Metode de cultivare anaerobilor metode pentru crearea unor condiții anaerobe
Tehnici de cultivare anaerobi
Moduri de a crea condiții anaerobe
a) mecanic - îndepărtarea (evacuarea) aerul din anaerob prin aspirație cu vid. Anaerobic apoi umplut cu un amestec gazos compus din 80% azot, 10% hidrogen și 10% dioxid de carbon;
b) chimic - absorbția oxigenului datorită substanțelor chimice (soluție alcalină de pirogalol, bicarbonat de sodiu);
c) biologic (metoda Fortner) - co-cultivarea anaerob și aerob. Astfel, într-un vas Petri cu (mediu Tseysslera cel mai des utilizat) mediu nutritiv dens este inoculat cu o cultură de anaerobilor, la alta - cultura aerobi care pot absorbi oxigenul puternic. Ca aerobi utilizate minunat cultură coli (marcescens). Parafiniruyut marginea vasului Petri;
g) proprietățile fizico-chimice - semănat materialul de testat pentru mediu special pentru anaerobi, de exemplu, mediu Kitty Tarotstsi și Wilson-Blair (fier sulfitul agar). Mediu înainte de seed regenerat (încălzit pe o baie de abur timp de 15 minute) pentru a îndepărta oxigenul.
Compozitie Mediu Kitty Tarotstsi:
-bucati de ficat - pentru adsorbția oxigenului;
-1% glucoză - pentru glicoliză anaerobă;
-semisolid agar - nu permite oxigenului în mediul interior.
Obținerea unei culturi pure de anaerobi
1. Metoda Weinberg (metodrazvedeny)
Pentru a obține colonii izolate de mediu anaerob Kitty Tarotstsi cu creșterea culturii bacteriilor anaerobe luate cu o pipetă Pasteur capetele sigilate și secvențial scufundat în primul tub pipetă 3 cu o soluție salină, apoi - 3 tuburi cu semisolid IPA zahăr topit. După incubare la temperatura de 37 0 C, în trecut, de creștere a bacteriilor anaerobe colonii izolate observate.
2. Metoda Peretz.
Una dintre ultima diluție a Weinberg în agar semisolid se toarnă într-un capac de vas Petri și închide fundul său, astfel încât pentru a elimina aerul. marginea Parafiniruyut a vasului Petri. Insamantarea materialului testat pe mediu sectoarele Tseysslera urmat de cultivarea anaerobă.
SARCINI DE TESTARE PENTRU VERIFICAREA CUNOȘTINȚELOR
Precizați toate răspunsurile corecte:
1. Pentru cultivarea bacteriilor anaerobe utilizate mediu fără anaerob:
a) agar cu sânge;
b) agar vitelin-sare;
2. La tip respirație anaerobă de bacterii nu este un grup de enzime:
3. acceptoare de electroni final prin respiratie aeroba de tip bacterie este:
a) oxigen molecular;
b) compuși anorganici;
c) compus organic;
g) compuși organici și anorganici simultan;
d) proteine mitocondriale.
4. Printre tioglicolic servește pentru a evidenția:
a) obligã aerobi;
b) obligã anaerobi;
c) aerobi opționale;
g) anaerobi facultativi;
5.Sreda Kitty Tarotstsi servește pentru a evidenția:
a) obligã aerobi;
b) obligã anaerobi;
c) aerobi opționale;
g) anaerobi facultativi;
munca de laborator №7.
Subiect: Fiziologia microbi. Principiile cultivării și identificării microorganismelor.
Studiu Obiectiv: Pentru a afla metoda bacteriologică de diagnosticare a bolilor infecțioase.
Studentul trebuie să știe:
1. Etape metoda de diagnostic bacteriologic.
2. Identificarea unei culturi pure de morfologic, tinctoriale,
proprietăți culturale și biochimice.
3. Mediul nutritiv pentru studiul activității enzimei.
4. bacteriofagi și aplicarea lor.
5. Clasificarea enzimelor.
Studentul trebuie să poată:
1. Asigurați plantarea materialului în mediul Hiss și BCH.
2. Determinarea sensibilității la antibiotice de CD-uri standard.
3. Verificarea purității culturii izolate.
Enzimele, clasificare. Enzime care scindează carbohidrați, proteine,
grăsimi, enzime de patogenitate. medii nutritive utilizate pentru
Studiul activității enzimatice a microorganismelor.
Verificați puritatea macro cultură izolată și microscopică.
Identificarea culturilor pure de bacterii asupra morfologice,
tinctoriale, culturale, biochimice, fagolizabelnym
proprietăți (etapa 3).
Bacteriofagi, utilizarea acestora pentru identificarea bacteriilor.
Determinarea sensibilității la antibiotice de CD-uri standard.
Prepararea frotiu, colorația Gram.
mediu de cultură insamantarea Hiss și BCH.
Demonstrarea mediilor de cultură pentru studiul enzimatic
Fenomenul Demonstrație bacteriofag pe solide și lichide
Izolarea Demonstrarea unei culturi pure de mobil
Metoda microorganismelor Shukevich.
Informații înrudite Matera
Studii de faza III. După 24 de ore, înclinația IPA detectată o creștere omogenă a plăcii solide gălbui. Pentru a testa puritatea flacoanele de cultură de izolare au fost preparate pătare colorate Gram și mikroskopiruyut. Pentru a evalua puritatea culturii, trebuie să vizualizați cel puțin 10 câmpuri de vedere. Fiind în frotiurile cu grozdevidno IPA teșite situat numai gram-pozitive coci, indică puritatea culturilor izolate.
Pentru a determina bacteriile biochimice inoculate izolat număr mediu de cultură de culoare (glucoză, lactoză, manitol, zaharoză, maltoză și BCH pentru a determina hidrogenul sulfurat și indol) sau determină aceste proprietăți utilizând discuri Sistem de hârtie indicatoare (ONI).
Culturile sunt plasate într-un incubator la 37 ° C timp de 24 ore.
Enzimele sunt catalizatori biologici extrem de specifice, care sunt esențiale pentru viața și reproducerea. Un număr mare de reacții care au loc în celulă bacteriană vii, indică existența unei cantități semnificative de enzime bacteriene. Enzimele - o substanță de natură proteină cu greutate moleculară mare. Unele dintre ele aparțin proteinelor, în timp ce altele sunt proteine complexe. Ele sunt construite din două părți ale porțiunii de proteină și non-proteina numita grupare prostetică. În compoziția sa pot include vitamine. nucleotidele atomii de fier și așa mai departe. Legătura dintre partea de proteine din gruparea prostetică enzimă și pot fi solide și fragile. Dacă există instabile datorită disocierii soluției de enzimă se produce și astfel pot fi eliberate grupare prostetică gratuit.
disociază ușor grup irosteticheskie de enzime numite coenzime. In mod normal, enzimele sunt împărțite în următoarele grupe:
1. Oxidoreductazele. toate enzimele care catalizează reacțiile de oxidare reducere.
2. transferaze. catalizează transferul diferitelor grupuri (de exemplu grupări amino, reziduuri de fosfat, și așa mai departe. d.
3. hidrolaze scindează prin hidroliză sau alți compuși Tm; această clasă include, de asemenea fosfatază și dezampnazy - enzimele scindate, respectiv de fosfat de amoniu sau grupări hidrolitice de diferiți compuși organici.
4. liaze, enzime, substraturi clivate din nonhydrolytic de anumit grup (de exemplu, CO, HO, SH3 și t. D.).
5. isomerazele cataliza rearanjamente intramoleculare în substrat.
6. ligases (sintetaza) - o clasă de enzime care catalizează îmbinarea împreună a două molecule cu trifosfatice comunicare pprofosfatnoy ruptură simultană (de exemplu, formând C - G, C - N sau C - S legătură).
Cea mai mare activitate enzimatică au saprofite; într-o mai mică măsură, această proprietate este exprimată în bacterii patogene. Studiul enzimelor bacterii patogene este extrem de important, deoarece bazat pe determinarea activității enzimatice a microbilor pot diferenția diferite tipuri și pentru a determina natura unei boli patogene. In plus, activitatea enzimatică a patogeneza microbiene și determină tabloul clinic al bolilor infectioase.
Enzimele sunt diferențiate pe exo și endofermenty. Exoenzymes cage alocate în mediul extern, procesele de divizare realizată macromoleculară compușilor organici mai simple disponibile pentru asimilare.
Enzime Bacteriile sunt împărțite în constitutivă și inductibilă. Primul grup include acele enzime care sunt sintetizate de către o celulă bacteriană, indiferent dacă, pe ce fel de mediu sunt cultivate bacterii. enzime inductibile produse de o bacterie dată numai ca răspuns la inductor specific prezente în mediu.
SARCINI DE TESTARE PENTRU VERIFICAREA CUNOȘTINȚELOR
Precizați toate răspunsurile corecte:
1. Proprietăți microbi saccarolitic de studiu pe medii:
d) agar cu sânge;
d) în API sistemul de testare;
e) sistemul de testare Lachema.
2. Activitatea biochimica a bacteriilor pe medii solide Hiss este reprezentat:
a) Schimbarea culorii mediului;
b) formarea unui precipitat;
c) formarea de gaze;
g) mediu de rupere.