șoareci (10 animale), tratate cu ser fiziologic, în aceleași doze a fost un control. După 14 zile, ambele grupe de animale au fost infectate intraperitoneal cu o cultură virulentă de E. coli la o concentrație de 5 # x000D7; 10 august celule microbiene per 1 cm3 de soluție fiziologică, la o doză de 0,5 ml. Rezultatele sunt prezentate în tabelul 1, din care rezultă că siguranța animalelor imunizate este de 100% în grupul de control, toate animalele au fost ucise.

Exemplul 3. Pentru a demonstra vaccin avirulenței a fost administrat la șoareci la o concentrație de 5 # x000D7; 10 august organisme microbiene. moartea soareci nu a venit.

5 viței din grupul de control, care a fost administrat în aceeași doză salina, 20 zile a scăzut la 2 viței.

Rezultatele sunt prezentate în tabelul 2.

Numărul de animale pe grup

După 10 zile de la vârsta

Acesta a scăzut la 20 de zile de vârstă

Efectuat de cercetare cu privire la utilizarea vaccinului kolibakteriozno la viței sănătoși și bolnavi. Vaccinul a fost administrat intramuscular o dată o doză de 2,5 ml per cap. În grupul de control al animalelor sănătoase au primit ser fiziologic, iar vițeii bolnavi au fost tratați cu antibiotice.

Studiile au confirmat eficiența ridicată a vaccinului kolibakteriozno propus.

Rezultatele sunt prezentate în tabelele 3 și 4.

Tabelul 3.
Rezultatul aplicării vaccinului kolibakteriozno la viței sănătoși

Numele grupurilor de animale

Numărul de viței din grupul

După 10 zile de la vârsta

Acesta a scăzut la 20 de zile de vârstă

Tabelul 4.
Rezultatul aplicării vaccinului pacienților kolibakteriozno viței

Numele grupurilor de animale

Numărul de viței din grupul

După 20 de zile de vârstă

Testele de producție ale vaccinului au fost efectuate pe 203 de viței clinic sănătoși și bolnavi, în fermele din cele șase districte ale regiunii Saratov.

Vaccinul se administrează la viței la vârsta de 2-9 zile intramuscular o dată la o doză de 2,5 # x000D7; 10 octombrie -3,0 # x000D7, 10 octombrie MK pe cap. În grupul de control al animalelor (în cantitate de 156 capete), utilizate în metodele convenționale de prevenire a fermelor colibaciloza. Ca rezultat al studiilor până în ziua 20 a grupului experimental a scăzut cu 6 (3%) și din grupurile de control - 33 (21,2%) animale. Utilizarea unui vaccin care a redus mortalitatea de viței de 7 ori.

Astfel, vaccinul avirulenței inventiv nu reactogenic, nu are nici o alergene nu produce reacții inflamatorii la locul injectării și oferă o protecție imună a vițeilor din colibaciloza.

Invenția se referă la biotehnologie.

Invenția se referă la domeniul biochimiei și ingineria genetică și pot fi utilizate în piscicultură.

Invenția se referă la domeniul biotehnologiei, în special producerea de vaccinuri.

Invenția se referă la domeniul ingineriei genetice și biotehnologiei și pot fi utilizate în medicină.

Invenția se referă la microbiologie și genetică bacteriene, în particular, la metode de bacilli transductia antrax și strâns.

Invenția se referă la biotehnologie, și este o bacterie E.coli, care este deficitara in gene DegP cromozomiale si prc, care codifică proteaza DegP și PRC, respectiv, și o spr gene mutante, care cuprinde o supresoare secvență prc E. coli, cu punct de mutație la poziția 148 care conduce la înlocuirea triptofanului la arginină la poziția 148.

Invenția se referă la industria laptelui, în special pentru producția de produse lactate fermentate.

Invenția se referă la biotehnologie, în special în mediul de cultură de producție, și pot fi utilizate în producerea de preparate bacteriene.

Invenția se referă la medicina veterinară.