Noțiunea de proprietăți culturale, enzimatice si tinctoriale microorganismelor - microbiologie generală
cercetare bacteriologică aplicat pentru detectarea bacteriilor patogene în materialul de la animale infectate sau carcasele lor, detectarea microbilor din obiecte de mediu, hrana pentru animale, carne și altele asemenea. D. Natura și metoda de metoda de prelevare a probelor pentru transferarea materialului în diferite boli infecțioase variază, dar există unele generale dispoziții care trebuie să fie luate în considerare, indiferent de obiectul de proprietăți de cercetare și materiale. Materialul de testat posibil este colectat aseptic într-un recipient steril și transportat la viitorul apropiat cu documentul de însoțire la laborator (așa cum indică data luării natura și sursa materialului, principalele semne clinice și modificările patologice, scopul studiului). de cercetare bacteriologică include trei metode principale: microscopie (bacterioscopia) tampoane Pathol. sau alte materiale de testare .; izolarea unei culturi pure de bacterii, urmată de studiul morfologic. Cultura-biochimice. proprietăți antigenice și patogene ale bacteriilor.
Examenul bacteriologic incepe cu microscopie, care permite detectarea materialelor microbiene pentru a studia morfologia lor (forma, mărimea, structura). Când microscopie Pathol. Frotiurile material sunt preparate din organe sau țesuturi ale frotiurilor subțire al. materialelor investigate, acestea sunt uscate în aer, fixate (de obicei, o flacără) și vopsite prin diverse metode, în funcție de punctul central al studiului. Pentru detectarea anumitor bacterii (de exemplu. Agentul cauzator al tuberculozei) Pathol. materialul este pretratat cu una dintre metodele de îmbogățire pentru creșterea concentrației de bacterii din ea și a scăpa de microbi străine. Pentru detectarea rapida a bacteriilor folosite microscopie fluorescentă. Pentru a studia motilitatea bacteriilor datorită prezenței flageli, folosind microscopie tineri (12--24 h) o cultură vie folosind picături sau preparate zdrobite picături suspendate. bacterii de mobilitate pot fi, de asemenea, stabilite pe baza caracteristicilor de creștere în cultură semisolide IPA.
Izolarea culturii bacteriene se realizează prin materialul de plantare pe medii nutritive. Pentru a facilita și a accelera eliberarea de bacterii, folosind pitatsya diagnostic și electivă diferențial. mediu (solid și lichid), pe ryh anumitor tipuri de bacterii produc creșterea lor caracteristică (aceasta inhibă creșterea microbilor străini). Decuparea pe pitatsya strâns. mediul bacteriologic. plăci realizate prin frecare cu ajutorul unei spatule pe câteva picături de la suprafața materialului a mediului. In studiul organelor parenchimatoase de animale moarte sacrificate sau bucata corp calcinat sau flambiruyut, foarfeci și pensete sterile apoi este incizat purtata suprafata crestate pe pitatsya. mediu în ceașcă. În materialul de cultură mediu lichid face o pipetă Pasteur. Pentru a obține creșterea colonii izolate de microbi pe mediul solid și separat de bacterii studiate organismelor transportate prin metoda Drygalski însămânțare fracționată asociată. Plăcile și tuburile inoculate au fost incubate într-un termostat la o creștere optimă a fiecărei specii de bacterii din D-rate (adesea 37 ° C) timp de 1--2 zile, în unele cazuri (bacterii tuberculoza) - până la 3-4 săptămâni. Cea mai lungă și complexă etapă și B. .-- genuri și specii de identificare a culturilor izolate. Învață singurele culturi pure obținute după trecerea unei colonii și având morfologic identice. și proprietăți tinctoriale. proprietăți antigenice studiate în reacția de cultură aglutinare. Determinarea proprietăților patogene ale bacteriilor se realizează prin infectarea culturii animalelor de laborator sau a filtratului de cultură (toxina determinată).
După examinarea proprietăților bacteriilor corela datele primite cu atributele de bacterii existente în cadrul sistemelor de clasificare sau microbi determinanți (E. Burgi, 1974 ;. NA margini silyshkov-1949 etc.) și comportamentul lor genuri și specii de diferențiere. În caz de dubiu, să efectueze material de studiu de follow-up. B. Rezultate și. înregistrate în examinarea jurnal sau formă de laborator, în concluzie la roi indice care microb izolat din materialul testat. Diagnosticul bolilor infecțioase se poate face numai prin luarea în considerare epizootologich. Klinichev. și patologoanatomich. date.
Cultura Microorganism, o populație de celule de microorganisme (bacterii, drojdii, actinomicete, ciuperci), crescute în lichid sau pe un mediu nutritiv solid. Distinge între cultură pură și în amestec. În cazul în care mediul cresc un fel de microorganisme, o astfel de cultură se numește net; creșterea microbiană în prezența a două sau mai multe specii - amestecate. Puritatea Cultura este determinată prin microscopie frotiu preparate din culturi în lichide și pe medii solide, luând în considerare uniformitatea coloniilor pe mediu solid, precum și prin studierea proprietăților culturale, biochimice și antigenice ale microorganismelor.
Cultura bacteriană - populația de bacterii viabile crescute pe pitatsya. mediu. bacterii culturi pure izolate din SUCESIUNE sursa de la un anumit moment este numit. tulpina. Cele mai frecvente tulpini cu caracteristică. Cul și biol. proprietăți inerente acestui tip de bacterii este numit. de referință, și sunt folosite pentru a le compara cu culturile nou alocate. Identificarea și diferențierea bacteriilor poate fi efectuată numai în cazul în care există o cultură pură. Prin urmare, în prepararea unei culturi mixte de a recurge la diferite metode de tratament sale de germeni străini. tulpini de referință utilizate în producerea de droguri de diagnostic si imune (pentru producerea de antigeni obține seruri, vaccinuri, antitoxine). Pentru depozitare prelungită culturi bacteriene folosesc adesea IPA semilichidă (0,25--0,3%) (adăugat la stratul de cultură rezultat al uleiului vaselina steril), hepatic bulion de carne-peptonă cu ulei de vaselină și altele. Păstrarea cea mai fiabilă a culturilor atinse atunci când liofil-prefectura uscare. Păstrarea reguli culturile de bacterii și ordinea lor de vacanță în instituțiile stabilite printr-o instrucțiune specială. Pentru fiecare tulpină bacteriană umplut pașaport, care indică timpul și sursa culturii izolării, proprietățile și caracteristicile tulpinii.
proprietăți tinctoriale - proprietăți de bacterii, fungi și protozoare, care caracterizează capacitatea lor de a reacționa cu coloranți și colorate într-un anumit fel.
Bacteriile au diferite forme și structuri destul de complicate, care determină diversitatea activității lor funcționale. Pentru bacteriile caracteristice patru forme de bază: sferică (globular), cilindric (tija de formă) și filiform contort. Bacteriile sferice - coci - în funcție de planul de diviziune și unul față de altul sunt împărțite în indivizi separați micrococi (coccidiostatice culcat separat), diplococci (coci pereche), streptococi (lanțuri de coci) Staphylococcus (având o formă de ciorchini de struguri) tetrakokki (formarea de patru coci) și sartsiny (pachete de 8 sau 16 coci) bacterii .Palochkovidnye sunt sub formă de celule unice sau titularii de studii streptobakteriy.Izvitye forme de bacterii - Vibrio spirillum și spirochetei. Vibrios au forma unei tije ușor curbate, spirillum - sertizate formează mai multe microorganisme zavitkami.okraski spirala folosind coloranti bazici care sunt componente mai acide se leaga rapid celulele. pigmenți de uscat care sunt vândute sub formă de pulberi preparate soluții alcoolice saturate, și ale acestora - apă-alcool, care sunt utilizate pentru vopsirea celulelor microbiene. Microorganismele colorate turnat colorant frotiu pe suprafață pentru o anumită perioadă de timp. pata fucsin Basic a fost efectuat timp de 2 minute, albastru de metilen - 5--7 minute. Apoi frotiul a fost spălat cu apă până când până când jeturile de apă curgătoare nu va incolor, se usucă cu grijă șterși cu hârtie de filtru și mikroskopiruyut în sistemul de imersie. Dacă tamponul vopsit și spălat în mod corespunzător, atunci câmpul vizual este complet transparent, iar celulele sunt intens colorate.
Există câteva culori de bază: Gram, Ziehl-Nielsen, pe Aujeszky, Neisseria, Storm-Jin.
Proprietățile enzimatici de bacterii cauzate de un set de enzime reflecta anumite condiții de nutriție și metabolism inerente acestui tip de microorganisme în diferite medii. Bacteriile din genul Salmonella sunt caracterizate prin următoarele proprietăți enzimatice: nu lichefieze gelatină, nu se descompune și fermentează adonitol zaharoză; marea majoritate nu scinda salicina nu se descompun lactoza, nu formează indol, nu scinda uree dă reacția Voges-Proskauera (reacție la atsetilmetilkar-binol); fermenților (cu câteva excepții maltoză, manitol, sorbitol, glucoza, scindează pentru a forma un gaz (S. typhi, S. pullorum, în general, nu formează gaz) dă o reacție pozitivă cu roșu de metil, și reduce utilizează azotat de amoniu, cele mai multe dintre ele produce hidrogen sulfurat.
Pentru a studia proprietățile enzimatice ale bacteriilor din genul Salmonella frecvent utilizate culoare serii scurte (pestriță) constând în medii cu glucoză, manitol, arabinoză, dulcitol, ramnoza (mediu amar); bulion glitserinofuksinovy (Stern bulion). În plus față de aceste medii de diferențiere serologică pentru tipuri de Salmonella folosesc, de asemenea, un mediu cu maltoză, inositol, trehaloză, xiloză; laptele de turnesol (schimbare în laptele de turnesol cu creșterea Salmonella le permite să fie diferențiate prin abilitatea de a forma un acid sau alcalin). In loc de lapte degresat de turnesol poate fi utilizat cu ajutorul indicatorului albastru de bromotimol (1 ml dintr-o soluție 0,4% în 100 ml de lapte). valoare cunoscută pentru diferențierea Salmonella are o cultură de producere a hidrogenului sulfurat. Proprietățile proteolitice a fost investigată prin însămânțarea Salmonella cultura studiată pe MNR și lapte.
Având în vedere similitudinea bacteriilor din genul Salmonella din alte microorganisme din familia Enterobacteriaceae, este necesar să le diferențieze. In prezent, practica folosită pe scară largă de mediu nutritiv dens diagnostic diferential bacteriologic cu lactoză (Ploskireva mediu Endo, Levine). Prin capacitatea bacteriilor de a fermenta lactoza galmonelly disting de multe ori concomitent E. coli, astfel investigarea Salmonella materialului produc primul seed unul din mediile diferențiale. În aceste medii, E. coli, fermentează lactoza pentru a forma acid, și un animal de companie și schimbarea indicatorului, pentru a forma colonii, caracterizate prin colonii chist de Salmonella, nu fermentează lactoza. Miercuri Endo bacterii E. coli produce colonii de culoare roșie, de multe ori cu un luciu metalic, incolor sau roz pal salmonelly- (mediu colorat); miercuri Ploskireva E. coli - Colony rosu-portocaliu de culoare, salmonella - foc transparent, roz pal; miercuri, Levin E. coli formează colonii negre înconjurate de o bordură salmonelly-, roz pal transparent sau roz-violet. Pentru diferențierea Salmonella și tulpini și bacterii din genul similare cultural Proteus și bacterii coliforme utilizate medii cu uree (miercuri Preiss, Russell, Olkenitskogo), SS-Arap (Salmonella - Shigella - agar). Și altele Culoarea acestor medii datorită inegale intensitate clivajul substanțelor azotate de microorganisme pentru a produce produse alcaline. bacterii coliforme și Proteus (excluzând 0-formă), de obicei la SS-arape nu permite creșterea Salmonella și să crească într-un blând colonii incolore.
media diferențiale de diagnosticare dense servesc doar pentru a determina bacteriile care fac parte din genul Salmonella și le separă de microflora însoțitoare.
Pentru izolarea mai eficientă a Salmonella din materialul patologic care conține un mare (număr de microfloră concomitente, prevenind creșterea lor, utilizează mediu de îmbogățire specială (Mueller, Kaufman și colab.). Tetrationovy de sodiu adăugat în mediu Mueller inhibă creșterea bacteriilor coliforme, dar nu previne dezvoltarea mediului Salmonella. Kaufman este un mediu modificat Mueller, la care sa adăugat o soluție de bilă strălucitor bovine verde și naturale. Aceste componente retardatule po bacterii coliforme, în special articolul Proteus, dar contribuie la creșterea Salmonella.
Proprietățile enzimatici Salmonella nu întotdeauna stabile și pot varia în funcție de condițiile de mediu, astfel încât tipizirovanie corectă Salmonella este posibilă numai în urma studierii morfologice complexe, culturale, enzimatice și proprietățile antigenice ale structurii.