Express - Metode de colorare Preparate citologice

Acasă | Despre noi | feedback-ul

Stains pe Alexeev. Răspunsul este dat în termen de 5 până la 10 minute. Metoda Alekseeva prevede accelerate procesarea preparatelor citologice amestecurilor azureozinovymi de principiu Romanowsky pentru a obține citologic kartiny.Metodika Preparate pentru gătit obișnuit.

medicamente Tratamentul poate fi realizat în două moduri:

1. Lamelele cu preparate de aer uscat într-o cantitate de 3 - 5shtuk, plasate pe un raft pentru imprimări color sau mișcări ascendente. Ocular pipetează pe fiecare formulare aplicată soluție de colorant Romanowsky-Giemsa într-o cantitate de 5 - 8kapel. Vopseaua trebuie să acopere întreaga frotiul sau imprimare. In aceasta stare, medicamentul este lăsat timp de 60 de secunde, timp în care este fixat cu metanol în compoziția de cerneală, și parțial colorate elementele sale. Apoi, cerneala pe lamele de sticlă, 10 - 16 picături de apă distilată neutru încălzit la 50 - 60 ° și vopsea amestecată agitare cu apă. Preparatul este lăsat pentru 2minuty l-. Apoi, un jet de apă neutru distilat dintr-un vas de spălare, fără scurgere, se spală cu pregătire vopsea. Reziduul se toarnă apă și hârtie de droguri prosushivayutfiltrovalnoy. vizionarea de droguri pictat sub microscop, în primul rând cu o creștere mică, iar când locurile suspecte trece la obiectivul de imersie. Restul curselor stânga inundate vopsea pentru 3 - 5 minute, în cazul în cazul în care primul medicament va fi deschis la culoare. Prima este de obicei pictat cu cel mai subtil de preparate, deoarece devine rapid impregnat și uscat.

Acoperirea prin această metodă, țesuturi și celule tumorale și leucocite greu diferă de ele în colorarea formulări prelucrate prin metode citologice convenționale. În această structură nucleelor ​​în mod clar distinse sunt clar vizibile nucleoli, granulozitate și protoplasmă incluziune. Parțial hemolizata eritrocite, ceea ce face mai ușor pentru a studia.

2. Se prepară o soluție de 0,4% vopsea uscată Leishman în metanol (alcool metilic). Pentru a accelera dizolvarea vopselei poate fi plasată într-un flacon închis, într-o baie de apă la 60 ° C timp de 1 oră, sub agitare. După răcire, vopseaua trebuie filtrată. O soluție de rafturi. Formulările sunt plasate pe un raft pentru vopsire este acoperit cu un strat de vopsea netolstym soluție Leishman (12 - 15 picături pe medicament) și le lasă timp de 20 - 30 de secunde. Apoi, fără golirea cernelii din soluția de sticlă Leishman a adăugat vopsea Romanovsky-Gimzyna apă distilată neutru (1,6 picături per 1 ml de apă), încălzit la 50 - 60 °, în cantități care dețin sticla. Prima formulare este clătit după 2 - 3 minute, restul - dokrashivayut. Medicamentul este uscat cu hârtie de filtru și examinate la microscop. Frotiurile cu această metodă de culoare mai vie decât în ​​prima. Globulele rosii sunt conservate. Mai ales apar clar nucleoli întunecate pe nucleele colorate cu grijă. Apă distilată pentru diluarea vopselei și clătire cu preparate trebuie să aibă un pH de 6,8 - 7,0.

frotiu de culoare. Metoda de colorare Papanicolaou yavlyaetsyanailuchshim pentru frotiuri ginecologice deoarece aceasta metoda policromatice, permite estimarea gradului de maturizare a citoplasmei (albastru-verde în celulele imature la roz in celulele din citoplasmă mature si portocaliu in celule cu cornificarii) prin fixare umedă, bine conservate nucleu, membrana celulara si structura cromatinei. Răspunsul este dat după 15 până la 20 de minute.

1. Un amestec Nikiforov.

2. Alcoolul 95, 90, 80, 70 și 50 °.

3. Hematoxilina Harris.

4. soluție 0,25% de acid clorhidric.

5. Paint Orange G.

7. alcool absolut.

9. balsamurilor din Canada.

Prepararea Harris hematoxilina:

1 g hematoxilina dizolvat în 10 ml etanol absolut, 20 g de kvatsov de potasiu dizolvat prin încălzire în 200 ml de apă distilată. După 24 de ore, cele două soluții au fost combinate și adăugate la 0,5 g dintr-un oxid de mercur roșu sau galben. Soluția a fost încălzită la reflux, se lasă să se răcească și se filtrează după 24 h.

Prepararea soluției de colorant portocaliu G:

La 100 ml dintr-o soluție alcoolică 0,5% colorant oranj F a fost adăugat 0,015 g de acid fosfowolframic.

Prepararea vopselei compozit (EA-36):

45 ml dintr-o soluție alcoolică 0,5% verde deschis, 10 ml dintr-o soluție alcoolică bismarkbraun 0,5%, 45 ml de 0,5% soluție de alcool de eozina gălbui (apă și solubil în alcool), 0,2 g de acid fosfowolframic , o picătură de soluție apoasă saturată de carbonat de litiu.

Frotiurile după fixarea este realizată secvențial prin vasele care conțin 80, 70 și 50 ° alcooli și apă distilată. Apoi, 6 min Harris hematoxilină, se clătește ușor cu apă distilată și imersate (de 6 ori) o soluție de 0,25% de acid clorhidric. Apoi, la 6 minute sunt plasate într-un vas care conține apă de la robinet și se spală cu apă distilată. Se efectuează apoi după 50, 70, 80 și 95 ° alcooli. Preparatele deshidratați, astfel, colorate timp de 1,5 minute Orange G colorantului, se clătește în două schimburi de 95 ° alcool si culoare timp de 1,5 min vopsea compozit (EA-36). Frotiurile au fost spălate de excesul de vopsea în trei schimbări de 95 ° alcool. Preparate suplimentare ilumineze conducerea prin alcool absolut printr-un amestec de etanol absolut și xilen în volume egale și, în final, prin xilen și apoi închise în Canada balsamul.

Pentru tehnici de pictura policrom ca metodă denumită Schorr (sau modifikatsiyuM. Arsenyev (1963) și altele.), Care permite celulelor să se diferențieze eozinofil (roșu) și bazofile (albastru) și metodele monocrome (H & E pata sau hematoxilină fucsin) prepararea .Fiksatsiya a fost efectuată în alcool metilic (15 minute). Preparate Vopsirea produse cu hematoxilină-eozină. frotiuri fixe colorate cu hematoxilină apos pentru a da o colorație violet pal (7 - 10 minute). După spălare cu apă, din nou frotiurilor colorate cu o eozină apoasă 1% timp de 0,5 minute de funcționare, se spală cu jet de apă și celule superficiale metodă policromatice vysushivalis.Pri colorează culoarea roșu sau albastru-verde, intermediar și parabazal - albastru-verde, bazale - in albastru inchis.

Metodele citochimice se bazează pe reacția specifică culorii chimică între reactivul chimic și componenta de celule specifice pentru determinarea in celule de diverse substanțe (sub reactivi special selectate are loc colorarea anumitor substanțe în citoplasmă și cu privire la gradul și natura culorii este evaluată pe numărul sau activitatea substanțelor de testat) .

Atunci când studiul citochimic utilizează din ce în evaluarea semicantitativă a rezultatelor folosind principiul ASTALDI bazat pe identificarea diferite grade de intensitate a culorii specifice (factor mediu citochimic - LZC).

reacția Schick sau PAS-reacție (pentru a detecta glicogen).

Reactiv - acid Schiff (abreviere literă evidențiată și constituie Schick - acid Schiff periodic) periodic. Sub influența glicogen de potasiu oxidat cu periodat pentru a forma compuși aldehidici ușor reacționează cu reactivul Schiff (-fuchsin acid sulfuros). În locurile de localizare a relevat glicogen de cireș violet intensitatea Colorarea care poate judeca cantitatea de glicogen în celulele.

În afară de glicogen, reacția pozitivă poate da astfel de substanțe PAS pozitive, cum ar fi neutre și acide mucopolizaharide, mucoproteins, glicoproteine ​​și altele. Glicogen ușor diferențiate de alte substanțe cu proba de saliva sau diastaza.

In periferic glicogen frotiuri sanguine conținute în citoplasmă neutrofile (ca granularitate fină abundente), citoplasmă limfocitelor (sub forma unui număr mic de boabe mari) și trombocite (sub formă de boabe mari singulare). În țesutul osos punctiformă măduvă de glicogen detectate in neutrofile diferite grade de maturitate, limfocite și megacariocite.

Detectarea de glicogen de către Mc Manus.

Metoda McManus identifică carbohidrat substanță (glicozaminoglicani, glicoproteine, glicogen și altele.) în preparatele citologice. Metoda se bazează pe formarea de dialdehide care sunt determinate utilizând reactivul Schiff sub influența oxidantului (acid iodic). Celulele glicogen detectate ca granule rosii cherry.

Metode pentru detectarea enzimelor:

1. oxidazei - enzime catalizează procesele de oxidare cu oxigen molecular. Printre ei, de o importanță deosebită este mieloperoxidazei (MP).

Mieloperoxidaza -is enzimei lizozomale catalizează în prezența oxidării peroxid de hidrogen a diferitelor substraturi. Este localizat predominant în granulele azurofile specifice în citoplasmă și este un marker al granulocitelor serii de celule mieloide. Mieloperoxidazei este detectat în celulele din seria granulocitară, deoarece mieloblaste. Activitatea enzimatică a crescut ca celule mature. Cu toate acestea, ca și diferențierea acestora în celule mature, activitatea enzimei scade. Celulele mieloperoxidazei implicate în distrugerea reacții toxice de peroxid de hidrogen. Reacțiile citochimice activitatea enzimei este determinată din oxidarea cromogen (benzidina, o-dianisidină, etc.), prin metoda lui Graham-Knoll sau modificările. Reacția este folosit în principal pentru diagnosticul leucemiei acute.

2. Fosfataze fac parte din hidrolaze. Aceste enzime sunt larg distribuite in celulele umane si animale. Ele sunt implicate în procesele metabolice cu grăsimi, polizaharide și nucleoproteine. Acestea includ enzime, cum ar fi fosfataza acidă și fosfatazei alcaline.

fosfatază acidă (EC) - catalizează eliberarea de fosfat din monoesteri alcoolice sau fenolice la pH acid. Fosfatazei acide localizate în lizozomi și identificat cytochemically datorită formării de zone colorate roșii în domeniul hidrolizei substratului. Substratul poate fi utilizat naftol-AS-fosfat, o-naftil fosfat de sodiu, naftol-A8-O-fosfat și altele. Fosfataza acidă este prezentă în majoritatea celulelor sanguine și a măduvei osoase. Granulocitele, monocite, eozinofile și bazofile este detectat pornind de la celulele imature ale acestor rânduri, în cazul în care activitatea este cea mai ridicată.

fosfatază alcalină (ALP) este o enzimă kotoryysposoben eliberează fosfatul, catalizează scindarea grupărilor fosfat din fosfomonoefirov în mediu alcalin și este implicat în metabolismul lipidelor și a acizilor nucleici. Acesta a conținut numai în neutrofile mature. În activitatea periferică a fosfatazei alcaline sanguine sunt semnificativ mai mari decât în ​​celule de măduvă osoasă. Enzima a fost detectat ca un granule galben-brun în citoplasmă.

3.Nespetsificheskieesterazy (NE) aparțin hidrolazelor. Aceste enzime sunt capabile să hidrolizeze N-eteri de alcooli ai acizilor grași liberi. Acesta este un grup foarte eterogen de enzime, care sunt datorate substrat nume, pe care le hidrolizați. S-a obținut mai multe izoenzime 9 NE. Fracțiunile 1, 2, 7, 8, 9 sunt identificate folosind naftol-AB-O-cloroacetat și reprezintă hloratsetatesterazy activitate care este prezentă în granulocite. Fracțiunile 3, 4, 5, 6 interacționează cu esteri # 945; -naftilatsetata și reprezintă emoțiile negative provocate în monocite, celule plasmatice și trombocite. cel mai mare interes de la hematologists sunt hloratsetatesteraza, # 945; -naftilatsetatesteraza, acru # 945; -naftilatsetatesteraza. Nespetsificheskieesterazy sunt enzime lizozomale.

# 945; -Naftilatsetatesteraza (# 945; NAE) găsit în toate celulele mieloide, dar activitatea sa este cea mai mare în monocite determinate. In celulele eritroide în mod normal, nu este definit.

Kislayanaftilatsetatesteraza- este o enzimă localizată în granule lizozomale. Activitatea sa este detectată în reacție cu # 945; -naftilatsetatom într-un mediu acid la pH 5,8. Este caracteristic celulelor T-helper. Mai mult, este detectat în celulele din seria monocitică.

Hloratsetatesterazu (AEE) este numit granulocite. Precum și mieloperoxidazei, este un marker al neutrofilelor. Activitatea enzimei a fost detectată ca un albastru granule de culoare.

răspuns dublu la AEE și # 945; NAE se realizează secvențial pe un frotiu. Acest lucru permite celulelor să împartă liniile granulocitare și monocitare care are o valoare in diagnosticul de leucemie mielomonocitară.

reacția Brachet. Metoda utilizată pentru a identifica ARN. Utilizarea amestecului reactiv al celor doi coloranți: verde metil și pironina.Pironin colorează în mod specific ARN în roșu pentru prepararea tsvet.Poetomu nucleoli (format din miez) și porțiuni ale citoplasmei sunt ribosombogatye roșu structura miez tsvet.Drugie (în plus față de nucleoli) - verde.

reacția Feulgen. Reactivul bazic - Acid fucsin (reactiv Schiff) Structurile care conțin ADN sunt pătate-violacee roșu.

Citochimic lipidov.Lipidy studiu localizate în citoplasmă celulelor, în principal în membranele organitelor și se găsesc în principal în granulocitelor neutrofile. Acestea joacă un rol important în permeabilitatea membranei. lipide Studiul citochimic bazat pe utilizarea coloranților, care se dizolvă în lipide (sudan III, sudan IV, chernyysudan și colab.). Pentru a identifica grăsimi neutre sunt sudan III, colorat portocaliu grăsime. Lipidele identificat mai bine cu sudan negru (colorație neagră).

1. Coloranți. Clasificarea coloranților.

2. Proprietățile tinctoriale ale structurilor celulare. Metacromă.

3. Grupul sau coloranți nucleare majore, termenul de „bazofiliei“.

4. Coloranți acizi - citoplasmatici conceptul de „acidophilia“.

5. vopsele neutre. coloranți indiferente.

6. Prepararea coloranților.

Evaluarea 7. Calitatea pregătirii citologice. Artefactele.

8. microscopie standard de lumina frotiurilor fixe, colorate. Rezoluția unui microscop optic.

9. Metode de colorare comune preparate citologice.

10. pătate cu pete hematoxilină-eozină. Tipuri de colorant hematoxilină.

11. Coloranți eozină-Coating azuriu.

12. Tehnica de vopsire a Romanovsky-Giemsa.

13. Metoda Pappenheim.

14. Acoperire conform cu Leishman.

15. Express - Metode de colorare a preparatelor citologice: Colorarea Alekseeva.

16. Polychrome okraskapo frotiu.

17. Metoda poShorru policromatic colorare.

18. Metode citochimice de cercetare, obiectivul, scopul, materialele ..

20. Metodele de detectare a enzimelor, pentru a evalua activitatea lor.

21. Metode pentru detectarea ADN-ului Feulgen.

22. Metodă de detecție a ARN-ului Brachet.

23. Metoda de detectare a glicogen Mc Manus.

24. Metodă de detecție a lipidelor.