Metode de cercetare sanitar-microbiologice

microbiologie sanitare moderne la indicație și sanitare de identificare ilustrativ și a agenților patogeni, la determinarea sarcinii totale microbiene a mediului își propune să utilizeze toate acele metode care sunt utilizate în laboratoarele de microbiologie de diagnostic:

microscopic - cu indicare și numărarea microorganismelor vii în obiectul de testare;

bacteriologic - eliberarea microorganismelor și identificarea lor;

biologie - infectarea animalelor susceptibile și metode de cercetare accelerate (RIF și colab.).

Pentru caracteristicile microbiologice sanitare versatile și complete ale mediului, este utilizat în general teste complexe. Acestea includ determinarea conținutului total de microbiană (numărul total).

contaminarea microbiană totală a obiectului caracterizat prin numărul de microorganisme în 1 ml de apă, un lichid sau un solid 1 g (produs). Determinarea numărului microbian este o metodă indirectă și dă o indicație asupra posibilității contaminării obiectului fiind patogeni studiați.

Există două metode de determinare a contaminării microbiene:

- Metoda de numărare directă la microscop;

- Metoda de însămânțare diferite diluții cantitative ale probelor și eșantioanele obiectului testat.

Prima metodă - o metodă de numărare directă, a microorganismelor din obiectul testat se efectuează sub microscop într-o cameră de numărare Goryaeva sau în celule special concepute pentru numărarea bacteriilor. Pretest a obiectului testat este procesat pentru a obține o suspensie omogenă. Pentru a ține mai bine seama de suspensia bacteriană din colorant adăugat.

A doua metodă - o însămânțare cantitativă metoda de material pe un mediu nutritiv solid - cel mai des utilizate. Din cele preparate diluții de zece ori în serie testat lichide sau șlam de 1 ml a fost transferat în plăci petri sterile (pornind de la o diluție mai mare, fiecare diluție a fost pipetată separat) și turnat topit și răcit la 45-50 0 C. agar simplu.

Trebuie remarcat faptul că atât metoda de determinare a conținutului total de microbiană includ relative și aproximative. Pentru a obține rezultate comparabile atunci când se determină numărul total de cercetare microbiană este realizată în conformitate cu standardul, specific pentru fiecare caz în parte a procedurilor reglementate de standardele relevante ale statului.

Identificarea în fiecare caz, un rebut obiect de mediu prin scheme efectuate studii elaborate pentru fiecare grup de microorganisme.

bacterii coliforme (Coliforms)

First Escherihia coli (E. coli) T.Esherih identificate în 1885 g de materii fecale de la pacient. E. coli este un rezident permanent de gros din intestine umane de mamifere, păsări și pești. Dintre bacteriile E. coli, împreună cu tulpini saprofite ale enteropatogenic apar, care ar putea provoca boli gastro-intestinale la om și animale.

Morfologie. Aceste tije polimorfe cu capetele rotunjite, cu o lungime de 1-3 microni, Gram care nu formează spori, mobile peritrichous (și fixat acolo). Forma capsulei numai serotipuri patogene (08, 09, 0101).

Proprietățile culturale. E. coli aerob sau anaerob temperatură optimă de creștere de 37-38 0 facultativa C, pH 7,0-7,4. Se dezvoltă bine pe un mediu nutritiv obișnuit - MPA, MPB, mass-media Endo și Levine. La MPA 24 ore apar suculentă, rotunde, cu margini netede și suprafețe netede (e-form) de colonie alb-gri. Forma BCH turbiditate intensă a mediului și se precipită pe fundul tubului este ușor de spart prin agitare.

Proprietățile biochimice (enzimatice) în bacterii E. coli sunt bine exprimate, spre deosebire de alte bacterii din familia Enterobacteriaciae care fermentează lactoza în acid și gaz, care este utilizat pentru diferențiere și identificare.

Prin bacterii coliforme bacterii clasificate ca genul 3: Escherihia, Citrobacter și Enterobacter. Ultimele două fel de aproape, în contrast cu tipul de Escherihia acestea au o valoare de sănătate limitată și nu sunt considerate ca un indicatori de poluare fecale proaspete, deoarece acestea sunt mai frecvent intalnite in sol, pe plante.

Toate clasificările pre-existente, acordat o mare atenție capacitatea de E. coli fermentează lactoza, așa cum se credea că bețișoarele habitatul laktozootritsatelnyh sunt apa, sol, plante.

Datorită valorii sanitare inegale indicativă a genurilor individuale acum pentru a diferenția Escherihia origine coli din alte coliformi fecali (Citrobacter și Enterobacter) complexul semnelor de abreviere marcate - TIMATS.

T - temperatura de testare (testul Eijkman);

Și - testul indoloobrazovanie;

M - reacția cu roșu de metil;

A - reacție la atsetimetilkarbinol (reacția Voges-Proskauer);

C - testul citrat.

Semne care aparțin acestui complex, definesc coliformi aparțin uneia dintre cele trei genuri: Escherihia, Citrobacter și Enterobacter.

Încercarea temperaturii. Pentru a confirma originea fecal izolate Escherihia coli, având capacitatea sa de a fermenta uglevodypri temperatură 43-440S. care depășește temperatura corpului, adică temperatura de testare. Cele mai multe genuri Citrobacter și Enterobacter bacteriile astfel capacitatea nu este.

Formarea de indol. Esența metodei se reduce la faptul că 98% din izolatele Escherihia coli capabilă să scindeze aminoacidul triptofan, care este inclusă în structura multor proteine ​​și peptone mediu nutritiv, cu eliberarea unui număr de produse, inclusiv indol. colorarea interacțiune roșu mediu nutritiv cu reactivi care conțin parametilamidobenzaldegid. Bacteriile din genurile Citrobacter și Enterobacter nu indolici forma.

Reacția cu roșu de metil (reacția Clark). Această reacție este utilizată pentru a determina intensitatea producției de acid în fermentarea glucozei în mediu. Ca indicator roșu de metil utilizat care își schimbă culoarea de la galben deschis la roșu la pH 5,0 și sub (peste pH 5,0 mediu rămâne galben pal). Se crede că tipic Escherihia coli fermentează glucoza la gaze acide și mai intens decât Enterobacter.

Educație atsetilmetilkarbinola. Cu această reacție, capacitatea microorganismelor de a forma în mediu cu atsetilmetilkarbinol glucoza. Forma sa Enterobacter, și Escherihia coli și Citrobacter nu posedă o astfel de abilitate.

Capacitatea microorganismelor de a forma în mediu cu atsetilmetilkarbinol glucoză determinat prin următoarea procedură: până la 5 ml de 4-5 zile de cultură veche, cultivate pe apă peptonată cu glucoză sau mediu Clark, a adăugat același volum de soluție de KOH 40%. Dacă există atsetilmetilkarbinola miercuri vopsit in culoarea roz.

testul Citratul se bazează pe capacitatea anumitor microorganisme asimila acidul citric și sărurile sale în mediu.

Citrobacter și Enterobacter cresc pe medii citrat și a primit numele tsitratpolozhitelnye bacterii și de origine fecală Escherihia coli nu utilizează citrat și sunt tsitratotritsatelnymi.

GOST exploatație test de citrat este furnizat sub controlul lapte și produse lactate asupra mediului Kozera.

Digestia de lactoză. Toate clasificările pre-existente, acordat o mare atenție capacitatea de E. coli fermentului lactoză. Această caracteristică a fost diferentierea in determinarea valorilor microorganismelor studiate sanitare orientative. Se credea că variantele laktozootritsatelnye difera de lactoza, care sunt habitatul solului, a apei, a plantelor.

Cu toate acestea, în intestinele umane și animale și în mediul înconjurător, puteți găsi diverse coliformi, care nu sunt tipice pentru genul de semne Escherihia. Acest lucru se datorează faptului că E. coli, sub influența diferiților factori de mediu este o schimbare a unor proprietăți biologice: pierderea capacității de a fermenta lactoza și carbohidrați să fermenteze la 43 0 C și chiar la 37 0 C.

Prin urmare, această caracteristică instabilă, astfel încât în ​​momentul în care etichetarea sau pentru a confirma originea izolatelor fecale de E. coli, capacitatea nu doar de a fermenta lactoza și capacitatea de a fermenta hidrații de carbon la o temperatură mai mare decât temperatura și animalele corpului uman, adică, temperatura de testare.

Complexul Testele de temperatură TIMATS și citratul sunt principala, cea mai stabilă permițând diferențiată originii CGB de bacterii coliforme fecale care trăiesc în mediul înconjurător.

Utilizarea CGB ilustrative sanitar

microorganisme în microbiologie sanitară alimentară

CGB considerat un indicator clasic al contaminării fecale a obiectelor de mediu. În funcție de scopul studiului ia în considerare întregul grup Escherichia coli sau reprezentanții săi individuali. Coliformilor din punct de vedere al valorii G.P.Kalina sanitar și igienic (1968) se divide in 3 subgrupe.

Primul subgrup poate include CGB în sensul larg al cuvântului (tije gram negative care cresc pe mediile universale) fermentează glucoza și lactoza sau glucoza numai cu formarea K și T (gaz de acid) la 37 0 C, care nu au valoare sanitare corespunzătoare.

Al doilea grup include bacterii având valoare sanitar-exponențială și care indică o contaminare fecal timp nedefinit, ele prezintă proprietățile caracteristice ale primului subset, dar este fermentat glucoza și lactoza sau glucoza la 43-45 0 C.

Al treilea subgrup includ bacterii sunt indicatori de contaminare proaspătă și cu siguranță fecale (E. coli). Acestea includ microorganisme având proprietățile caracteristice ale al doilea subset de bacterii, dar nu cresc pe mediu cu săruri citrat Košer și carbohidrați fermentează la 43-45 0 C.

În prezent, mulți cercetători cred că atunci când evaluarea calității apei și sanitare de alimente și valoare indicativă a produselor sunt reprezentanții oricare dintre subgrupele de E. coli care se pot multiplica la 43 0 C si glucoza ferment pentru a forma un gaz.

Enteropatogenic E. coli

În habitatul său natural - conținutul colonului - E. coli este un comensale și, desigur, joacă un rol pozitiv.

În același timp, intoxicații alimentare, cauzate de enteropatogene bacterii coliforme focare au fost descrise în mod repetat în literatură. Studii ale structurii antigenice a E. coli a arătat că agenții patogeni ai bolilor intestinale sunt anumite serotipuri de E. coli:

- vițeii adesea alocate serogrup 08, 09, 015, 0101 și colab;

- porci - 08, 09, 0137, 0138, și altele;

- o persoană 026, 055, 0111 și alte serogrupuri, având în principal somatice O-antigen. Aceste tipuri sunt enteropatogenic.

Enteropatogenic E. coli cauza unor boli: viței colibacteriosis, mastitei la vaci, boli intestinale acute la copii. Enteropatogenic E. coli tipuri sunt alocate și de la oameni sănătoși și animale. Există opinia că cauza majoră a bolii poate fi toxinele produse de bacterii coliforme in vivo și, prin urmare, bolile pot fi văzute ca toxicitate decât otrăvire.

Posibilitatea de apariție a bolilor la om depinde de mai mulți factori - doză microb vârstă bolnave, starea corpului, și altele.

Decontaminarea cărnii condiționate. Dacă există modificări degenerative la nivelul mușchilor, organele interne și carcasele pentru eliminare. În absența unor astfel de modificări, de a dispune numai viscere îndreptate și carcasele sunt folosite pentru prepararea produselor, într-un proces care asigură tratamentul termic.