fixare a complementului (RSK)

RAC are sensibilitate și specificitate ridicată, și este utilizat pentru:

1) diagnosticul serologic al bolilor infecțioase (p Wasserman - sifilis, p Bordet-Gengou - cronice gonoree etc) ...;.

2) identificarea unei bacterii si altele. Microbii.

RGC se referă la un complex de reacții serologice implicând altele decât AG și AT sistem hemolitic More (p. Hemoliza) care dezvăluie rezultatul reacției.

DGC efectuat în două etape, cu participarea celor două sisteme:

1) Primul sistem - K + AT + complementa - cauze completează obligatoriu în cazul în care corespunde AT AG. În cazul unor neconcordanțe AT și AH complement rămâne liber;

un al doilea sistem (indicator) - ser gemolitecheskaya (hemolizină) + eritrocite - prezintă rezultatul reacției din primul sistem: în cazul unei reacții pozitive în primul sistem (formarea complexului AH + AT + completează) în al doilea sistem nu apar hemoliza datorită absenței complementului (eritrocite rezolva în partea de jos a tubului). În cazul unui rezultat negativ în primul sistem este însoțit de un al doilea hemoliza, t. K. complexat eritrocite hemolizine + + complement (vezi. App. 3, Figura 7 și 8).

1) Serurile de testare (anterior inactivat termic la temperatura de 56 0 C timp de 30 minute);

2) antigen (obținut din suspensiile de omorâte lizat microbiene microbi AG complet, haptene, extracte de țesut lipide);

4) hemolitică Ser;

5) suspensie de 3% din celule sanguine roșii de oaie;

6) soluție salină;

7) seruri martor.

Complement. B este conținută în cea mai mare cantitate și este mereu prezent decât altele. Animalele ca un complement la RNC uscat și folosit ser proaspăt de cobai, t. K. în sângele complement de cobai. Înainte de introducerea titrare DGC trebuie efectuată în reacția complement hemoliză (eritrocite de oaie, complement seric hemolitice, fiz. Solution) și o doză definiție de lucru.

Titrul complement - cea mai mare diluție care cauzează complement complet care liza eritrocitelor în prezența serului hemolitic.

De lucru doza Complement - Complement număr care este mai mare cu 25% Tir.

Hemolitic prepararea serului prin imunizarea iepurilor cu o suspensie 50% de eritrocite de oaie. Serul rezultat a fost inactivat termic la temperatura de 56 0 C. Se determină titrul de lucru și dozarea.

titru seric - diluția serică maximă care determină liza totală a eritrocitelor în prezența complementului. Doza de lucru luând ser hemolitic titrul în triplu.

Reacția este plasată pentru diagnosticarea gonoreei cronice pentru detectarea anticorpilor la gonococ.

RNC 2 Sistemul implicat: sistem de bază - Serul de testare, antigenul, se completează și sistemul de suport, indicator sau hemolitic - eritrocitele hemolitice serice și oi.

Dacă sistemul primar generat un antigen anticorp specific +, adsorbită complement (se leagă la acest complex) și în al doilea sistem hemoliza apare.

Pentru reacția necesită:

1. Serul de test este obținut din sângele fost extras prin puncție vena antecubitală a pacientului. După coagulare, serul este aspirat într-un tub separat și inactivate 30 min la baia de apă 56 0 C.

2. Antigenul - suspendarea gonococi ucis.

3. Celulele sanguine roșii de oaie obținute din sânge defibrinat steril luate. Ele au fost spălate prin centrifugare de 3 ori cu noi porțiuni saline. În reacția folosind o suspensie de 3% din celulele roșii din sânge.

4. ser hemolitic preparat în prealabil prin imunizarea iepurilor cu celule roșii din sânge de oaie. Înainte de utilizare a titrarea serului.

5. Complement - ser de cobai proaspăt. Din inima de porc de guineea seringii nasasyvayut coagularea sângelui după serul a fost separat. Înainte de experiment vytitrovyvaetsya doza complementului de lucru. Pentru a face acest lucru, să ia dilutia principală complement de 1:10 și se toarnă în eprubete, 0,1 până la 0,5, după care volumul din fiecare tub a fost ajustat cu ser fiziologic la 1,5 ml.

recoltate simultan sistemul hemolitic - diluat în ser triplu titru hemolitica suspensie + 3% eritrocite de oaie. Ingredientele din diferite cantități și incubate timp de 30 de minute (amestec de sensibilizare), după care amestecul se adaugă la 1 ml în tuburi plasate într-un incubator timp de 30 de minute. Tuburi de control sunt 3:

Sistemul hemolitică 1. 1ml + 1,5 ml ser fiziologic;

2. 0,5 ml completează 1:10 + 0,5 ml suspensie eritrocitară + 1,5 ml soluție salină.

Titrului complementului a numit numărul minim, în care există mai mult de hemoliză. Pentru reacțiile iau decizii de lucru doză complement, a crescut cu titru față de 20-25% r. E. De obicei numărul de complement, care are un vitro penultima cu hemoliză. Creșterea dozei de complement necesară, deoarece activitatea de reacție a complementului poate fi suprimată oarecum celelalte componente ale reacției (ser antigen).

Formularea experienței de bază a DGC Bordet - Gengou.

La începutul îmbuteliat în flacoane de 2 și inactivată divorțată 1: 5 sub ser de testat. Apoi primul tub turnat antigen secundar ser fiziologic. După aceea, doza de lucru de complement adăugat la toate tuburile.

După amestecarea ingredientelor cu tuburi de trepied plasate într-un incubator la 37 0 C timp de 30 minute (lipire la cald). În trepied legare rece cu tuburi amplasate în ghețar la -4 0 ° C timp de 18 ore. După incubare sistemul hemolitic se adaugă la toate tuburile. Reacția este plasată într-un volum de 0,5 ml. Tuburile au fost din nou plasate într-un incubator timp de 2 ore, iar apoi a făcut rezultate pre-înregistrare. Fiolele rămân la temperatura camerei, iar a doua zi a indicat rezultatul final.

Gradul de intensitate reacție estimată la plusuri. întârziere brută hemoliza - patru plusuri (++++), part-time - trei și unu plus. hemoliză completă a indicat minus (-).

Acesta reprezintă diagnosticul de anticorpi sifilis, în scopul de a detecta și pentru a determina eficacitatea terapiilor specifice. Ea se bazează pe principiul de fixare a complementului Bordet-Zhang. Diferența esențială este Wassermann reacție antigen nespecific: se utilizează ca antigen extract lipoidă de organe de animale de la normal.

Pentru armarea Wasserman trebuie sa aiba un ser al pacientului, antigene de diagnostic cu reactivitate încrucișată № № 1 și 2, se completează ser hemolitic, eritrocite de oaie, soluție salină.

Diagnosticum № 1 - specific, treponemala.

Diagnosticum №2 - antigen nespecific, cardiolipina, care sunt extract înalt purificat din inimă de bovină, având o compoziție chimică constantă a lipidelor. Lipidele extrase din inimă, compoziția chimică aproape de lipoizi Treponema pallidum, astfel că, deși nu este specific, dar anticorpii contra spirochete fixe. Aceste antigene sunt produse la nivel central și sunt utilizate în reacție este diluat în conformitate cu titrul indicat pe etichetă.

Concomitent, experimentul principal de control a fost de 2: în mod clar negativ și seruri pozitive deschis.