Diagnosticul de laborator al campylobacterioza

În funcție de forma și localizarea procesului de imagini Campilobacterioză pentru studiu sunt de sange, lichidul cefalorahidian, fecale, vomă, etc. Campylobacter slab tolera transport. Pentru transportul probelor utilizate în mediul de transport de laborator bacteriologic Cary-Blair, mediu steril pentru controlul pH 8,5 sau alcalin apă peptonată.

Din materialul livrat prepara pete pe lamele și se colorează prin Gram. În prezența Campylobacter într-o probă pentru a detecta Gram frotiu subtiri tije curbate spiralată, S și C în formă de lungime de 0.5-8.0 microni, care sunt adesea conectate în lanțuri scurte într-o „aripa pescăruș care zboară“. Pentru diagnosticul rapid intestinale campylobacterioza indicativ fix frotiu subțire a flăcării fecale timp de 10-20 de secunde. colorate cu soluție apoasă fucsină de bază și se spală cu apă. Într-o astfel de perioadă scurtă de timp, o mare parte de a fi într-un frotiu microfloră de însoțire nu are timp să picteze, în timp ce Campylobacter pot fi ușor identificate prin morfologie caracteristică.

Campylobacter cresc la o concentrație de oxigen într-o atmosferă de gaz de 5 până la 17%. Insamantarea materialul de testare pentru a produce un mediu nutritiv dens preparat bazat pe agar eritritol, la care, după răcire la 45-50 ° C, se adaugă 5% sânge de oaie și hemolizata reactivi pentru a spori microorganismele aerotolerant (piruvat de sodiu, sulfat feric și metabisulfit de sodiu).

Pentru scutirea de la microflora însoțitoare utilizând două metode. Prima metodă constă în adăugarea la mediul de cultură un amestec de agenți antimicrobieni (polimixină, rifamapitsin, amfotericina B și fuzidin- ristomntsin), permițând excitatoare să aloce asociere de microorganisme. A doua metodă se bazează pe abilitatea Campylobacter de a trece prin filtre cu un diametru al porilor de 0,5-0,6 microni, în timp ce majoritatea florei concomitente prin filtrare întârziată. Filtrele cu membrane sterile, au fost plasate pe suprafața unui agar ciocolată sau sânge este aplicat acestora și câteva picături de 10% din suspensia de material. După 30 minute, filtrele îndepărtate, plasate cupa cu culturi în anaerobă sau desicator și cultivate la 42 ° C

Pentru a crea un condiții microaerofile de cultură, folosind mediul gazos din următoarea compoziție: 5% oxigen, 10% dioxid de carbon și 85% azot. In absenta amestecului optim de gaz este utilizat „vas cu lumânare. In unele cazuri, este posibil să se utilizeze pachete gazogeneratoare, principiul de funcționare se bazează pe absorbția catalitică a oxigenului în spațiul închis (anaeroba et al.) La o concentrație de 5,7% și generarea de dioxid de carbon prin mijloace chimice.

După 2-4 zile. incubarea pe medii nutritive solide cresc colonii de două tipuri. colonii cresc pe plat medii de cultură proaspăt preparată, umed, strălucitor, cu o tendință de creștere târâtor asemanator se raspandeste picături de condens. Atunci când reducerea umidității în mediile nutritive în timpul depozitării pentru medii dense cresc colonii de al doilea tip: dens, convexe, translucide, negemoliticheskne, 1-2 mm în diametru, este dificil de distins de colonii contaminante microflorei. În prezența unei cantități suficiente dintr-o cultură pură a frotiurilor patogeni preparate și colorate prin colorare Gram, determinată de mobilitatea microorganismelor „zdrobit“ picătură teste da catalază, oxidază, hidroliza hipuratul de sodiu și determinarea sensibilității la acid nalidixic. În prezența unei cantități mici de colonii izolate de Campylobacter colonie cu proprietăți distinctive de cultură trecute in acumularea în mediu de creștere solidă și au fost crescute în condiții microaerofile timp de 48 ore.

După obținerea unei culturi pure a agentului patogen da testele de mai sus și să producă identificarea finală a microorganismelor izolate

Structura antigenică Campylobacter structură complicată în particular termolabile Ar. Suprafața Major Ag prezentat lipopolizaharide (O-Ag) și fracțiunile proteice kislotoratvorimymi, care joacă un rol principal în serotiparea. Ag total absent enterobacterii. flagelar identificat H-Ar. Ca răspuns la acești anticorpi Ar Campylobacter apar în sânge în timpul primelor perioade (în ziua 5 a anticorpilor bolii titrului la fel de mare ca 1 :. 5000) și stocate în acestea pentru o lungă perioadă de timp după ce boala.

Studiile serologice joacă un rol important, în special în studiile epidemiologice pe scară largă. Diagnosticul cazurilor individuale rolul său este mic. RA este plasat cu autostrains sau vie cultura muzeu, rezultate mai precise sunt obținute cu cultura formică. titru semnificativ în RA - 1: 8-1: 32 apare în a doua săptămână. DGC este specific fiecărei specii, se impune utilizarea unor tipuri speciale de antigen. Cele mai sensibile sunt RIF și ifm aceste sisteme au fost dezvoltate în străinătate și în Rusia, loturile experimentale pentru Iha.

Diagnosticul de laborator de Salmonella gastroenterita.

patogenii principali: S. typhimurium, S. heidelberg, S. enterica, S. derby, etc.

Principalul agentul cauzal al salmonella enterica S. a devenit în ultimii ani. Vezi S.enterica are 7 subspecii: S.choleraesuis, S.salamae, S.arizonae, S.diarizonae, S.houtenae, S.bougori, S.indica.

a. Scaunele investigate încă din primele zile ale bolii și la descărcarea de gestiune a pacientului de la ctatsionara: prima dată - înainte de începerea tratamentului cu antibiotice, ulterior - după închiderea (nu mai devreme de 48 de ore). Izolarea Probability Salmonella din fecale mai mari la boală săptămâna 1, 2 și 3 săptămâni, este redusă în 2-6,7 ori, respectiv. Când forma de agent patogen gastrointestinal izolat cel mai avantajos din fecale de 1 săptămână. Sub impurități patologice în fecale (mucus, sânge etc.) gnoi acesteia includ o probă luată.

b. Voma și spălături gastrice au fost luate la un volum de 100 ml. Pentru a investiga primele porțiuni folosind apă de spălare obținută fără utilizarea de dezinfectanți. La vomitus pH acid înainte de însămânțare le-a neutralizat cu 10% spălări de bicarbonat de sodiu au fost centrifugate timp de 15 min la 3000 rot / min și precipitatul a fost folosit în continuare. În caz de eșec centrifugare permit însămânțarea materialului nativ.

în. Bilă (conținut duodenal) preluat în fiole sterile. Astfel colectate separat conținutul duodenal, bila chistica si bila din canalul biliar (porțiuni A, B și C). Mediul acid, o nuanță albicioasă, fulgi de a face materialul nepotrivit pentru examenul bacteriologic.

Urina a fost. Luate după organele genitale externe toaleta temeinică; prima porțiune este îndepărtată, iar restul în cantitate de 20-30 ml este colectată într-un recipient steril. Urina a fost centrifugat timp de 15 min la 3000 rot / min, pentru studii folosind sedimente. Cu toate acestea, însămânțare și se lasă materialul nativ. Deoarece cea mai mare frecvență de Salmonella detectate în urină la 2-3 săptămâni de boală.

Se examinează cu meningeale sau sindrom meningoencefalita. O probă (3,5 ml) a fost plasat într-un tub steril și livrat, de laborator, prevenind materialul de congelare (sticla termos poate fi utilizat). K. Materiale suplimentare pentru studiu - biopsii de măduvă osoasă (0,5-0,75 ml mediu de îmbogățire a inoculat), sputa (noduli purulente inoculate pe mediu și Ploskireva SC), rujeolă (scarificare, 1-2 picături aplicate fiere bulion aspirată și însămânțate pe bulion biliar), laptele de mamele care alăptează. Dacă este necesar (pentru intervenții chirurgicale, sau deces) pentru studiul și selectat de funcționare a secțiunii materialului. Greutatea probei trebuie să fie de cel puțin 20 g.

tampoane gard de echipament și alte obiecte ale mediului se realizează cu vată sterilă sau bumbac-tifon. Imediat înainte de a lua tampon umezit mediu de îmbogățire spălare (apă peptonată tamponată pH 7,0), îndoire a tubului; stoarce excesul de umiditate de pe partea laterală a tubului. Tampoanele luate dintr-o zonă de cel puțin 100 cm2, dacă nu există instrucțiuni speciale pentru obiect. Atunci când se iau tampoane din cojii Un tampon este utilizat pentru a studia 10 oua.

2. însămânțare pe medii nutritive

a. Mediu. Ca medii utilizate selenitovy îmbogățire bulion și mediu Kauffman 20% biliar bulion aminopeptidom magneziu selenitovuyu tetrationatovy mediu bulion Mueller. Printre media-diagnostic diferențial pentru materialul de cultură primară și însămânțarea cu medii de îmbogățire secretă selectivitate ridicată (de exemplu, agar cu sulfit de bismut sau verde strălucitor agar) sredneselektivnye (mediu Ploskireva slab alcalin agar nutritiv) și nizkoselektivnye (agar Endo și Levine>. Pe un suport pentru identificarea primară (agar Kligler, mediu combinat conform Olkenitskomu, mediu Russell) definește fermentarea lactozei (la mediu Olkenitskogo - și zaharoză), glucoză și capacitatea de a forma gaz de hidrogen sulfurat, g idroliz uree. Pentru identificarea biochimică folosind mediu cu uree Christensen, mediu cu uree prin Preuss, mediu Clark, mediu cu mediu carbohidraților pentru determinarea indoloobrazovaniya, mediul cu aminoacizi (lizină, ornitină, arginină), glicerol-un Stern magenta bulion și agar semisolid pentru a determina mobilitatea.

b. colonii suspecte (cel puțin trei) subcultivă în tuburi cu teșite sau un suport combinat (Olkenitskogo, Kligler, Russell). În cazul unui focar de colonii suspecte (în paralel cu pasajele de pe mediul combinat) realizate pe MPA însămânțare pentru producțiile ulterioare aglutinării de reacție. Rezultatele acestei reacții să fie confirmată în etapa de identificare biochimic este completă. În același timp, studiind morfologia și proprietățile tinctoriale ale bacteriilor, prepararea frotiurilor și colorarea Gram-le. În absența unor colonii suspecte cupe cu agar sulfit de bismut este lăsat în cuptor timp de încă 24 de ore, după care scanarea și detectarea coloniilor suspecte continuă să studieze. În caz contrar, lucrul cu culturi oprit. Pathogen paratyphi B poate da un solid cleios creștere sau fenomen valoobrazovaniya (formarea scarbosi colonii pe circumferința rolei).

în. Pentru mai multe de lucru selectat colonii ureazaotritsatelnyh bacterii, fermentează glucoza și zaharoză nonfermenting formarea H2 S. Culturile cu mediu Olkenitskogo reinsamantate în mediu cu Hiss manitol, 1% apă peptonată pentru determinarea indol și în agar semisolid pentru determinarea mobilității. La alocarea culturilor cu proprietăți enzimatice caracteristice pentru Salmonella, studia structura antigenică într-o reacție de aglutinare pe sticlă cu O - și antiseruri H-aglutinant diagnostic și definesc biovari. Conform rezultatelor reacției de aglutinare pune diagnosticul bacteriologic final și studiul a fost încheiat.

In mediu recent raspandita selectiv diferentiat xiloza-lizina-deoksiholatnye (XLD-agar) pentru Salmonella și Shigella (SS-agar); care a crescut pe coloniile de Salmonella sunt roșii cu un centru de negru (datorită formării de H2 S). Cu toate acestea, aceste mijloace nu sunt mai selective decât bismut agar cu sulfit agar sau verde strălucitor.

3. Studiile serologice au fost efectuate pentru diagnosticarea, precum identificarea și diferențierea diferitelor forme de purtător.

Diagnosticul de laborator al infecției cu Yersinia.

Y. pseudotuberculosis și Y. enterocolitica patogene la diferite animale și, uneori, pentru om, provocând limfadenita mezenterica, diaree cronică și septicemie severă

Rezultatele cele mai fiabile care să confirme diagnosticul, obține eliberarea de Yersinia a materialului patologic. Aceste examene bacteriologice sunt la fel de importante pentru diagnosticul diferențial al bolilor asociate cu febra, limfadenopatie și enterocolită.

Material - sânge, fecale, alimente, apă. Materialul este inoculat pe mediul de Endo Ploskireva, mediul cel mai optim pentru Y. enterocolitica - agar cefsulodina, irgazanom și novobiocin, și agar MacConkey. colonie media solidă de Y. enterocolitica sunt mici, lucioase, de multe ori bombat albăstrui în lumina transmisă. Când cultivarea (48 ore la 37 ° C) pe un mediu de colonii Endo sunt nuanța roz. Polimorfismul este colonii slabe. Cu inaintarea in varsta, Y. enterocolitica au observat de multe ori creșterea de scurgere.

Y. pseudotuberculosis colonii disting nuanță gri-gălbuie în lumina transmisă și mai puțină transparență. Când cultivarea (48 ore la 37 ° C), colonie pe un mediu pseudotuberculosis Endo Y. rămân incolore. formează adesea R-formă - convexe, suprafață aspră, dantelate cu (sau fără) care seamănă cu Y.pestis coloniei.

Toate tulpinile de Y. enterocolitica au o suprafață de enterobacterii Ar, în comun cu alți membri ai familiei. Conform O-antigenul tuturor tulpinilor sunt împărțite în 34 de serotip. De multe ori pacienții secretă O3 și O9 serotipuri, cel puțin - O6, O7, O8, O5.

Pathogen Despre antigen pseudotuberculosis au fost separate prin 8 serogrupuri (I-VIII) c 20 antigene O-factoriale. Prin O-antigen și antigenul H al acestui tip podrazdelyabt 13 serotipuri și podserovarov (Ia, Ib, IIa, IIb IIc, III, IVa, IVb, Va, Vb, VI, VII, VIII. De la pacienti tulpini adesea izolate aparținând la serovarului Ib, III și IV.

Tipizarea finală se efectuează folosind seruri aglutinare: Pentru Y. enterocolitica - O; pentru Y.pseudotuberculosis - O și N. sunt definite Anticorpii din serul pacienților cu RA la setarea depliată sau PHA. titru diagnostic de TPHA - 1: 400 și mai mare.