Determinarea activității enzimei - studopediya

Rata de reacție enzimatică este evaluată prin uzură sau viteza de substrat, sau rata formării produsului. O unitate de activitate a oricărei enzimă (E) care primește cantitatea de enzimă care catalizează conversia unor condiții optime în substratul 1mkmolya 1 min. Există o altă activitate specifică unitate:

1 katal - numărul E, care catalizează conversia 1 mol de substrat în 1 sec.

E 1 = 16.67 nkatal a enzimei.

Pentru a exprima activitatea enzimei utilizate și determinarea activității moleculare specifice. Activitate specifică - număr activitate fermenttivnoy E numărare pe proteină 1mg. Cu cat mai mare purificarea enzimei stepenb, activitatea specifică mai mare. Numărul de rotații ale enzimei (activitatea moleculara) - numărul de molecule de substrat au reacționat cu o moleculă de enzimă în 1 minut. Numărul de rotații variază în limite largi, de exemplu:

1) Karbongidraza (catalizează transferul H2 CO3) efectuează 36000000 rotații / min

3) fosfoglucomutază - 1240 rot / min

Pentru detectarea calitativă și determinarea cantitativă a activității enzimelor complexe utilizate următoarele metode:

OVER * H2 absoarbe lumina. PVK la radiații poate fi văzut pe OVER * H2. Lactatul de 1 moleculă 1 moleculă formată NAD * H2.

PESTE * H2 fluoresces intens. Intensitatea fluorescenței este proporțională cu concentrația.

10. Localizarea enzimei din celule și enzime organ MARKORNYE.

Toate enzimele și procesele metabolieskie compartimentate (separate și izolate). Intr-o celula normala este de aproximativ 1000 de enzime. interacțiunea enzimă comandate se realizează prin reglarea pe mai multe niveluri și compartimentarea. Cunoașterea localizarea enzimelor în celulă și determinarea activității lor în sânge, este posibil de a judeca gradul de distrugere a țesutului.

Kernel: localizat ARN - polimeraza NAD - sintaza, enzime implicate în replicarea ADN-ului.

Mitocondriile: enzime respirația tisulară, fosforilarea oxidativă, în enzimele de oxidare a acizilor grași, ciclul Krebs, sinteza ureei.

Lizozomi: enzime hidrolitice cu un pH optim în zona 5 (peptide, esteraza).

Ribozomii: enzime sinteza proteinelor.

EPS: enzime de sinteză a lipidelor, hidroxilare enzime enzime de detoxifiere (metilen -

regu, acetilarea), conjugare.

Membrane: Na -K ATPaza, adenilil, un transport substrat enzimatic.

Citoplasmei: enzime glicolitice, activarea aminoacizilor, sinteza acizilor grași.

Sistemele multienzimatic sunt localizate în structura organelle, astfel încât fiecare enzimă este situată în imediata apropiere a următoarei enzimă a secvenței de reacție. Mulțumită de asemenea compartimentarea celulei poate avea loc simultan două proces incompatibile: oxidarea acizilor grași la mitocondrii și sinteza acizilor grași în citoplasmă).