metode de cercetare Microscopice
Metode de cercetare - metode microscopice de studiu a diferitelor obiecte cu un microscop. În biologie și medicină, aceste tehnici ne permit de a studia structura obiectelor microscopice, dimensiunile care sunt dincolo de puterea de rezoluție a ochiului uman. Baza studiului metodelor microscopice de lumina si microscopie electronica. În activitățile practice și științifice ale medicilor de diverse specialități -. Virusologie, microbiologie, citologie, morfologie, hematologi, etc., în plus față de microscopie optică convențională folosind contrast de fază, interferență, luminiscent, polarizarea, stereoscopic, ultraviolete, microscopie în infraroșu. Aceste metode se bazează pe diferite proprietăți ale luminii. Studiile de microscopie electronica Imagine obiect apare ca urmare a fluxului de electroni direcțională.
Pentru microscopie cu lumină, și pe baza altor metode ei microscopice pentru a studia plus crucială pentru soluționarea microscopului este natura și direcția fasciculului de lumină, precum și caracteristici ale obiectului studiat, care poate fi transparent și netransparent. În funcție de proprietățile obiectului sunt modificate proprietățile fizice ale luminii - culoarea și luminozitatea asociată cu lungimea de undă și amplitudinii, faza, și direcția de propagare a undei plane. Cu privire la utilizarea proprietăților luminii, și a construit o varietate de metode microscopice. Pentru microscopie cu lumină colorată obiecte biologice de obicei pentru a identifica una sau alta dintre proprietățile lor (Fig. 1). În acest material trebuie să fie fixe, deoarece colorat identifică anumite structuri numai celulele moarte. Colorantul de celule vii se diferențiază în citoplasmă sub formă de vacuolelor sau vopsele asupra structurii sale. Cu toate acestea, în lumina microscopului poate studia și de a trăi obiecte biologice folosind metoda de microscopie vitale. În acest caz, utilizați condensator darkfield, care este introdus în microscop.
Pentru studiul celor vii și utilizarea biologică necolorate ca un microscop cu contrast de fază. Ea se bazează pe difracția fasciculului de lumină în funcție de caracteristicile radiației obiectului. Aceasta schimbă lungimea și faza undei de lumină. Lens speciale microscop cu contrast de fază cuprinde o placă de fază translucid. Live obiecte microscopice sau microorganisme vopsite fixe, dar nu și celule datorită transparenței lor cu greu schimba amplitudinea și culoarea care trece prin ele fasciculul de lumină. provocând o fază de schimbare lungimea de unda. Cu toate acestea, după ce trece prin obiect în studiu, razele de lumină sunt deviate de o placă de fază semitransparent. Ca rezultat, între grinzile care au trecut prin obiect, și razele de diferența de lungime de undă de fond de lumină se produce. Dacă diferența nu este mai mică de 1/4 din lungimea de undă, devine efect optic în care obiectul întunecat este clar vizibil pe un fundal luminos sau invers, în funcție de caracteristicile plăcii de fază.
O varietate de microscopie cu contrast de fază este de amplitudine contrast sau anoptralnaya, microscopie, la care obiectivul este utilizat cu lame speciale, care modifică numai luminozitatea și culoarea luminii de fundal. Ca urmare, posibilitatea de a extinde studiul de viață, obiecte necolorate. microscopie cu contrast de fază este utilizat in microbiologie si parazitologie in studiul microorganismelor, protozoare, a plantelor și a celulelor animale; în hematologie pentru numărarea și determinarea diferențierii măduvei osoase și celule sanguine; și studiul de celule de cultură de țesut, etc.
microscopie Polarizarea ne permite de a studia obiecte de cercetare din lume, format de cele două fascicule polarizate în plane reciproc perpendiculare, și anume, în lumină polarizată. În acest scop, filmy sau Polaroid Nicols, care este plasat în microscop între sursa de lumină și de pregătire. Polarizarea variază în timpul trecerii (sau reflexia) de raze de lumină prin diferite componente structurale ale celulelor și țesuturilor, ale căror proprietăți nu sunt uniforme. În așa-numitele structuri izotrope viteza de propagare a luminii polarizate nu depinde de planul de polarizare în structurile anizotropice viteza de propagare variază în funcție de direcția luminii de-a lungul axei longitudinale sau transversale a obiectului. Dacă indicele de refracție a lungul structurii mai mult decât în direcția transversală, există o birefringență pozitiv cu relația inversă - birefringență negativ. Multe obiecte biologice au o orientare moleculară strictă, sunt anizotrope si au un dublu refractie pozitiv. Aceste proprietăți sunt myofibrils, cilia neurofibrils epiteliului ciliat, fibre de colagen si altele. Compararea naturii refracție a razelor de lumină polarizată și mărimea anizotropiei obiectului oferă o indicație a organizării moleculare a structurii (Fig. 2). Microscopia Polarizarea este una dintre metodele de cercetare histologica, metoda de diagnostic microbiologic își găsește aplicarea în studii citologice, și altele. în lumina polarizată poate fi prelucrată ca vopsite și nevopsite și non-fixe, așa-numitele preparate de felie de tesut nativ.
Răspândită este microscopie fluorescentă. Ea se bazează pe capacitatea unor materiale pentru a da strălucire - luminiscența în lumină UV sau porțiune albastru-violet a spectrului. Multe substanțe biologice, cum ar fi proteinele simple, coenzime, vitamine si unele medicamente au propria lor luminiscență (primar). Alte substanțe începe doar să strălucească prin adăugarea la acestea a vopselelor speciale - fluorocromatici (luminiscenta secundar). Fluorocromi pot fi alocate în celulă sunt colorate în mod selectiv structuri celulare sau compuși chimici specifici ai obiectului biologic prolix sau separat. Aceasta se bazează pe utilizarea citologice microscopie fluorescentă și studii histochimice (vezi. Studii Metode histochimice). Cu microscopie imunofluorescentă pentru a detecta antigene virale fluorescente și concentrația lor în celule, virușii identificați, antigene determinate și anticorpi, hormoni, diverse produse metabolice, etc. (Fig. 3). În acest sens, microscopie fluorescentă a fost utilizată în diagnosticul de laborator al infecțiilor, cum ar fi herpes, oreionul, hepatita virală, gripă, etc. Sunt utilizate in diagnosticul rapid al infecțiilor virale respiratorii, examinând amprentele cu mucoasa nazală a pacienților, și diagnosticul diferențial al diferitelor infecții. În Pathomorphology folosind microscopie fluorescente recunosc tumori maligne histologice și specimene citologice, determina zonele ischemice ale mușchiului cardiac în stadii incipiente de infarct miocardic, a detecta amiloid in tesutul biopsie, etc.
microscopie UV bazat pe capacitatea unor substanțe care fac parte din celule vii, microorganisme sau fixe, dar nu colorate, transparente în țesuturi de lumină vizibilă absorb radiațiile UV cu o anumita lungime de unda (400-250 nm). Această proprietate este posedat de compuși cu masă moleculară mare, cum ar fi acizi nucleici, proteine, acizi aromatici (tirozină, triptofan, metilalanii) purina si baze piramidinovye etc. Cu microscopie ultraviolet specifică locația și cantitatea acestor substanțe, precum și în cazul studierii obiectelor vii -. Schimbări lor în procesul de viață.
microscopie în infraroșu permite să investigheze opac la lumina vizibilă și absorbind obiecte de structurile lor de lumină cu lungime de undă de 750-1200 nm UV-radiații. Pentru microscopie în infraroșu nu necesită agenți de pretratare chimici. Acest tip de metode de cercetare microscopice cel mai des utilizate în zoologie, antropologie, și alte ramuri ale biologiei. În medicina microscopie în infraroșu este utilizat în principal în Neuromorphology și oftalmologie.
Pentru obiectele de cercetare-dimensionale folosind un microscop stereoscopic. Construcția unui microscop stereoscopic vă permite să vedeți obiectul dreptului de studiu și ochiul stâng la unghiuri diferite. Examinați obiectele opace la o mărire relativ mică (de 120 de ori). Microscop stereoscopic este utilizat în microchirurgie. Pathomorphology in pentru un studiu special de biopsie, materialul operațional și secțională, studii criminalistice de laborator.
Pentru a studia subcelular si nivelurile macromoleculari structura celulelor, microorganisme și viruși țesuturi folosind microscopia electronică. Acest M.m.i. a permis să se mute la un nivel calitativ nou de material de studiu. Acesta este utilizat pe scară largă în morfologia, microbiologie, virusologie, biochimie, oncologie, genetică, imunologie, creșterea bruscă a rezoluției microscop electronic este furnizat de fluxul de electroni care trec sub vid prin câmpuri electromagnetice generate de lentile electromagnetice. Electronii pot trece prin structura obiectului de test (microscopie electronică de transmisie) sau reflectate de la acestea (microscopie electronică de scanare), deviate la unghiuri diferite, rezultând într-o imagine pe ecranul fluorescent al microscopului. Când imaginea de transmisie (TEM) de microscopie electronică obținute structuri plane (Figura 4) în timpul scanării - volum (Figura 5.). Combinația de microscopie electronică cu alte metode, cum ar fi autoradiografie, metode histochimice, imunologice, permite electroni radioautographic, electron-histochimic, studiile de electroni imunologic.
Microscopia electronică necesită instalații speciale de cercetare de formare, în special de fixare chimică sau fizică a țesuturilor și a microorganismelor. Biopsiile și materialul secțională este deshidratată după fixare, se toarnă în rășini epoxidice, tăiate de sticlă sau de diamant cuțite pe ultratome specială care permite să se obțină secțiunile de țesut ultrasubțiri 30-50 nm grosime. contrastul lor și apoi a studiat la microscop electronic. La microscop de scanare (raster) electroni studiind suprafața diferitelor obiecte prin împroșcarea pe ele într-o cameră de vid a unei substanțe densitate de electroni, și au examinat așa-numita proba replica repetarea contururi. A se vedea. De asemenea, microscop.
Fig. 1 slide-uri miocardului în moarte subită de insuficiență coronariană acută
Fig. 2a slide-uri infarct în lumină polarizată normală
Fig. 2b slide-uri infarct în lumină polarizată