Metoda preforme leykofiltrovannyh spălată eritrocite

VN Melnikova, EA Selivanov, GU Kiryanov, TA Efimova

Institutul de Cercetare Română de Hematologie și Transfuzie a Sîngelui, București

O metodă pentru recoltarea de mediu eritrocitar lipsit de impurități leucocite maxime, trombocite si plasma prin dispozitiv via leykodepletsii intern-leykofiltr Ull-01 și soluția izotonică de clorură de sodiu spălarea ulterioară, care să permită creșterea imunologice și siguranței infecțioase. Posibilitatea mediului de stocare la 4 ° C eritrokonservante SAGM.

Cuvinte cheie: celule roșii din sânge, leykodepletsiya, bani, proprietăți morfologice și funcționale, de siguranță.

Terapia gemokomponentnoy Principiul presupune utilizarea pentru corectarea diferitelor stări patologice medii maxime transfuzie sangvina cojit elemente „balast“.

În plus, o sursă de acumulare leucocite impurități în citokinele mediu eritrocitar și enzime proteolitice eliberate din dezintegrare rapidă de celule albe și având membranotropic (hemolitică) acțiune care afectează în mare măsură, condițiile de depozitare ale acestora. Prezența în leucocite mediu eritrocitare și trombocite este baza pentru formarea microbunches.

În ciuda faptului că fracțiunile sanguine imunologici sunt celule albe din sânge, în prezența mediilor plasmatice eritrocitare sunt, de asemenea, departe de a fi indiferent față de pacient. Incompatibilitatea dintre proteinele plasmatice donator si primitor apar alergice, anafilactice și anafilactoide complicații. Grupul de risc în acest sens, este format din pacienții cu deficit de IgA. În legătură cu cele de mai sus, pentru a reduce reactogenitatea și imunogenitatea medii eritrocitare la care sunt supuse mai „curățare“, prin intermediul unor bani sau leykofiltratsii în cazurile în care acestea sunt utilizate în programele de terapie transfuzie la pacientii hematologici, la pacienții cu transfuzii de sânge săraci și / sau antecedente de alergene, într-o lui copii și practica obstetrică.

Cu toate acestea, un dezavantaj al suspensie de eritrocite spălate chiar cu spălarea repetată este prezența leucocitelor donatoare reziduale (nu mai puțin de 30%), în absența plasmei impurității practic semnificativă și leykofiltrovannyh eritrocitelor - prezența plasmei și trombocite în mare măsură. Numai o combinație a acestor două tehnici permite obținerea de mediu eritrocitar eliminate maximal din ambele plasma proteine, anticorpi, citokine, plachete și leucocite, și fragmente ale acestora.

Scopul acestui studiu a fost de a dezvolta o metodă de obținere și studierea posibilității de mediu de conservare a hematiilor, la maximum sărăcit de alte componente ale sângelui. Având în vedere rezultatele studiilor noastre anterioare de a stabili spălarea leykofiltra și eritrocite din plasmă, precum și datele din literatură, se pare rezonabil la prima etapă piesa de prelucrat mediul nou pentru a efectua îndepărtarea leucocitelor din celule roșii din sânge (EM), iar al doilea - spălarea celulelor roșii. Atunci când o astfel de succesiune de proceduri pentru a crea condiții mai favorabile pentru întârzierea leucocitelor prin filtrare (în prezența plasmei), și devine posibilă eliminarea îndepărtării tehnologiei de spălare a leykotrombosloya subiect cu strat eritrocit, care reduce pierderea de celule roșii

Materiale și metode

Utilizat pentru filtrarea MR primul intern „leykofiltr-aparat pentru îndepărtarea leucocitelor din conservat din sânge și eritrocitar presei Ull-01“ fabricat de SA „SPE“ Interoko „(TU 94444-031-17121966-99). Pentru preforme leykofiltrovannyh eritrocite spălate utilizarea acestui dispozitiv este mai potrivit decât „Leykosep“ noi leykofiltra interne.

În conformitate cu „Ghidul pentru dispozitivul“ în recipient cu EM obținut din comasate zile de stocare de sânge 1-2 (îndepărtarea leykotrombosloya necesar), se adaugă 50-100 ml de soluție izotonică de clorură de sodiu și se agită cu grijă cu mediul eritrocitar. A trecut prin lichidul de spălare ansamblu de filtrare (soluție izotonică de clorură de sodiu), de capacitate corespunzătoare într-un volum de aproximativ 150 ml, încercând să înlocuiască complet aerul din corpul filtrului și spălarea acestuia. Apoi, corpul filtrului a fost umplut mediu eritrocitar, deplasând-l din soluția de spălare într-un recipient steril care este apoi îndepărtat.

Leykofiltratsiyu efectuată la o viteză de 44,7 ± 7,67 ml / min. Procedura a fost terminată reziduu de filtrare mediu de deplasare filtrat din materialul carcasei filtrului și leykofiltra (care trece soluție izotonă de clorură de sodiu 50 ml) într-un recipient cu mediul filtrat. Apoi, sigilate și deconectat ultima.

Pentru a evalua conținutul eficacitatea leucocitele am studiat tehnologia descrisă mai sus în sursa EM (camera Goryaeva) leucocite reziduale (o cameră Nageotte) și proteina plasmatică reziduală în eritrovzvesi rezultat (c folosind reactiv Larionova) și pierderea eritrocitelor în timpul leykofiltratsii și spălare. Controlul a fost spălat celule roșii din sânge fără leykofiltratsii prealabilă.

Rezultate și discuții

Pre-adăugarea de soluție de clorură de sodiu izotonică în EM, utilizarea sa pentru spălarea materialului de filtrare și să deplaseze mediu din reziduuri leykofiltra după filtrare, fără îndoială, să contribuie la eficiența spălării mediu filtrate suplimentar de proteinele plasmatice. Dispozitiv de spălat soluție de clorură de sodiu izotonică, înainte și după trecerea EM nu prin aceasta numai complică mediul preforme propus, dar, de asemenea, reduce pierderile sale (datorită levigarea eritrocitelor din carcasa filtrului și tuburile de legătură).

Rezultatele studiului de leucocite reziduale și a proteinelor plasmatice în încercările experimentale și de control sunt prezentate în tabelul 1.

în testul (filtrat a fost spălat) și control (spălate)

o serie de experimente în ziua recoltării

0,05 ± 0,028

Timpurie media leykodepletsiya eritrocit oferă, la cunoștințele noastre, nici o creștere în timpul conținutului eritrovzvesi stocării produselor de descompunere a leucocitelor, în particular mieloperok-oxidaza și lactoferină (Tabel. 2).

(Experimentare) și se spală eritrocitele (control) în timpul depozitării la temperatura de 4 ° C

0 0 ± 0,0 ± 0,0 ± 4,90 5,8

42,7 ± 20,85 181,5 ± 94,32 355,5 ± 39,24

0 0 ± 0,0 ± 0,0 8,0 ± 6,90

580,7 ± 414,95 1412,5 ± 1054,60 4242,5 ± 714,20

În ceea ce privește conținutul lactoferină, că a existat o variație semnificativă în rezultatele diferitelor experimente.

Pentru a studia posibilitatea conservării la 4 ° C leykofiltrovannyh spălat eritrocite în soluție SAGM destinate eritrocitelor native, 10 serii de cercetare au fost furnizate. spălarea Leykofiltratsiyu și celulele roșii au fost efectuate în conformitate cu „celule roșii din sânge metoda instrucțiune țagle timp, celule albe din sânge care este posibil lipsite de impurități (prin filtrare) și plasmă (prin spălare)“ aprobat de consiliul Academic RosNIIGT.

La finalizarea leykofiltratsii și soluție izotonică de clorură de sodiu dublu de spălare a hematiilor, după îndepărtarea supernatantului, s-a adăugat celulele roșii din seria experimentală eritrokonservant SAGM (2: 1). Suspensia rezultată a fost depozitată la 4 ° C timp de 21 de zile. Parametrii care caracterizează proprietățile morfologice și funcționale ale suspensiilor de eritrocite din SAGM eritrokonservante în timpul depozitării la temperatura de 4 ° C, sunt prezentate în tabelul. 3.

Datele indică faptul că la sfârșitul perioadei de observație de păstrare a eritrocitelor (ziua 21) nivelul ATP rămâne ridicat - mai mult de 80% din original - datorită conținutului adenina eritrokonservante SAGM. Cu toate acestea, în timpul depozitării suspensiilor au arătat o creștere semnificativă (mai mult de 5 ori până în ziua 21-lea), în concentrația de hemoglobină liberă și procentul de hemoliză a celulelor roșii. Nu este posibil să se recomande depozitarea suspensiilor filtrate ale spălate celule roșii din sânge pentru o astfel de mult timp, în ciuda faptului că nivelul hemoliza nu a atins valoarea limită (conform standardelor internaționale - 0,8%) și pentru a limita perioada de o săptămână, care deja este importantă pentru activitatea instituții de servicii de sânge. Organizarea pe termen lung eritrokonservanta de producție Modezhel-glyufosfat va permite stocarea completă leykofiltrovannyh eritrocite spălate timp de 21 de nopți ..

indicatori morfologici și funcționali suspensii filtrate

prin leykofiltr Ull-01 "Interoko" și se spală eritrocite

în SAGM eritrokonservante (n = 10) în timpul depozitării la temperatura de 4 ° C

± 1,40 0,508 1,21 ± 0,336 1,49 ± 0,378 1,80 ± 0,384

Suspensia de eritrocite spălate filtrate apare mijloace optime de terapie gemokomponentnoy pentru pacienții care nu sensibilizat numai la proteinele plasmatice, dar prezența anticorpilor anti-HLA, antigranulotsitarnyh specific și anticorpi antiplachetari; transfuzionnozavisimym pacienți pentru a preveni alloimmunization și leziuni pulmonare acute; părțile immunnokomprometirovannym pentru a preveni transferul unui număr de infecții virale; în pediatrie, inclusiv în cazul trombocitopeniei aloimună neonatală; pacienții cu antecedente de istorie obstetricale și ginecologice (sarcini repetate, avorturi); pentru prevenirea sindroamelor „transfuzie masivă“ și „sânge alogen“