Alergii, diagnosticare alergie ingallyatsionnaya alergie, rinita alergica

Calificarea sistemului imunitar fagocitară este un element esențial al evaluării statusului imun, care este deranjat în multe boli inflamatorii și infecțioase. Pentru a evalua imunitatea fagocitară sisteme utilizează un număr de studiu și activitatea funcțională a neutrofilelor (mai puțin monocite) din sânge.

definesc:
  1. și procentul din numărul total, morfologia neutrofilelor sanguine
  2. Activitatea de absorbție a neutrofilelor prin captarea particulelor de latex, stafilococi, candidoza
    • Numărul fagocite calculat (numărul mediu de particule absorbite)
    • conta indicele fagocitar (procentul de neutrofile angajate în fagocitoza)
  3. Activitatea metabolică a neutrofile de recuperare nitro tetrazoliu albastru (NBT) la formazan
  4. Mobilitatea chemotactică - Evaluarea mobilității la chemotactice
  5. Activitatea de adeziv - prin lipirea suprafețelor și molecula de adeziune detectată utilizând anticorpi monoclonali
  6. evalua fenotipul neutrofile - receptori și CD-antigeni
  7. determinarea activității digestive (ucidere fagocitare a).

Cel mai important dintre acești indicatori sunt de absorbție și digestia activității neutrofilelor, deoarece acestea reflectă în mod direct capacitățile lor anti-infectios. Atunci când este utilizat pentru evaluarea activității neutrofilelor digerarea bacterii dificil de a studia această funcție. Metoda de bază de evaluare a digestiei bacteriene a neutrofilelor este distrugerea leucocitelor, inocularea mediului de cultură și numărarea coloniilor de bacterii. O altă metodă - evaluarea prin citometrie de flux de bacterii etichetate sau Candida. Deși această ultimă metodă este destul de precisă, dar necesită echipamente scumpe, care nu este disponibil pentru majoritatea laboratoarelor.

Am dezvoltat o metodă de evaluare a activității fagocitare imunității, și anume, absorbția și activitatea digestivă a neutrofilelor.

indicaţii

Toate tipurile de imunopatologie. boli primare si secundare, imunodeficiență alergice și bolile autoimune.

Monitorizarea imunologica a populației care trăiește în regiunile ecologic nefavorabile.

Controlul imunoterapie bolii, statusul imun dupa chimioterapie împotriva cancerului si radioterapie.

Dezvoltarea si desfasurarea studiilor preclinice si clinice de imunomodulatori.

O listă cu echipamentul necesar:

  1. Se centrifughează (1000 rpm / min).
  2. Camera Goryaeva sau solar.
  3. Sticlă de 10 ml tuburi de centrifugare (100 buc.).
  4. Termostat.
  5. Distribuitoare automate 20 - 200 microlitri.
  6. Microscop cu mărire de imersie în ulei.
  7. sticlă Obiect (50 buc.)
  1. Soluția fiziologică de clorură de sodiu în tampon fosfat (PBS) pH 7,2, sau soluție Hank.
  2. Cultura de Candida albicans. albastru de metilen. Azur. eozină

Descrierea metodei de utilizare a tehnologiei

Prepararea Candida albicans

Se prepară o suspensie de lucru de spălat cu Candida (5.107 celule în 1 ml). Evaluează viabilitatea Candida și de a folosi numai suspensia care conține cel puțin 96% din Candida albicans vii. La această suspensie a fost amestecată 0,05 ml și 0,1 ml vopsea Candida (un amestec de volume egale de soluție apoasă 0,2% de eozină și albastru de metilen 0,1% în apă distilată), după 10 minute celule în suspensie au fost centrifugate la 1000 rot / min 10 minute într-o centrifugă OPN-3, supernatantul este aspirat și precipitatul de a face un frotiu, uscat și numărate sub microscopie cu lumină 200 Candida. Estimați procentul de zi, cu o culoare roz deschis și neînsuflețite, albastrul de metilen pictat, celulele de drojdie.

Prepararea suspensiilor leucocitare pacientului

Evaluarea activității de absorbție a neutrofilelor

Evaluați indexul fagocite (PI), numărul fagocitară (FCH) și în uciderea celulelor moarte% după 30 și 60 de minute de incubare. Toate probele sunt duplicate. La fiecare tub de 0,1 ml cu plasmă face pacientul test și se adaugă 0,05 ml de suspensie de lucru Candida. Probele au fost incubate într-un incubator de 30 și 60 minute la 37 ° C. Apoi, suspensia celulară este centrifugată 5 minute la 1000 rot / min, 0,05 ml aspirat supernatant, peleta resuspendată și aplicat unei picături de 0,05 ml la marginea diapozitiv cu grijă. Apoi, capătul lustruit al doilea diapozitiv frotiului picătură de sticlă făcând frotiu subțire, uscat, fixate cu etanol și colorate cu azur-eozină (Romanovsky) timp de 5-10 minute.

Hamburger calcula un indice fagocitar pentru aceasta sub microscopie cu lumină prin scufundare se calculează procentul de fagocite cu Candida absorbiți.

Wright găsi numărul fagocitare (numărul mediu de Candida fagocitați pe fagocite): contoriza numărul de Candida în aceste fagocite și împărțit la numărul de fagocite. În studiul acestor indicatori evaluați 200 de neutrofile.

Evaluarea Candida uciderea de neutrofile

La 0,05 ml de suspensie de celule rămase în tub se adaugă 0,2 ml de apă distilată pentru a liza celulele sanguine. Apoi, 0,5 ml de cerneală (un amestec de volume egale de soluție apoasă 0,2% de eozină și albastru de metilen 0,1% în apă distilată) pentru a colora fagocite moarte Candida timp de 10 min. suspensie de celule în continuare a fost centrifugat la 1000 rot / min, timp de 10 minute, supernatantul a fost aspirat și peleta de a face un frotiu, uscat și numărat sub microscopie optică, procentul de fagocite moarte albastru de metilen, celule de drojdie colorate. Live au Candidei o culoare rozalie ușoară. Evaluează 200 Candida.

Un studiu a doi indicatori de sistem imunitar fagocitară 30 indivizi sănătoși (donatori) au arătat că, după 30 minute de incubare indicele de fagocitare a fost 74,6 + -10.3%; Număr de fagocite - 2,7 + -0.35; Killing - 26.3 + -4.1%.

Prin urmare, sistemul normal indici fagocitare imunitate folosind Candida albicans sunt după cum urmează:

  • indicele de fagocitară de 65-85% (74,6 + -10.3%)
  • Număr fagocite 2,5-3,0 (2,7 + -0,35)
  • uciderea de 22-30% (26,3 + -4.1).

Studiul acestor indicatori în timp pentru a evalua rata de liza celulelor absorbite. Creșterea indicelui fagocitare și numărul fagocitară cu o ucidere stocată indică digestia deficit de celule de drojdie. Scăderea indicelui fagocitare și numărul fagocitară după 30 minute indică deficitul de absorbție. Reducerea indicelui fagocitare și numărul fagocitară 60 poate fi observată printr-o mină sub liza viguroasă a celulelor de drojdie.

precizie fapt remarcabil al metodei noastre propuse pentru estimarea parametrilor sistemului imunitar fagocitare. La compararea rezultatelor obținute cu metoda noastră (index sânge integral de neutrofile fagocitară după 30 minute de incubare + 74.6 -10.3%), iar rezultatele folosind citometrie in flux (indice fagocitar neutrofilelor donatori de sânge total după 30 minute de incubare de 75 + -10%) [ 4] a remarcat similitudinea absolută.