virus de afișare

Virusurile se multiplica doar in celulele vii. Prin urmare, cultivarea virusului este realizată în corpul animalului, embrionat sau în cultură de țesut

Cultivarea virusului la animale. Cel mai adesea, această metodă este folosită pentru izolarea virusului nu este capabil de a provoca efecte citopatice în culturi celulare și nu se poate reproduce în ouă embrionate de pui (unele virusuri arbovirusuri, rabie, febrei aftoase, virusuri Coxsackie, virusul coriomeningitei limfocitare). Materialul de testat este introdus în organism cu tropismul virusului la țesuturi specifice.

Cultivarea în ouă embrionate de pui. In țesuturile embrionului si membranele acestuia, sacul vitelin multiplica multe virusuri patogene. Când cultivate reprezentat tropismul virusului la anumite tesuturi. Pentru cercetare ia fluidul alantoidian; acesta este aspirat cu ajutorul unei pipete runflat membrană chorio alantoidian. Prezența virusului în lichidul amniotic si alantoidian embrionii infectate se determină în reacții imunologice.

Cultivarea în cultura de țesuturi. In prezent, cea mai mare aplicarea practică a primit culturi monostrat de linii celulare tripsinizate și continue primare. Sursa de celule sunt tesut embrionare precum tesutul extras din uman în timpul funcționării. Cultura celulară Cele mai utilizate în mod obișnuit derivate din țesuturile normale și canceroase. Liniile utilizate pe scară largă de celule Hela derivate din cancerul de col uterin; Hep-2, obținut dintr-o tumoră malignă a laringelui; HF - din tesutul de cancer oral. După cultivarea în cultură de țesut, o indicație a prezenței virusului este efectuat pentru a identifica degenerarea celulelor specifice. Pentru aceasta, cultura de celule infectate este privit la microscop mărire mică și se înregistrează efectul citopatic al virusului asupra celulelor, care se poate manifesta în formarea de celule gigant polinucleare și symplasts; degenerarea celulelor și dezvoltarea leziunilor proliferative celulare, precum și formarea de incluziuni intracelulare în citoplasmă sau nucleul celulelor infectate sau culoarea probei (prezența sau absența creșterii sistemelor de testare sensibile).

culturi celulare primare - acest monostrat culturi, care sunt capabile să reproducă numai în generarea primară. Pentru culturi primare de materii prime utilizate: țesuturi embrionare sau mature de animale.

Culturile de celule poluperivivaemyh - sunt preparate din diferite țesuturi fetale umane din culturi primare. Celulele poluperevivaemyh culturi se multiplica rapid, supraviețui până la o lună, cu o schimbare de zi cu zi a mediului. Sunt foarte sensibile la multe virusuri.

cultură celulară continuă - o cultură de celule care se pot multiplica la infinit in vitro prin cultivarea. La pasaje lungi pentru proprietățile lor inițiale pot fi modificate. Pentru a păstra proprietățile inițiale ale culturii mamă a celulelor crescute în substanțe nutritive saltele medii, passiruya zilnic.

Indicarea virusului citopatic (CPP) de acțiune. CPE - un set de modificări morfologice și funcționale în celula sub influența virusului intracelular, ceea ce duce la perturbarea metabolismului celular, pentru a opri sinteza inhibării sintezei proteinelor NK. Vine eliberarea și activarea enzimelor lizozomale celulare care cauzează degradarea componentelor celulare, și anume dezvoltarea CPE, care este exprimat în simplastoobrazovanii, includerea educației, nucleu pycnosis.

Indicarea CPE virusului. Infecția în studiu se realizează culturi monostrat (monostraturi celulare) imagini. Pentru acest microscop de scanare sub strat de celule continuu scăzut de mărire. Lichidul de cultură a fost aspirat cu grijă și se pipetează cu pipeta 0,1 ml de material de testat a fost adăugat la tub și mediul de cultură până la 1 ml. Pentru a controla numărul de tuburi este lăsat curat. Tuburile au fost incubate la temperatura de 37 0 C și zilnic mikroskopiruyut pentru a detecta CPD.

Indicarea virusului în reacția gemadsorbtsii. Gemadsorbtsiya - este abilitatea culturii celulare, care este infectat cu un virus, adsorb eritrocite. Acest fenomen este asociat cu abilitatea de a fi încorporate în membrana proteinelor specifice virusurilor hemaglutinina celulelor infectate cu virus, care se unesc cu eritrocite datorită receptorilor speciali și sunt adsorbiți pe suprafața celulelor infectate.

Indicarea unui eșantion de culoare a virusului. proba colorate pe baza înregistrarea modificărilor de culoare în mediul care fenolrot (LED) și plasate în materialul de testat conține. În cazul în care materialul are un virus, ea distruge monostratul de celule si ei devin nesposobnymy a metaboliza. Proprii sistemele metabolice virus nu, prin urmare, produsele metabolice acide nu eliberează, iar mediul de cultură nu se schimba culoarea. În cazul în care materialul nu este un virus, celulele monostrat vii, functia, secreta produse acide ale metabolismului, ceea ce duce la o schimbare a culorii mediului, devine galben.