Utilizarea metodelor genetice în diagnosticul bolilor infecțioase

Pentru diagnosticarea bolilor infecțioase ale genetice excitatoare marker de metode este genomul său. Acizi nucleici metode de indicare utilizate pentru diagnosticul infecțiilor virale pentru a identifica bacteriile (mai ales cele care sunt dificil de distins) și pentru a determina poziția exactă taxonomică a microorganismelor. Metodele permit detectarea unui microorganism în materialul de testare (apa, alimente, materiale de la pacient), pentru prezența ADN-ului, fără izolare în cultură pură.

hibridare moleculară se bazează pe capacitatea de ADN și ARN legat specific (hibridiza) cu fragmente de oligonucleotide complementare, sintetizată artificial și marcat cu o enzimă, izotop sau fluorocrom. Aceste fragmente sunt numite sonde.

Pentru hibridizare moleculară a moleculei de ADN țintă unwinds, un fir este fixat pe un filtru special, care este plasat într-o soluție care conține proba marcată (fig. 4). Crearea unor condiții favorabile de formare a helices duble. În prezența complementarității între sondă și ADN-ul țintă, ele formează între ele un dublu helix. După terminarea hibridizare și nelegat de spălare a produselor deținute complex de detectare format cu eticheta corespunzătoare.

reacție în lanț a polimerazei (PCR), bazat pe multiplicarea numărului de copii (amplificare) a unei anumite porțiuni de ADN, catalizată de enzima polimerază ADN (Fig. 5). PCR - aceasta este o metodă foarte sensibilă, teoretic, este suficientă pentru a obține rezultatul prezenței într-un material al unei singure molecule de ADN.

PCR constă din trei etape principale: pregătirea probei de testat (ADN sau ARN de izolare) adecvat PCR și detectarea produs PCR (ADN amplificat). Atunci când se utilizează ARN ca șabloane pentru PCR pe acest șablon de ARN pre de enzimă dependentă de ADN polimeraza ARN (revers transcriptaza sau revers transcriptazei) a fost sintetizat ADN complementar, care este apoi utilizat ca matriță în PCR. O dată la bacteria thermophilis Thermous a reușit să obțină ADN polimerază, care, împreună cu polimeraza are de asemenea revers transcriptaza activitatea, ar putea combina aceste două reacții. Această versiune a PCR este utilizat pe scară largă pentru detectarea virusurilor ARN, expresia genelor virale, bacteriene, si celulare in ARN lor.

Pentru PCR necesită cinci componente de bază: polimeraza 1) ADN enzimatic; 2) o pereche de primeri de oligonucleotide; 3) un set de nucleotide; 4) ADN-ul a fost copiat; 5) ionilor Mg + 2. necesare pentru funcționarea ADN polimerazei.

Pentru amplificarea (adică, sinteza șablon ADN) selectați porțiunea cea mai conservatoare, o genă unică. Pentru a începe sinteza pe un șablon ADN folosind doi primeri (lungime scurtă 20-30 baze de fragmente ADN monocatenar), 3 ¢ ADN complementar aminoterminal al genei dorite. ADN-ul izolat al materialului de testat este încălzit. In acest caz, ADN-ul este împărțit în două direcții. S-au adăugat Amorse, apoi amestecul de primeri ADN și răcit. Astfel, prezența primerilor se leagă la porțiunile sale complementare (recoacere) într-un amestec de ADN a genei dorite. Adăugați ADN polimeraza și nucleotide. La o temperatură optimă pentru funcționarea ADN polimerazei, nucleotidele sunt atașate la primeri terminali 3“a generat un fragment specific (amplicon). După acest ciclu se repetă din nou, cu numarul de gene ADN va crește de fiecare dată când un factor de 2. Calc că 30-40 cicluri de una matrice pot fi preparate pe 10 august amplicons. Reacția este efectuată într-un dispozitiv special - un termociclu. După 30-80 cicluri de acumulare de copii de ADN de identificare ale acestora se realizează prin electroforeză în gel și vizualizate în lumină UV după colorare cu bromură de etidiu. Pentru a confirma agentul patogen ADN afiliere poate fi efectuat hibridizarea ADN.

Punctele de pe „Genetica de Microorganisme“:

. In 1946, J. Lederberg și E. Tatum descrie fenomenul de conjugare - transferul materialului genetic din celula in celula prin contactul direct al bacteriilor. Studiile au fost efectuate pe tulpina E. coli K12. Transferul de material genetic se produce tol1 la o direcție; o singură celulă este un donator și celălalt - destinatar.

Transformarea (de la transformatio - conversie) modificarea proprietăților transferului bacterian informații proces rezultaate celulă, în care un fragment de ADN penetrează kletkidonora legate de bacterii.

- recombinare în bacterii

In bacterii, precum si in studiul geneticii organismelor superioare, concepte de obicei disting: genotip, modificarea fenotipului

Implementarea transferul de material genetic de la o celulă donator la bakteriiretsipientu folosind fagi a fost numit transductia. fagic Traisdutsiruyuschy poartă fragmentul de ADN din ADN-ul gazdei anterioare și introduce în același mod ca și propria lor molecula de ADN sensibile la acesta în celula bacteriană.

In cromozomi plus, unele bacterii sunt detectate determinanți genetici extracromozomial suplimentari, numite plasmide. Până în prezent, o mare varietate de plasmide găsite, cel mai studiat sunt factorul sex (F), factorul de rezistență multiplă la medicamente (R), factorii bakteriotsinogeny (Col), plasmida în E. sinteza de control coli, enterotoxină (Ent), furnizarea de produse hemolizinei ( N1u) care determină sinteza antigene de suprafață (K88, K99), și altele.

- Ce este genetica. ADN-ul.

Genetica - știința eredității și variație. Ereditatea rămân constante caracterizează tipul de proprietăți în generația t. E. Reproducerea propria lor natură. Variabilitatea - diferențele în proprietățile dintre indivizi din aceeași specie.

Sub mutație (de la mutatio - schimbare) au însemnat schimbări ereditare stabile în genotipul fenotinicheski manifestat ca trăsătură alterată. Mutațiile de bază cuprind modificări calitative sau cantitative secvențe ADN de nucleotide care pot apărea în timpul vieții bacteriilor sub influența factorilor endogeni sau acțiunea mutagenilor chimice sau fizice.