Turnând materialul histologic
Încorporați forum:
mediu de montare
Material pentru obtinerea subțire microtomie (până la 6 microni) opțional de mers fixe și spălat este turnat în mediu-ing float, pre-umezite felii de tesut ea. În dependența de metoda de dizolvare Mediu de înglobare în Sec-lyayut solubil în solvenți organici și vodoras solubili. Primul grup include ceara, polimeraza ceară pe bază de plastic ry, celloidin, la al doilea - gelatină, polietilenglicoli, polieteri, metacrilați, etc. Unele
1.Zalivka țesut în parafină
Parafina - un amestec de genuri distilat de petrol produs moleculară mare limitare carbohidrati; dizolvat în anilină, coșul de cenușă, ulei de bergamot, celosolv, cloroformul, decalină, dioxan, butanol, propanol, toluen, tricloretilenă, Lola-Xi. Fiecare dintre acești solvenți pot fi utilizate în Ka-onoruri mediu intermediar între alcool și parafină. Tem-peratura parafine topire diferite de 27 până la 62 ° C Tehnica utilizată histologic parafină cu punct de topire de 56 ° C Companiile străine produc parafină specială pentru studii histologice, care conțin polimeri de plastic timp personal, cum ar fi dimetil sulfoxid. Numele lor comerciale "Paraplast", "Paraplast plus", "Gistoplast C", "Gistozes".
Cel mai rapid, mai simplu, nu necesită utilizarea de echipamente speciale de către materialul de umplere este o metodă dezvoltată I. I. Zolotyh în Morbid Anatomia Departamentul de Institutul de Chirurgie numit. A. V. Vishnevskogo.
96% etanol 15 min
100% alcool 15 min
Cloroform 15 min
Cloroform-parafină la 56 ° C timp de 15 min
Parafina la 56 ° C cu agitare viguroasă timp de 1 minut
Parafina la 56 ° C timp de 45 minute
Durata de 2 h 30 min
Completăm este după cum urmează:
Formalina 10% 24 ore
Clătiți sub jet de apă 1 oră
70% alcool (deshidratare) timp de 4 ore
alcool 80% mai mult de 4 ore
alcool 96% mai mult de 4 ore
alcool + cloroform 1: 1 până la 1 chasa (suprauscate)
cloroform pur la 1 chasa
cloroform pur la 1 chasa
cloroform + parafină 1: 1 până la 1 37C chasa
parafină 45 56C 1 m
parafină 2 56C 45 m
Pentru prepararea medicamentelor ar trebui să fie:
1 xilen (deparafinare) 56C 10 m
56C xilen 2 10 m
Hematoxylin 5 m
se spală cu apă distilată
56C xilen mai mare de 10 m (pentru iluminare)
Caracteristici turnare obiecte mari de parafină
Completați parafină permite obținerea unor secțiuni histologice de dimensiuni mai mari (secțiuni gistotopograficheskie), de exemplu, secțiuni ale tuturor organelor (uter, rinichi) sau o parte semnificativă (lob a plămânilor). Turnarea se realizează manual, și este nevoie de timp suplimentar în toate etapele pentru ea. Pentru a prepara aceste felii de tesut cerebral cu cutitul taie tesut proaspat latre de cerebral aproximativ 1 cm grosime și pune într-o baie de fixativ. Pentru a păstra plat felie confi-gurație, este plasat între două ochiuri de plasă de sârmă, care atrag reciproc prin inele de cauciuc. Durata Pro-fixare de 48 h. După clătire în apă de la robinet (3-4 ore) trebuie deshidratate în 70%, 96% și 100% din cei spiro (2 modificări) timp de 48 ore. Pentru deshidratarea poate cu alcool izopropilic-menit oferind o schimbare frecventă și temperatura a fost de 45 ° C (într-un incubator). Acest lucru evită radiații excesive în droguri tari. Ca un mediu precis intermediar-metilbenzoat utilizat sau cloroform - 3 schimburi timp de 3 zile. Obiectele încorporate în parafină sau Paraplast având un punct de topire de 56-58 ° C
Prepararea blocuri de parafină
Parafina impregnate piese tesatura întins într-un-spe cial mucegaiuri și se toarnă topit într-un cuptor sau o baie de apă la 60 ° C cu parafină, care se adaugă în 1 - 3% ceară.
Pentru blocurile de parafină ispol'uet forma dorită, formează un alt dispozitiv. Acestea includ fabricarea-Mye de un laborator de cutii de hârtie în partea de jos, care expune piesele, și lângă perete lateral pus eticheta-ku exterior număr; de metal în formă de L coturi sau mucegaiuri separabile, care sunt lubrifiate înainte de utilizare glicerol și plasate pe un metal încălzit placă-ku, îndeplinind rolul mucegaiuri inferioare. Cutii aplicate din material plastic, de asemenea, timp personal și formulare, în special, utilizate în microbiologie, în special atunci când turnarea șantierelor mici-ing, cum ar fi materialul biopsie ac.
Mașini de import speciale pentru turnare de parafină (așa-numitele centre de înglobare) sunt prevăzute cu un set de matrițe individuale de timp (casete) și pensete. Ele pot alimenta automat doze divizate în parafină temperatură optimă.
Desfasurandu bucăți în forme și orientarea lor ar trebui să fie efectuate rapid forcepsul cald. Dacă materialul pentru a umple o mulțime și se răcește rapid, puteți utiliza o pereche de aripioare încălzită într-o baie de apă la 60 ° C Pentru răcire VOR materialul recomanda lobi plasați în apă la 10- 18 ° C, dar nu cufundat în ea. Când solidificare a suprafeței blocului de parafină este contractat și se formează adâncituri crater asemănător. Acest lucru ar trebui să fie luate în considerare atunci când turnarea de piese și lucrări suplimentare cu blocuri. Parafina trebuie sa fie de 3-4 mm ies deasupra suprafeței din aparat, dacă acesta va fi montat pe un bloc de lemn. Există, de asemenea, un număr mare de unități de umplere de parafină și se taie fără utilizarea de blocuri de lemn, cu succesoare-hamster aplicat chiar Sannomiya microtom.
Cele mai multe linii directoare recomanda după fasonarea și îndepărtarea de blocuri de parafină în exces lipi pe bare Dere-vyannye folosind preîncălzit pe un metalil spatulă spirit-agenție sau bisturiu. Apoi, pentru a asigura o unitate de bază de lipire mai durabil topit din cele patru laturi ale aceleiași spatulă fierbinte sau bisturiu.
Turnând celloidin tesut
Celloidin - bine dizolvat în eter nitrokletchat-ka. Practica histologică folosind 2%, 4% și 8% Ras creează celloidin, care este preparată din plăci tselloidinovyh sau emulsie de film cu raze spălate și uscate.
Pentru a prepara 500 ml dintr-o soluție de 2% din 10 g de celloidin celloidin uscat adăugat 250 ml de alcool 100% și se lasă să stea timp de 1 zi, apoi 250 ml de eter anhidru, care se dizolvă în alcool celloidin umflate. Pentru prepararea de 4% și 8% soluții au crescut odată cu numărul celloidin-responsabil 2 și de 4 ori. Soluția a fost depozitată într-un recipient închis ermetic.
Vărsarea celloidin tesut a devenit acum mai popular decât parafina, și este folosit în principal Obra Zoom pentru prelucrarea țesături trudnorezhuschihsya și obiecte de dimensiuni durere-Shih, de la care este dificil de a obține bune-tiile secțiuni de parafină. Tselloidinovuyu umple este, de asemenea, utilizat în acele cazuri în care este necesar, pentru a evita expunerea în studiu, materialul la temperaturi foarte înalte. În plus, mate-riali completați celloidin vă permite să obțineți cele mai bune rezultate în prezența obiectelor în cavități mari, golurile și straturi de consistență diferite pe termen.
celloidin eter și uscat inflamabile, astfel încât atunci când se lucrează cu ei necesită prudență.
Materialul deshidratat a fost preluat în 100% alcool-eter (1: 1) la 4-6ch, transferat într-o soluție celloidin 2% timp de 2-3 zile, urmat de 4% și 8% soluții pentru 5-7 zile fiecare. Piesa impregnat se toarnă proaspete 8% și celloidin yn-lotnyayut în vapori de cloroform (într-un exicator). Materialul compactat astfel obținut este turnat în 70% alcool pentru depozitare. Blocuri sculptate lipite pe celloidin grosime tampoane Dere-vyannye cu 1 zi înainte de tăiere.
Cloroform 2 - 3 g
70% alcool de stocare
Caracteristici completați obiecte celloidin mari
Tselloidinovaya umple, precum și de umplere în parafină, secționate produce gistotopograficheskie. țesut Placi corp 1 cm grosime este plasat între două ochiuri de sârmă (ca de turnare în parafină), fixat, se spală și se deshidratează. Durata totală a procesului de umplere în instalații mari de celloidin 2-2,5 luni. Cu tselloidinovoy umple secțiunile gistotopograficheskie disponibile de aproximativ 20 de microni grosime.
Completați celloidin-parafină
Această metodă este recomandată pentru prelucrarea obiectelor care sunt ușor comprimate când piesa turnată ceară, de exemplu hematopoieză, țesut mezenchimal, precum și de organe și țesuturi, care are o structură multistrat (trahee, piele, etc.).
Celloidin utilizat ca un amestec cu ulei de ricin (1: 1), în care obiectele rămână în timp de 1-2 zile imbunatatit cutele sale impregnare lor. Apoi, pentru a îndepărta materialul ulei de ricin este spălat în trei porții de cloroform.
Schema de turnare în materialul celloidin gistotopogramm de Merkulov
Completați celloidin-parafină
Completați gelatina
Pentru studiul lipidelor în țesuturi și organe în vrac, precum si studiul obiectelor .Dacă embrionare sunt folosite cu succes în gelatină biopolimer de umplere solubil în apă. Utilizați gelatină cristalin transparent, care este preparată din 25% și 12,5% soluții.
La adăugat 25 g de gelatină 75 ml dintr-o soluție apoasă 1% de Fe-nol (apă carbolic) și plasate într-un incubator la 37 ° C swells Gelatina și forme dense după agitare soluție 25%. ACESTEA la diluarea cu cald (37 ° C) carbolice apă de 2 ori obținută soluție de gelatină de 12,5%.
Soluția preparată a fost distribuită în curat pro-tag uscat pentru o singură utilizare și astupate. În stare congelată a gelatinei poate fi depozitat pentru perioade lungi de timp într-un loc răcoros întuneric.
Schema pentru umplerea în Volkovoi-Yelets gelatină
Completat materialul gelatină este tăiată pe un microtom de congelare. Feliile obținute au fost eliminate din gelatină, din cauza de fond de colorare run. În acest scop, secțiunile au fost plasate timp de 30 minute în soluție de hidroxid de potasiu 10%, la 37 ° C Apoi au fost pro-bufeuri in apa de la robinet și se colorează. secțiuni colorate cuprind alcoolul polivinilic sau glicerol greu ting.
Prepararea alcoolului polivinilic: pulbere polivinil alcool a fost spălat în etanol 96% (2 modificări), eter (3 modificări) și se usucă. Pentru a adăugat 100 ml de apă distilată 16 g de pulbere de spălat, se lasă să stea timp de 12 ore sa se umfle. În radiație masa este încălzită timp de 20-30 minute într-o baie de fierbere a apei. Pe suprafața densă cu bule turbiditate lichid Obra-zuetsya film, care este îndepărtată, iar soluția dosar-ruyut prin 4 straturi de tifon. alcool polivinilic, se poate utiliza Apelului ca mediu intermediar pentru preparate permanente după tăierea pe un microtom de congelare. Snachev la forfecare, indreptat pe sticla, alcool polivinil acoperit, și apoi, după formarea unui film subțire (6-12 ore), medicamentul este încapsulat în polistiren sau balsamul.
Prepararea glicerol-gelatină: a fost adăugat 7 g de gelatină 41 ml apă distilată și se lasă să se umfle 3-4 h adăugat apoi 50 ml de glicerină și 1 g de fenol .. Amestecul a fost încălzit pe o baie de aburi, amestecând continuu. Soluția a fost filtrată printr-un filtru grosier, turnat în pro-tag, astupate și depozitate în frigider.
Secțiunile de țesut, umplute în gelatină obținută în microtom zamorazhi-vayuschem, poate fi deshidratat în alcooli, în ilumineze carbol-xilen și încheie un balsam sau polistiren.
În alte scheme recomandă și alte concentrație de gelatină și durata șederii în ea obiecte.
Completați plastic solubil în apă
În scopul histochimie, în special pentru detectarea lipidelor și Fer-mente, bine dovedit tesatura completa plastice solubilă sintetice CAL - polivaks polietilen glicol, metacrilat de metil și altele.
Completați polietilen glicol cu diferite greutăți moleculare Rinerhartu-Abul-Heyu