proliferarea activă și celulele canceroase de san organizator nucleolari ca indicator al

Un manuscris

Uporov Aleksandr Valerevich

ACTIVITATEA și proliferări CELULELOR YADRSHKOVYH ORGANIZATORI de cancer de san ca indicator al COMPORTAMENT BIOLOGICE TUMORILOR

14.00.15 - anatomie patologică

Efectuate la Institutul Oncologic im.prof. NN Ministerul Petrov Sănătății al Federației Ruse; București

Membru al RAS, doctor în medicină, profesor K.M.Pozharissky

Consilier științific: Doctor în medicină, profesor VF Semiglazov

MD, profesor E.L.Neyshtadt MD B.M.Ariel

București Mechnikov Academia Medicală

Cu teza este disponibilă în Biblioteca fundamentală a Academiei

MD

penetrarea în țesutul precursor al ADN marcat - aproximativ YuOmkm), care a afectat semnificativ rezultatele studiului.

Astfel, în prezent există un complex de ordin metodologic, FIR abordări pentru un studiu complet al stării proliferativ al tumorii și condițiile sale de celule neoplazice (Gradul

1) Examinarea celulelor de activitate de proliferare si a cancerului de san in comparatie NW „cu aceiași parametri de tumori benigne și a leziunilor mamare non-neoplazice.

2) un studiu comparativ al activității și proliferarea armelor nucleare în cancerul de sân primar și recurența și a metastazelor sale la ganglionii limfatici regionali.

4) determinarea fracției celulelor cancerului de san in faza de sinteza ADN-ului și mitoza și în consecință durata relativă a fazelor ciclului mitotic

5) determinarea relației dintre activitatea și proliferarea armelor nucleare în tumorile mamare

6) Un studiu comparativ al tumorilor PA folosind o varietate de markeri de proliferare, în scopul de a selecta cel mai informativ și cel mai optim pentru utilizarea pe scară largă în studiile onkomorfolo-CAL.

Principalele prevederi ale care sunt luate de protecție VA

1) Utilizarea combinată a trei markeri de proliferare (BrdU,

YAAPK și K1-67 antigen), reflectând diferite faza MTs permite determinarea indicelui B fază și magnitudinea bazinului proliferativ al tumorilor, și pentru a evalua proporția de celule în fază G și mitoza, respectiv, și duratele relative ale fazelor.

2) Proliferarea Performance când am folosit trei markeri sunt caracterizate prin înaltă (z - .73-0.94) corelație directă de încredere.

3) Indicatorii PA de cancer de san de 5 ori mai expuse mai sus, decât în ​​benigne și de a crește în mod semnificativ în tumorile recurente, precum și cu creșterea gradului de malignitate histologică. ^

4) PA între cancerul de sân primar și metastaze la un asemenea ganglionii limfatici regionali are o corelație pozitivă semnificativă,

dar, în cele mai multe cazuri, indicatorii de proliferare in metastatic mai mici decat in tumorile primare.

5) În faza S a cancerului de san - cea mai lunga faza a CM, care ocupă aproximativ 45% din acesta în conturile mitozei pentru aproximativ 5% din timp. Odată cu creșterea de cancer de san PA este crescut durata relativă a mitozei, lungimea relativă a S-fază rămâne constantă.

Nauchvaya Votava. În primul rând PA a efectuat un studiu cuprinzător, evaluat prin încorporarea BrdU în ADN-ul atunci când este administrată pacienților nucleele celulelor tumorale, prin YAAPK expresie și antigenul Ki-67 și activitatea NW in cancerul de san. Luând definiția PA • Tehnica tumorii cu încorporarea BrdU în ADN-ul nuclear în timpul replicării sale in vivo, cu experimentul de precizie, comparativ cu indicatorii pro-diferativnymi stabilite în alte două moduri, nu a demonstrat o corelație directă ridicată fiabilă între toți markerii studiate de proliferare. Folosind trei markeri de proliferare care reflectă evenimentele metabolice care au loc în faze diferite MP, a făcut posibilă obținerea valorii fazei S și indicele pool proliferative cancer de sân, și pentru a evalua proporția de celule în faza de ADN de sinteză și mitoză și durata relativă a acestor perioade MC.

Compararea PA tumori cu caracteristicile lor clinice și morfologice a condus la stabilirea unor noi fapte. Astfel, se arată că tumorile recurente sunt caracterizate printr-o proliferare celulară mai mare decât tumorii primare și a metastazelor în ea, dimpotrivă, a scăzut în comparație cu cancer de sân primar, deși o corelație directă între indicii lor proliferante stocate-tive. PA DPI intensificat odată cu creșterea gradului de malignitate histologică. Când etom'ona gistotipicheskoy asociată cu diferențierea defectuoasa a tumorii și nu reflectă citologic și atipii nucleare și polimorfism (diferențierea tsitotipicheskaya).

In prezentul studiu, sa constatat că durata mitozei, care ia o medie de aproximativ 5% din lungimea MP, crește

INDICA în legătură cu creșterea AP; în același timp, durata B-faza, care ocupă aproximativ jumătate din MP, este o valoare constantă, fără a schimba în funcție de cantitatea de celule proliferative.

Activitatea se corelează cu ratele YAO de proliferare studiate de noi și este o caracteristici structurale și funcționale caracteristice valoroase ale tumorii.

Praktteskaya semnificație. Importanța determinării activității de proliferare a armelor nucleare și pentru a evalua gradul de tumori maligne de cancer de san. Pentru a estima tumora PA este de a defini K1-67 optimă de exprimare a antigenului. În primul rând, aceasta reflectă cel mai important indicator al celulelor reproductive - piscina proliferativă a tumorilor. În al doilea rând, utilizarea acestei metode nu necesită nici o expunere inainte de a pacientului și face posibilă obținerea unor rezultate complete în studiul materialului de arhivă sub formă de blocuri de parafină. În al treilea rând, în această metodă, există o colorare clar, extrem de selectivă a celulelor proliferante și calcularea lor este simplă.

Activitatea YAO este o caracteristică importantă a comportamentului tumorii, ca un indicator al intensității sintezei ribozomale și în mod clar corelarea cu indicatorii PA poate fi o capacitate suplimentară de estimare a parametrilor de reproducere a celulelor tumorale. În plus, ușurința de determinare a activității armelor nucleare face posibilă utilizarea în laboratoarele de patologie și birouri, nu trebuya'spetsialnogo echipamente.

În teză sunt numeroase linii directoare privind utilizarea metodelor de determinare a activităților armelor nucleare în oncologie și morfologia PA și.

Sgarumyaura și domeniul de aplicare al tezei. Teza este prezentată pe 208 pagini de text dactilografiat și constă din introducere, literatura de specialitate, descrierea materialelor și a tehnicilor, rezultatele lor proprii de cercetare, discutarea rezultatelor, concluzii și lista de referințe. Lucrarea conține 31 de tabele, 24 și 19 microfotografii generate. Indexul bibliografică include 289 referințe.

MATERIALE SI METODE

Tumorile mamare 58 (tumori benigne 10, 48 PME, dintre care 41 sostavil.IPR) au fost studiate și aceste 15 metastazarea tumorilor la ganglionii limfatici regionali.

Pentru a determina indicele de proliferare (dn) pentru a încorpora BrdU în nucleele celulelor in vivo timp de aproximativ 1 oră. pentru a elimina pacienților cu tumori au fost administrate intravenos într-o doză de substanță este de 200 mg / m2 de suprafață corporală în soluție salină (utilizarea în IAB activitatea clinica permis Comitetului farmacologic al RF Minzdravmedprom). BrdU Incorporated a fost determinată în secțiuni de parafină metoda indirectă cu imunoperoxidază folosind anticorpi monoclonali de șoarece la uridin halogenati IU-4 (laborator Caltag San Francisco, CA, USA). La o diluție de 1: 250, după soluția de denaturare a ADN -2H- de acid clorhidric.

■■■ ■■ - 8 - „• YAAPK detectate în secțiuni de parafină immunoleroksidaz NYM metoda indirectă, folosind anticorp monoclonal de șoarece RS10 (DAKO, Danemarca), la o diluție de 1: 100. Am folosit două metode de calcul: 1) să ia în considerare toate celulele zkspressiruschie YAAPK, 2), numai celulele au fost înregistrate cu o expresie intensă a antigenului.

antigenul Ki-67 a fost determinată în secțiuni de parafină prin metoda imuno-noperoksidaznym indirectă folosind policlonal de iepure anti-uman Ki-67 antigen (DAKO, Danemarca), la o diluție de 1: 200, după demascare antigen prin fierbere secțiuni într-o oala sub presiune în tampon citrat.

Celulele PA a fost determinata de celule de numărare și SH1 1000-150Ö exprimate în procente. În plus, cifrele mitotice numărat printre celulele Ki-67-pozitive (MIT) și rezultatele au fost exprimate ca procent.

Durata relativă a fazei S. U produs de formula K. Sasaki și colab. (1988):

SP NOS durata relativă a fazei S x 1OOZ

SP Ki-67 MP relativă durată durata relativă a mitozei prin formula: __ MIT durata relativă a mitozei x 100% Ki-67 SP - durată • relativă MC argentophile proteine ​​acide asociate cu benzi YAO, colorate prin metoda și WMHowell DABlack (1980 ) modificarea HHMamaeva și colab. (1984). Numărul de contorizat nucleoli și a granulelor de argint în nucleoli și karyoplasm 1! 00-150 nucleilor celulelor tumorale.

REZULTATE ȘI DISCUȚII

Datele obținute cu ajutorul celor 3 „diferiți markeri de proliferare a celulelor indica faptul ca celulele PA PMS aproximativ 5 ori mai mare decat cea a tumorilor benigne (Tabelul 1) observația noastră a confirmat datele din literatură (Lelle RJ et al, 1987; .. Dervan PA și colab. ; .. Wintzer N.-O. et al), cu toate acestea, se atrage atenția asupra unui mare răspândire a celulelor cancerului de san valorile PA de la valori mici care nu depășesc pe cele ale tumorilor benigne, valori foarte mari egale cu 65-68% celulă po- „prezent pulyatsii. observație subliniază un drept pronunțat cancer de san gennost, care trebuie luate în considerare la determinarea prognosticului

Tabelul 1. Activitatea proliferativă a celulelor tumorale de san.

Marker Index Testul Mann-Whitney

proliferarea proliferatsiiD p

MEAL Întorcându 1.97 (0.80-4.90) 10,95 (2.20-26.90) 0,000002

Expresia YAAPK: -General 30,11 (11,57 - 54,78) • 44,87 (23,19 - 67,58) 0005

-Intensiv 6.21 (1.08-13.79) 25.71 (7.50-53.70) 0.000003

Expresia K1-67 4,75 (1.60-11.76) 24.89 (8.64-65.16) 0,000001

Tabelul 2 Activitatea proliferativă a cancerului mamar invaziv ductal in functie de tumora AAP.

Indicatorul SP (NOS), p. ISchYaAPKobsch); p SP (YaAPKint); ISCH K1-67 p) p

Gradul de malignitate histologică:% I 6,08 II 9,60 III 15,27% 0,0001% 35.54% 50.86% 50.31% 15,21% 29,08 0,001% 34.19% 0,0001 14,27% 22,18% 36,11% 0,00001

Capacitatea de a forma structuri tubulare: medie -mare -Low% 6,32% 14,00% 7,91 0.002-36.66% 38.86% 50.93% 0.002. 15.06% 19.44% 33.52% 0.0001. 13.89% 18.15% 33.40% 0.0004

Activitatea mitotică; -Low medie -mare 5.95% 9.53% 15.60% 36.66% 0,0001 48,68% 0,0005 51.02% 15.61% 27.69% 35.49% 0, 0,003 14,82% 23,64% 34,81% 0,0002

atipie nucleară T polimorfism: Joasa -means -Înaltă 5.82% 11.45% 11.54% 0.34 32.83% 46.19% 47.56% 0.04 14.13% 27.88% 27 94 13.24% 0,04% 26,29% 28,40% 0,05

Notă: Tabelul prezintă valorile medii ale indicatorilor PA. p-mediana de testare.

De asemenea, nu au evidențiat relația dintre celulele PA si IPF afectate de prezența metastazelor ganglionilor limfatici regionali (p-prandiale .2-0.2 și p pentru antigenul Ki-67; testul Mann-Whitney). Aceleași rezultate au fost obținute de către alții (Ashton-Key M. și colab;. Pinder S. E. și colab;.. Pietilainen T. și colab). Probabil metastazele FWffi mai puternic influențată de alți factori, cum ar fi schimbări în adeziunea celulară, starea matricei extracelulare (Pietilainen T. și colab.), Factori de invazie celulară enzimatica activitate și drugie► neoangiogenesis

Din cunoștințele noastre, nici o relație între celulele de cancer de san PA si potente tumorale invariante-invazive.

PA indicatori de tumori mamare, determinate de markeri de proliferare 3, au avut un grad înalt de corelație (tabelul 3). Pe de o parte, ea face modele mai rezonabile le-am găsit. Pe de altă parte, o corelație ridicată între indicatorii care reflectă diferitele faze ale CM, sugerează o fază de întâlnire celulele canceroase, fara MC bloc, în nici una dintre ele.

Am obținut durata relativă a celulelor din faza S FMK egal 44,64 (24.40-89.21)% umiditate, în general, aproape de rezultate K.Sasaki et al. (1988) - 0,58 + 0,28. Conform datelor noastre, durata relativă a celulelor RMYA mitozei este 5.04 (1.00 -11.20)% MC. În acest caz, am constatat că durata relativă a mitozei, crește semnificativ cu celula PA, menținând în același timp o lungime constantă a fazei S. Se poate referi la: 1) celule de întârziere în mitoză sau 2) reducerea proporțională a Si

02 și fază S, menținând în același timp durata mitozei (McGurrin J.F. minute și colab., 1987). Datele publicate pe acest subiect sunt puține și contradictorii. Având în vedere aceste I.A.Alova (1972) sugerează că adevărata mitoza alungire se produce din cauza întârzierii celulelor tumorale în metafaza datorită mecanismului tiol ruperea diviziunii celulare.

Conform datelor noastre, valorile tuturor parametrilor activității YAO, cu excepția numărului de o- nucleoli, RSH în celule este semnificativ mai mare decât în ​​celulele benigne (Tabelul 4) care corespunde datelor altor aBTopoB (Smith Î.I Crocker J .; Dervan PA și colab.). Cu toate acestea, cantitatea de suprapunere a valorilor granulelor de argint în tumorile benigne și maligne face imposibilă utilizarea activității YAO indicator ca un criteriu absolut pentru diagnosticul diferențial al acestor tumori.

Numărul vnutryadryshkovyh granule și cantitatea totală de argint în miezul granulelor este în aceeași relație cu AAP ASI caracteristicile clinice și anatomice RSH că toți indicatorii

Tabelul 3. Coeficienții de corelație între indicatorii SHZH proliferare celulară folosind diverse markeri (test Spirmona rang de corelație, r).