Colorarea spori în bacterii

explicații introductive. sporilor de bacterii comparativ cu celulele vegetative sunt extrem de rezistente la condiții de mediu nefavorabile. Acestea sunt rotunjite, formarea ovală sau eliptică. În cazul în care diametrul de spori nu depășește diametrul celulelor în care se formează spori, numite celule bacilară, dacă da, în funcție de dispunerea de spori de la centru sau la sfârșitul celulei se numește celula sau plectridium clostridiană respectiv .. În celulele bacilare în litigiu poate trezi centrul de celule - poziție centrală, la capătul - terminal și mai aproape de un capăt - poziția subterminal.

Datorită compoziției fizico-chimice specifice ale învelișului dens și strâns la prima etapă de colorare sporii aplică substanțe chimice care afectează structura membranelor. Cu toate acestea, în timpul sporii de colorare ulterioare păteze simultan citoplasmei si celula, deci sub microscop ultimul arata colorate uniform. Pentru a rămâne pe droguri numai dispute vopsite, ar trebui un astfel de „revopsit“ medicamentul este parțial decolorată, luând colorant în citoplasmă, și lăsându-l în disputa. Nu este greu de realizat, deoarece sporului adsorbit colorant, mai aderent decât absorbit în citoplasmă celulei.

Prin urmare, toate metodele de colorare a sporilor se bazează pe un singur principiu: primele sporii sunt corodate diferite materiale: crom, acid clorhidric, acid sulfuric, acid acetic, amoniac, hidroxid de sodiu sau peroxid de hidrogen, și apoi se colorează celula cu un spor de încălzire și citoplasmă în final decolorate și mai departe vopsea un colorant contrastant.

Metoda Ziehl-Neelsen în modificarea Mueller. Muller, modificarea cunoscută metoda Ziehl-Nielsen, frecvent utilizat pentru a detecta bacilli acid rapid (diferențială patarea micobacterii și unele microorganisme aproape la acestea) snizannoy cu caracteristici ale compoziției chimice a învelișului, utilizarea propusă pentru vopsirea sporilor de bacterii.

Inainte de bacterii fixare formulare cu flacără este întindă preparate într-un mod convențional (a se vedea punctul. 2.2.1). Mai departe, o flacără fixă ​​și formularea răcită este aplicată într-o soluție 5% de acid cromic. După 5-10 minute, se clătește cu apă. Medicamentul este acoperit cu o bandă de hârtie de filtru și umflării umezit soluția hârtie Ziehl lui. Încălzit de droguri pe o flacără până când fumul (nu la fierbere) și apoi retras la o parte și a adăugat o nouă porție de colorant. Această procedură a fost efectuată timp de 7 minute. Este important ca vopseaua se evaporă, dar hârtia nu se usuca. După răcire, se îndepărtează, medicamentul este bine spălat cu apă și șterse cu hârtie de filtru. Rezultatul acestui tratament, celulele sunt uniform colorate cu spori.

decolorează în continuare citoplasmă celulelor (dar nu și sporii) prin tratarea cu o soluție 1% de acid clorhidric sau sulfuric timp de 15-30 s. Cand sporii de droguri preparare sau Bacillus mycoides Bacillus mesentericus recomandat decolorant citoplasmei 16-18 s (măsurată de numărare cu voce tare de la 21 la 37-40). Depășirea acestui timp poate deveni decolorate și spori. preparat este apoi spălată cu apă și colorate cu albastru de metilen, timp de 2 minute.

În cazul în care toate operațiunile sunt efectuate în mod corect, contrastul de culoare și apoi spori luminoase de culoare roșie se disting clar pe un fond albastru al citoplasmei.

Metoda Peshkov. Un preparat cu flacără fix turnat albastru de metilen Leffler, aduce la fierbere și se fierbe timp de 15-20 de secunde, ținând sticla deasupra flăcării. Frotiu dokrashivayut și se spală cu apă timp de 30 secunde, cu o soluție apoasă 0,5% de roșu neutru. Încă o dată, se spală, se usucă și apoi testate de droguri cu lentile de imersie în ulei. Sporii sunt colorate albastru sau albastru, citoplasmă - în roz.

Pentru a investiga disputa obiecte convenabile pot servi ca Bacillus mesentericus sau Bacillus mycoides la vârsta de 4 zile.

Reactivi pentru colorarea sporilor bacterieni.

Soluție 1. Ziehl (a se vedea punctul. 3.2.2).

2. Albastru de metilen Leffler (a se vedea punctul. 3.2.2).

3. Soluție apoasă saturată de 2 g de metilen colorant albastru și 100 ml de apă distilată.

4. Acid cromic, o soluție de 5%.

5. Sare (sau acid sulfuric), soluție 1%.