Tehnici de cultivare anaerobi

Cerințe pentru mediu.

Orice mediu nutritiv trebuie să îndeplinească următoarele eschafoda-mentelor: conține toate elementele necesare pentru reproducerea microorganismelor în formă ușor de digerat; au o umiditate optimă, vâscozitate, pH-ul și să fie izotonică coș-Moznosti transparent. Fiecare mediu de cultură sterilizat într-un anumit fel, în funcție de compoziția sa.

5. tehnicile de însămânțare de bacterii de pe un mediu nutritiv lichid și solid. Termeni și condiții de cultivare a bacteriilor. Aparate pentru cultivarea microorganismelor.

Un instrument versatil pentru producția de culturi este etsya buclă bacteriană. În afară de ea, pentru însămânțare lovitură de cuțit la schimbarea ac special-bacteriene, și pentru culturile de pe vase Petri - realizate din sticlă sau spatulă metalică. Pentru culturile de material lichid, împreună cu o buclă este utilizată, iar pasta-Rovsky pipetă gradat.

Prin subcultivarea tubul de cultură bacteriană luate în mâna stângă și dreaptă clasping dop din bumbac IV și degetele V, se îndepărtează, care transportă peste flacăra arzătorului. Țineți degetele Dru-gimi ale buclei aceeași mână, câștigă-l pe Therians ma sămânță și apoi închideți dopul flaconului. Apoi, un tub cu o buclă oblică agar luare cu un material de sămânță, coborându-l până condensului în mediul de jos Cha stimul, și o mișcare partiționat zigzag rial de mate pe suprafața conică a agarului. Scoaterea buclei, a ars marginea tubului și închideți-l cu o siguranță. Buclă sterilizat într-o flacără arzător și a pus într-un trepied. Eprubete cu culturile nadg creditate cu indicare data semănatului și natura semințelor de mat-rial (număr de studiu sau numele culturii).

Culturi „gazon“ produce o spatulă pe un mediu nutritiv de agar într-un vas Petri. În acest scop, deschiderea capacului stâng mână pentru animale de companie-Leu sau inoculului pipetat este aplicat pe suprafața de agar nutritiv. Spatulă apoi transportate prin flacără ars-ki, se răcește în interiorul capacului și triturat de material pe întreaga suprafață a mediului. După incubare, însămânțare apare o creștere continuă uniformă a bacteriilor.

Tehnici de cultivare anaerobi.

Pentru cultivarea bacteriilor anaerobe este necesară reducerea potențialului redox al mediului, cos-la condiții anaerobe, adică. E. conținut redus de oxigen al mediului și mediul său. Acest lucru se realizează folosind metode metodov.Fizicheskie bio-logic fizice, chimice și. Bazat pe cultivarea microorganismelor într-un mediu lipsit de aer, care se realizează prin: 1) însămânțare în medii care conțin reducții și substanțe ușor oxidabile și 2) adâncimea de însămânțare microorganismelor în dense tatelnyh medii pi 3) îndepărtarea mecanică a aerului de la nave, în co-toryh cultivate microorganisme anaerobe;

4) înlocuirea aerului în vasele de orice indiffe închiriere de gaz.

Ca reducerea substanțelor utilizând frecvent-out bucăți (aproximativ 0,5 g) din țesuturi animale sau vegetale (ficat, creier, rinichi, splină, sânge, cartofi, bumbac). Pentru a reduce-zhanie conține oxigen într-un mediu de cultură, înainte de semănat se fierbe timp de 10-15 minute, apoi se răcește rapid și Zali-vayut top o cantitate mică de ulei vas-Linova steril. Înălțimea stratului de ulei în tubul 1, vezi substanțele despre fel de ușor oxidabile utilizat glyu-capră, lactoză și sodiu formiat.

microorganisme Adâncimea de semănare în medii dense metoda pro-hassle conform Vignal - Veyona care constă în protejarea mecanică culturilor de oxigen anaerobi aer. Luați un tub de sticlă de 30 cm lungime și dia-metru 6,3 mm. Un capăt al tubului este tras în ka-capilară într-o formă de o pipetă Pasteur, iar la celălalt capăt face constricție. Restul capătului larg al tubului este introdus într-un dop de bumbac. Tuburile cu topit și răcit la temperatura de 50 ° C. Agar nutritiv plăci însămânțat cu materialul de testat. Apoi nasasyvayut agar însămânțat în tuburi sterile Vignal - Veyona. end-Capilar-lea al tubului este etanșat într-un tub de arzător cu flacără și plasat într-un incubator. Acest lucru creează condiții favorabile pentru creșterea anaerobii mai stricte. Vyde-ment pentru un tub de colonie crestat napilni-com, aseptic, la un nivel de colonie, lo torc și buclă sterilă de captare colonie și transferat într-un tub care conține un teren propice pentru cultivarea departe-Sheha și studia în pure produc vide.Udalenie aer prin pomparea mecanică a primelor dispozitive speciale - anaerosta-ing, în care se plasează paharul cu semănatul anaerobilor. Deplasabil anaerobă reprezintă cilindru metalic-tolstosten-lea, cu acoperișuri de sticlă sol bine-tuple (cu garnitură din cauciuc), echipat cu un manometru de vid și un robinet deviator. După plasarea plăcilor inoculate sau tuburile anaerob de aer a fost îndepărtat prin aer vid nasosa.Zamenu gaz indiferente (azot, în corpolent, argon, bioxid de carbon) poate fi realizată în același anaeroba prin deplasarea aceasta din metodele ballona.Himicheskie de gaz. Bazat pe absorbția aerului tip acru într-un vas sigilat (anaero articole, exicator) substanțe precum pirogalol sau Na2S204 hidrosulfit de sodiu.

Metode biologice. Bazat pe un aerobi strict shared-ai anaerobi capacită ilor. Pentru această placă de agar din cupă diametru înghețat excizat cu un scalpel steril bandă lărgime-agar clorhidric de aproximativ 1 cm. Două ture într-o singură placă de agar jumătate de disc. Pe de o parte a unei plăci de agar însămânțat vayut-aerobi, astfel S. aureus utilizate frecvent sau marcescens. Pe de cealaltă parte a însămânțat erob Ana. Marginile plăcilor sunt sigilate cu plastilină sau topit se toarnă parafină și plasat într-un incubator. În prezența unor condiții adecvate va razmno aerobi-cup chirci. După ce tot oxigenul din ușor Paharul spațiul va fi folosit de ele, vor creștere anaerobi (3-4 zile). Pentru a reduce spatiul aerisit picior în mediu cupa este turnat, eventual, mai gros.

Metode combinate. Pe baza unei combinații de fenomenologic phi, chimice și metode biologice pentru crearea anaerobă.

6. Proprietăți bacterii culturale. colonii caracteristice. Pigmenți bacterii.

Proprietăți culturale bacterii

nevoile nutriționale, condițiile de creștere și natura creșterii bacteriilor pe bacteriologic. medii. Cerințele nutriționale includ surse de factori de carbon, de azot și de creștere, capacitatea bacteriilor de a crește pe medii nutritive definite, condițiile de creștere -Ph, Eh, O2 densitate concentrare, presiunea osmotică a mediului, temperatura de creștere; în creșterea caracterului - rata de creștere (rapid, lent), look-Brodarea pentru medii lichide, solide și semisolide, modificări, la- apar în componentele sale individuale din timpul creșterii microbilor sau a mediului. Informații despre KS sunt utilizate în selectarea și cultivarea metodelor de identificare a k-Brodarea selectat.

. K. m sunt mari sau mici, netede sau încrețită, lucioase sau mate, cu marginile netede, lobate sau alte brumăriu sau, în formarea de pigmenți, colorate în diferite nuanțe de galben, portocaliu, rosu sau alte culori ..; colonii de ciuperci sunt acoperite cu un strat pufos. Caracteristici colonie de formă, culoare și altele. De obicei incluse în descrierea tipului de microorganism.

7. Creșterea și reproducerea bacteriilor. Faza de multiplicare bacteriană într-un mediu închis (cultură discontinuă). Cultivarea continuă.

Activitatea vitală a bacteriilor este caracterizată de o creștere - vor ming componente structurale și funcționale ale celulei în sine și o creștere a celulei bacteriene, precum si multiplica-niem - autoreproducere, rezultând o creștere a numărului celulelor bacteriene co-lichestva în populație.

Bacteriile se reproduc prin fisiune binară în jumătate, rareori prin înmugurire. Actinomicete, cum ar fi ciupercile, sunt spori timp de multiplicare. bacterii actinomicete fiind ramificate, se multiplică cu fragmentarea celulelor filamentoase. Bacteriile gram pozitive sunt divizate prin incarnarea partițiilor sinteză colab care separă interiorul celulei și Gram - prin gâtuiri, rezultând în figurile gantelevid-TION formare, din care sunt formate două celule similare.

Diviziunea celulară este precedată de un tip de replicare bacteriană chro-MOS de semiconservative (ADN dublu catenar cu lanț este deschis și fiecare filament este completat de complementar audio-Tew), ceea ce duce la o dublare a moleculelor de ADN ale nucleului bacterian - nucleoid.

replicarea ADN-ului are loc în trei etape: inițiere, Elon gatsiya sau propagarea în lanț și de terminare.

Multiplicarea bacteriilor într-un mediu nutritiv lichid. Bacterie, semănate în special fără a schimba volumul mediului nutritiv, reproducerea, consuma substanțe nutritive, ceea ce duce la epuizarea continuare a mediului nutritiv și pre-abrevieri sunt creșterea bacteriană. Cultivarea bacteriei într-un B-tem numit cultură lot și cultură - periodice. În cazul în care condițiile de cultură sunt menținute prin furnizarea continuă de mediu proaspăt și ieșire de același volum de lichid de cultură, cultură, disponibilitatea unei culturi numite continuă și - continuă.

Cand bacteriile care cresc într-un mediu nutritiv lichid se observă aproape de fund, sau o suprafață difuză (în film de formă), creșterea culturii. Creștere cultură discontinuă de bacterii crescute într-un mediu nutritiv lichid este divizat în mai multe faze sau perioade: 1. lag faza 2. faza logaritmică de creștere; 3. Faza staționară de creștere sau kontsentratsiibaktery maximă; 4. faza de moartea bacteriilor.

Lag fază - între însămânțare și începerea reproducerii bacteriilor. Faza logaritmică (exponențială) perioada de creștere este în intensitate impartirea bacteriilor. Apoi, faza staționară de creștere rezultă. la care suma celulele-zhiz incapabile rămâne neschimbată, ceea ce face nivelul comute maxi Finalizarea procesului de creștere a fazei moarte bacterii. caracterizat dispariția treptată bacterii în condiții de epuizare a sursei mediu nutritiv și acumularea l în metabolismul bacterian. Reproducerea bacteriilor pe mediu solid. Bacteriile crescute pe mediu nutritiv solid pentru a forma colonii izolate, LARG rotunjite cu netedă sau aspră margine s (S- și R-forme), diferite consistențe și ECE-ta-dependent pigment bacterii.

Mulți pigmenți au en-două antimicrobiene, acțiune antibiotikopodobnym.

Mai multe cultivare perspektivnonepreryvnoe. Esența ei constă în faptul că în fermentator este păstrat condiții constante de mediu, astfel încât microorganismele să rămână într-o stare fiziologică particulară. Fed mediu nutritiv proaspăt și mediu în exces este îndepărtat din produsele metabolice, faza de creștere exponențială este menținută. Dacă utilizați un fermentator, atunci vorbim despre proces omogen-continuu pentru cultivarea de producători. Dacă se folosește bateria, acesta este un proces bi-continuu, deoarece în fiecare fermentator, care este conectat la baterie, pentru a menține o stare constantă. În cultivarea continuă a microorganismelor off schimbare faze de dezvoltare culturii. In astfel de procese, mediul de cultură din debitul sistemului și îndepărtarea mediului de cultură trebuie să fie ajustată la concentrația celulară a rămas constantă. În condiții sterile, o metodă continuă asigură conservarea culturii într-o stare activă fiziologic pentru o lungă perioadă de timp.

8. Metode pentru izolarea și identificarea unei culturi pure de bacterii aerobe.

Metoda de diluții succesive. propus de Louis Pasteur, el a fost unul dintre primii care a fost utilizat pentru separarea mecanică a microorganismelor. Acesta constă în realizarea materialului diluții seriale succesive care conține microbi în mediu nutritiv lichid steril. Această metodă este de lucru destul de laborioasă și imperfectă, deoarece nu vă permite să controleze numărul de celule microbiene care se încadrează în tuburi la diluții.

Metoda Drygalski este metoda mai avansat, care este distribuit pe scară largă în practica zilnică de microbiologie. În primul rând, pe suprafața mediului într-un vas Petri cu un material pipetă sau test de buclă este aplicată. Folosind o spatulă de metal sau un pahar frecat bine în mediul înconjurător. Cupa în timpul însămânțării menține prividkritoyu și rotit ușor pentru a distribui materialul uniform. Nu este sterilizarea spatulă, țineți le-a luat materialul într-un alt vas Petri, cu necesitatea - în a treia. Numai după această spatule dezinfikuyuchy este imersat într-o soluție sau imersat în flacăra arzătorului. Pe suprafața mediului în prima ceașcă observăm o creștere de obicei confluentă bacteriilor în al doilea - o creștere densă, iar al treilea - creșterea coloniilor izolate.