Diagnosticul microbiologic al infecțiilor fungice examenul microscopic

Microscopie - aceasta este una dintre principalele metode în diagnosticul de laborator al infecțiilor fungice. Pentru a efectua acest studiu trebuie să fie din ziua în care mediul de cultură apar prima colonie. Înainte este necesară examinarea microscopică să știe ciuperca este o drojdie sau prăfuit - coloniile exterioare minte rezultatele eșantionului prorostkovoy.

Când miceliu fungice microscopie cont de structura (adică, caracteristicile structurale ale hifelor, culoarea lor, septirovannost; caracteristici structurale si spori conidii, inclusiv dimensiunea, forma, culoarea conidia; structura peretelui celulei lor septirovannost etc.)

Pentru microscopia pregăti preparatele native și colorate. Pentru prepararea materialului colorat este tratat în diverse moduri:

1. Metoda OkraskaPAS. Folosind metoda RAS dezvăluie polizaharide neutre în pereții de microorganisme. polizaharide neutre - un complex glucan-manan situat în peretele celular al mai eumitsetov din cauza lui și este colorat.

PAS-reacție - una dintre metodele de diagnostic microscopic al formelor de țesut de infecții fungice. In laboratoarele practice, diferite modificări ale acestei metode sunt folosite pentru diagnosticul microscopic: oxidarea acidului cromic - reacția Bauer; pictura pe Gridley.

2. Acoperirea prin metoda Gram (Gram-modificare prin Weigert) pentru identificarea microorganismelor înrudite.

3. Acoperire conform cu Ziehl-Nilsson pentru detectarea organismelor acidorezistență. Dacă lichidul de material testat. apoi prepararea din acestea microscopie frotiu necolorate în lichide antireflex: amestec de un alcool cu ​​glicerol în raport de 1: 1.

Următoarea etapă este cercetarea micologic - izolarea și identificarea fungilor. Luați în considerare caracteristicile acestei etape, în funcție de materialul de testat.

Culturile. Studiu Culturile se bazează pe selectarea materialului patogen. calendarul cultivare diferite pentru diferite specii de fungi (de la 2-4 zile până la 4 săptămâni), în culturi suspectate fungi dimorfici secreta pana la 8 saptamani. Principalul suportul media pentru cultivarea în laboratoare micologice este un mediu Sabouraud: Sabouraud dextroză agar (mediu solid), Sabouraud bulion (mediu lichid). Pentru a suprima creșterea florei bacteriene miercuri Saburo adăuga antibiotice (cloramfenicol, gentamicină, streptomicină mai puțin, penicilină). Pentru a inhiba creșterea ciupercilor saprofite miercuri adăugat cicloheximidă, cloramfenicol. Sunt gata făcute mediul cu cicloheximidă (MycobioticMycosel).

Regimul optim de cultivare pentru ciuperci patogene mai este de 30 0 C, 20-25 0 C, cel puțin 37 0 C - suspectat fungi dimorfici. timpul de incubare pentru cele mai multe ciuperci de până la 6 săptămâni; Dacă după acest timp de creștere nu se observă, apoi da un răspuns negativ. În cazul micozelor dimorf suspectate în absența creșterii timp de 6 săptămâni, 8 săptămâni, cultura este menținută și numai după aceea sunt negative.

diagnostician semnificative în studiul culturii sunt:

- selecție de mucegai sau ciuperci drojdie în studiul de material steril normale;

- selecție ciuperca dimorfică.

Algoritmul de cercetare micologic

1. Definiția etiologie agent patogen fungice (microscopie).

2. Se determină ciuperca de drojdie sau mucegăit:

- microscopie probelor clinice (prezența miceliului);

- natura coloniilor pe mediul de cultură, rata de creștere (levurilor cresc 48 ore fungii cresc lent).

3. Identificarea finală a ciupercii la nivelul speciei (intraspecifice) se efectuează cu ajutorul testelor biochimice și metode imunologice. În investigarea studierii proprietăților biochimice capacitatea izolată de cultură de a asimila (auksanogramma) și fermentare (zigogramma). Poate utilizarea sistemelor de identificare automată (sisteme de testare pentru identificarea ciupercilor).

Criterii de izolare semnificație etiologică fungi oportuniste

1. Dacă în preparatul nativ sunt doar blastospores vizibile (vegetația saprofite) este considerată drept purtător.

2. Dacă în pregătirea nativă, și predomină blastospores pseudomycelia componente unice, acesta este un semnal despre trecerea la parazitism a ciupercii.

3. Dacă blastospores unică și pseudomycelia predomină, acesta este un semn de leziuni de organe profunde.

4.Aktivnoe devenire blastospores - dovada unui proces acut.

Rezultatele evaluării 5.Kolichestvennuyu - selecție de diluții de ciuperci

-10 -fekalii. urină;

6.Povtornost togozhe inoculare și o specie de ciuperca

7. Prezența anticorpilor la tulpina selectată.

Studiul Mycological de descărcare de gestiune mucoase

1. Pregătirea materialului. După colectarea materialului din tampon mucoase a fost plasat în 2 ml de mediu Sabouraud sau Wort lichid agar sau BCH, turnat în tuburi sterile. Ele sunt atent agitat timp de 5 minute, avand grija sa nu se înmoaie dopul de plută. Din suspensia rezultată a fost preparată o serie de diluții de 1:10 și 1: 100, etc.

2. Culturile.

Din fiecare diluție au fost placate la 0,1 ml până la 2 cești de wort agar agar Saburo sau IPA. Culturi pe medii solide și tubul cu un mediu lichid, cu un tampon pentru îmbogățire incubat la +37 0 C timp de 48 de ore:

- după culturile trece navigarea și a contoriza numărul de colonii și se determină numărul aproximativ de colonii de drojdie. Numărul acestora este înmulțit cu 20 și diluare care se face de la însămânțare;

- în cazul în care pe agar placari realizate din diluții de nici o creștere, apoi face o a doua recoltă din mediul de îmbogățire într-o ceașcă de mustului-agar.

Examinarea micologic de sânge

1. Pregătirea materialului. După prelevarea de sânge este diluat 1:10 la proprietăți bactericide ale sângelui nu a inhibat creșterea ciupercilor.

2. Culturile.

- 5-10 ml de sânge sunt inoculate în 50-100 ml de fluid Sabouraud 2% glucoză. La o temperatură de 37 0 C au fost incubate timp de o săptămână;

- 5 zile fac semanatul de control. Pentru a face acest lucru, să ia o pastilă de pipete sterile 3-4 picături dintr-o pipetă însămânțate pe agar mustului și frecarea unei bucle bacteriologice sterile;

- Plăcile inoculate pentru 2-5 zile într-un termostat menținut la 37 0 C;

- Dacă este detectată o creștere, apoi da un răspuns preliminar la fungemia și identificarea ulterioară ciupercilor se realizează în timpul studiului.

Studiul micologice de biopsii

1.În materialul de admisie folosind metoda imprimărilor.

2. Culturile:

- face o bucată de țesut pe suprafața unui mediu nutritiv dens Saburo amprenta cercetat;

- Aceeași bucată de țesătură a fost plasată în 50 ml de mediu lichid (Sabouraud sau Wort);

- culturile au fost incubate la 37 0 C timp de 5 zile.