Denaturarea și renaturarea proteinelor - chimist de referință 21

Chimie și Inginerie Chimică

În cazul în care anticorpii au o afinitate ridicată pentru un anumit hapten, pentru complexul lor sepharose utilizare selecție cu o alta, haptena reacționa încrucișat cu afinitate mai mică pentru anticorpii datelor. și este utilizat pentru a elua anticorpul din adsorbantul. Excesul de haptene a fost îndepărtat prin dializă și haptena legat de anticorpi pot fi îndepărtate prin Denaturarea în guanidină 6M-HK1 la 4 ° C Proteina este apoi dializa renaturi-ruyut împotriva soluțiilor cu concentrații descrescătoare de guanidină-H l, și apoi dializate contra PBS. Randament Denaturarea anticorp - renaturare în cazul intervalelor digi anticorp-toxină 73-94% (URD et al 1971.). [C.71]

Biohnmich. Efectele de înaltă D. Când D în mai multe. sute MPa denaturante de proteine. schimbând astfel legarea Insulele au redus activitatea toxinei antigenică lor. Deosebit de sensibile la procesele AD legarea unui ligand proteic și interacțiilor proteină-proteină. Astfel, pentru proteinele valorilor caracteristice ale reducerii vitezei de asociere cu creșterea D. (AV pozitiv și pot fi sute cm / mol). D. Influența denaturant depinde de natura proteinei. m Temperatura și pH-ul mediului. Ex. ovalbumina coagulată ireversibil la 800 MPa, în timp ce albumina p-ry nu se schimba chiar si la 1.9 hPa. AD poate inhiba Denaturarea termică a proteinei, și chiar cauza renaturare de proteine, de [c.621]

Cu toate acestea, în anumite condiții, polipeptidele pot forma o anumită spațială (tridimensională) structură. Aceste structuri sunt formate din cauza unei interacțiuni intramoleculare între ele și cu diferite grupuri de solvent o unitate monomeră a moleculei de polimer. De exemplu, în g. 1951 Laynus Poling și Robert Kori a prezis teoretic că polipeptidele pot forma o structură elicoidală datorită prezenței legăturilor de hidrogen între atomul de oxigen carbonilic al fragmentului i-lea și un atom de hidrogen amidă a (i + 4) th Fragmentul care a fost confirmat în continuare multitudine de date experimentale. Fiecare proteină cu o secvență neregulată de aminoacizi pot forma o structură unică tridimensională. Trebuie remarcat faptul că orice funcție biologică subtilă realizată de proteina care se realizează numai în prezența unei astfel de structuri. Orice depreciere agent termic sau modificarea pH-ului (Denaturarea), nu este însoțită de scindarea legăturilor covalente. rezultând o pierdere totală a activității funcționale a proteinei. Doar proteinele mici pot fi supuse cu ușurință reconversiei la starea sa inițială. Reconversia de proteine ​​de înaltă denaturate în structura activă biologic original (renaturatsi.ch) este posibilă numai dacă utilizați o procedură specială. și anume în cazul în care orice componente monomerice. sau lanțurile polimerice nu au fost deteriorate în procesul de denaturare. [C.15]

În afară de supraproducție. crescută hidro formarea legăturii bisulfura fobnosti și improprie a conglomeratelor insolubile ale proteinelor străine în E. // cu alte contribuții. că, deși nu se cunoaște. Cu toate acestea, este clar că în incluziuni proteice insolubile. cel puțin parțial denaturat, și să-l transfere la o formă solubilă necesită o denaturare completă a distrugerii legăturilor disulfurice. Pentru dizolvarea includerii proteinelor organisme sunt tratate în condiții stricte, denaturante dodecil sulfat de sodiu. gua-nidingidrohloridom, uree și m. p., cu adaos de 2-mercaptoetanol, ditiotreitol și altele. Etapa finală de purificare a acestor proteine ​​este renaturare lor necesară pentru a produce produsul activ funcțional. Activitatea specifică a D-naturirovannogo proteinelor prin inginerie genetică, astfel, ajunge adesea o caracteristică de nivel de formă naturală. Produsul astfel obținut conține balast sub formă de forme modificate ale proteinei țintă, care poate provoca efecte adverse atunci când sunt ingerate la oameni sau animale. Prin urmare, proiectarea tulpinilor bacteriene - care produc proteine ​​eucariote materiale medicale necesare pentru atingerea proteinei țintă într-o formă solubilă și pentru a preveni precipitarea acestuia. Cel mai ușor de realizat un nivel ridicat de producere a unei proteine ​​eucariote, fara formarea corpi de incluziune pot, crearea de tulpini care secretă proteina în mediul înconjurător. De asemenea abordare productivă folosind vectori de expresie gamă largă gazdă și administrarea secvențială obținută pe plasmide lor hibride de bază în bacterii diferite pentru a găsi cea mai bună pereche. [C.284]

A se vedea pagina în cazul în care termenul și denaturarea renaturarea proteinelor menționate. [C.490] [c.51] [c.490] [c.316] A se vedea capitolele: