4) Metode citologie

Metode citologie:

1) observarea directă a celulelor vii în organism (vital) sau țesut proaspăt izolate (supravital).

2) Observarea celulelor ucise prin fixare, care păstrează structura morfologică și chimică.

După fixare, orice material este supus vopsire. Coloranți - naturale și sintetice.

Synthetic - Acid și bazic. baze de coloranți care conțin săruri amino monometilaminogruppy, grupa imino - cheie. Aceste grupuri determină alcalinitatea coloranților. Obținerea în celulă, aceste grupe formează sare cu conexiune acizi situată în structura celulei, ceea ce duce la o colorare. Celulele grupe acide - bazofile.

coloranți acizi - acid sau sărurile de colorare ale acestora (eozină, acid picric, azocarmine și colab.). proprietăți acide dau grupări nitro, hidroxil, carboxil. Componente structurale - atsitofilnye sau oxyphilous.

colorație histochimică sau citochimic larg raspandita, care este împărțit în mod direct și indirect. Metodele directe includ metode care sunt specifice pentru o substanță care doresc să se definească. Detectarea ADN - cu reactivul Schiff.

Pentru a detecta activitatea enzimei folosind metoda histochimic indirectă sau metoda digestiei enzimatice. In acest scop, celulele sunt plasate într-un mediu care conține un substrat pentru această reacție enzimatică și reactivi care se leagă în mod specific la produsele finale ale reacțiilor.

dye Azur se leaga si pătează citoplasmă, nucleu și nucleol. Pretratamentul celulelor enzimei RNase determină că citoplasmă și nucleul este colorat ușor, iar kernel-ul nu se va schimba în culoarea. Dacă celula pre-tratat cu DNAază, dispar aproape complet colorarea structurilor de bază.

În stadiul actual de o importanță deosebită sunt moduri de precise pentru a identifica modele - metode imunochimice. Această reacție folosind anticorpi fluorescenți. În acest scop, proteina care se dorește să se determine sunt specifice ser. Serul conține anticorpi, combinate cu coloranți fluorescenți. Apoi, proteina marcată este introdusă în celulă.

Astfel, a deschis citoscheletului.

fracționare sau metoda de substituție diferențială.

În primul rând, o cușcă curată, distrugerea țesutului în omogenizator.

Suspensia rezultată (omogenizatului) au fost supuse la ultracentrifugare. Componentele majore (nucleu, membrane sau structură neîntreruptă) depuse la viteze mici de 1-3 tys.J.

La viteze mai mari (15-30 mii.) Sunt depuse macrosomie mai mici (mitocondriei, plastidă, lizozomii, terminații nervoase).

Mai mult de 50 de mii -. Microzomi. 15-20% din greutatea totală. Ea are o compoziție chimică complexă. EPR, vacuole.

150 mii -. Este ribozomii, virusuri, macromolecule mari precipitat.

Folosind soluția de zaharoză a dat un grad mai mare de separare. Densitatea soluție crește treptat de sus în jos, formând un gradient de densitate. omogenat de celule a fost stratificat peste o zaharoză și apoi centrifugat și celulele organite distribuite în funcție de ajustarea masei sale moleculare pe pantă, formând fâșii separate, care pot fi izolate și studiate.