3 Metoda pentru studierea proprietăților de cultură
Selecția, studiul proprietăților de microorganisme și utilizarea acestora pentru punerea în aplicare a proceselor de pregătire a materiilor prime de prelucrare din blană de oaie
Essays >> Biologie >> Selecția, studiul proprietăților de microorganisme și utilizarea acestora pentru punerea în aplicare a proceselor de pregătire a materiilor prime de prelucrare din blană de oaie
Contoriza numărul de colonii cultivate la însămânțare anumitor reproducție la două (a) vase Petri. Rezultatele semănat paralel însumate și se determină numărul mediu de colonii crescute la însămânțare.de această diluție. Coloniile cred, de regulă, fără a deschide cupa. Pentru comoditate notă punct coloniei calculată pe o latură exterioară a plăcilor inferioare, folosind cerneală sau sticlă sticlos. Cu un număr mare de colonii de jos a paharului este împărțit în sectoare, numărul de colonii din fiecare sector, iar rezultatele sunt însumate sau folosind contoare semi-automate.
2.2.3 Metoda de studiu a proprietăților culturale
Proprietățile culturale determinate de natura creșterii culturilor microbiene pe un mediu nutritiv solid și lichid. Creștere pe mediu solid studiat descrierea detaliată a formei, dimensiunea, culoarea, textura suprafeței, marginile și structura coloniilor formate pe IPA.
Studiul microscopic al coloniilor se realizează sub microscop. Având în colonie în lumina transmisă cu ochiul liber, este descrisă după cum urmează: forma coloniilor; diametrul coloanei; culoare, care este cauzata de pigment; Coloniile de relief; suprafață; luminozitatea și transparența acestuia; natura marginilor coloniilor; Structura coloniei, consistența ei.
Din coloniile pregătesc frotiurilor colorate ulterior Gram și Trujillo. tehnica de pictura Gram este după cum urmează:
1) pentru a face o pojghiță de sticlă accidente vasculare cerebrale microorganisme. Frotiurile au fost uscate cu aer și fixate cu o flacără de arzător;
2) Frotiurile au fost colorate timp de 1 min gențiană violet;
3) preparat a fost spălat într-un curent slab de apă de la robinet timp de 2 sec.;
4) colorate cu formulare de soluție Lugol timp de 1 min.;
5) preparat a fost spălat cu un curent slab de apă de la robinet;
6) Medicamentul a fost scufundat timp de 30 de secunde în alcool etilic 96%, agitând din urmă, după care preparatul este uscat cu hârtie sugativă;
7) frotiurilor colorate Pfeiffer soluție fucsin timp de 30 sec.;
8) preparat a fost spălat într-un curent slab de apă de la robinet la dispariția culorii efluentului, se usucă cu hârtie sugativă și mikroskopiruyut.
Bacteriile gram pozitive sunt colorate roșu albastru sau violet și Gram-negative întuneric.
Colorare Trujillo este după cum urmează:
1) de căldură pentru a fixa frotiul;
2) Se aplică o soluție apoasă de malachit verde (2%) și se încălzește timp de 3 minute pe un spirit de evacuare a umidității;
3) clătire cu apă;
4) mai mic timp de 1 min în soluție apoasă 0,25% de fucsină de bază;
5) clătire cu apă;
6) Hârtia de filtru uscată și mikroskopirovat.
Colorat flageli de Leffler
Colorat zhgutkov este după cum urmează:
Bucla de suspensie este aplicată o curat lame de sticlă degresate, este înclinată la un unghi de 450 și se usucă în aer. Frotiu uscat este turnat pe 15-20 minute mordant Leffler. Trebuie avut grijă să nu se pata sa se usuce. În acest timp, din cauza surpare de pete flageli pe suprafață, ele devin vizibile în microscop svetopolny.
Preparatul a fost spălat cu apă distilată și se colorează cu carbol fucsin Tsilya timp de 3 min. Vopseaua se spală, se usucă și prepararea mikroskopiruyut. Celulele și flageli sunt vopsite în roșu.
2.2.4 picături Metoda zdrobite
Este utilizat pentru studiul morfologiei și motilitatea microorganismelor.
O picătură de suspensie microbiană a fost plasată pe o suprafață curată diapozitiv smântânit suprafață. Atunci când se lucrează cu o cultură crescută pe un mediu solid este aplicat pe o picătură de sticlă de apă de la robinet, urmată de pipetă sterilă luând o cantitate mică de cultură și a fost agitat într-o picătură. margine de sticlă de acoperire este plasat pe diapozitiv și ușor plasat pe șlamul, asigurându-se că nu există bule de aer între geamuri. Excesul de lichid a fost îndepărtat cu bandă de hârtie de filtru.
2.2.5 Proprietățile proteolitice ale microbilor
proprietăți de eliberare proteolitice se manifestă în mediul enzimelor proteolitice care descompun proteinele la intermediarii (peptone, polipeptide, aminoacizi) sau la produsele de descompunere finale (indol, hidrogen sulfurat, amoniac, etc.).
Pentru detectarea enzimelor proteolitice culturii studiate a fost inoculată într-un mediu nutritiv care conține una sau alte proteine (NRM, lapte etc.).
Culturile de MNR cultivate în 5 ... 7 zile la temperatura camerei, deoarece gelatina este topit într-un cuptor. Microbii având proprietăți proteolitice lichefieze gelatină. Multe bacterii proteolitice produc diferite caractere subtierea:. Stratificarea (care rulează fără probleme, de sus în jos), pâlnie, crater similar, napiform, sub forma unui ciorap, etc; microorganisme, non-proteolitic dau în creșterea MNR fără lichefierea gelatinei.
Pentru detectarea hidrogenului sulfurat este însămânțare înțepătură (coloana interior) de-a lungul peretelui în agar-agar cu acetat de plumb (MPA 5% peptonă și 0,25% acetat de plumb) sau un tub BCH în care un tub este plasat pe banda de mediu de hârtie de filtru steril, îmbibată soluție de acetat de plumb. Dacă testul de cultură cu descompunerea proteinelor eliberează hidrogen sulfurat, se pare colorație maro închis (întunecare) la locul de injectare într-un mediu de hârtie sau un filtru dens (BCH).
Determinarea conținutului de amoniac începe cu, un tub cu o cultură în bulion au fost plasate turnesol roz, cultură incubate la 370C timp de 1 ... 3 zile. În prezența amoniacului hârtie indicator turnesol devine culoarea albastră.
Reducerea capacității este cultura de însămânțare determinată pe lapte cu albastru de metilen. Pentru laptele steril se adaugă în picături o soluție apoasă 1% de albastru de metilen pentru colorare cu albastru. După cultivarea bacteriilor materialul inoculate având activitatea de reducere a decolorează lapte de turnesol (sub reducerea înțeleagă proces chimic care conține substanța clivarea din oxigen sau aderă la hidrogen).
Pentru determinarea catalazei 3 ... 5 bulion de cultură de zi cu zi, cultivate in vitro, făcând 1 cm3 de soluție de apă oxigenată 3%. În prezența enzimei catalază prezintă oxigen excesiv barbotare scindat, adică o așa-numită „cap de spumare“.
2.2.6 Prepararea suspensiei bacteriene
Ca sursa de carbon utilizată în microorganisme procariote metabolismul structural energetic este gras și agenți activi de suprafață. Mediul sintetic pregătit fractionally autoclavă (1; 0,5; 0,5 MPa) timp de 30 minute. După acest timp, mediul a fost distribuit într-un balon conic sterilizat de 50 cm3.
Pentru biomasă studiat culturi de microorganisme izolate din prima serie de experimente, noi semănat pe agar înclinat.
Astfel pregătit cultura prin incubarea într-un incubator timp de 24 de ore la o temperatură de (40 ± 0,5) ° C, la care capătul tuburilor cu microorganisme administrate 5 cm3 mediu sintetic lichid corespunzător, desfășurarea procesului de acțiune mecanică. Suspensia bacteriană astfel preparat într-un balon conținând 50 cm3 mediu sintetic corespunzătoare. Cultivarea microorganismelor a fost efectuat timpi variind la o temperatură de (40 ± 0,5) ° C alternativ cu acțiune mecanică efectuată pe Shaker tip, cu o frecvență de oscilație de 250 rot / min, amplitudinea 6 până la 2 ore pe zi.