Vaccinurile subunitare recombinante

Progresele în producerea de cantități mari de antigene protectoare virale obținute prin utilizarea tehnologiei ADN-ului recombinant.
Vaccinurile subunitare recombinante preparate din proteine virale purificate exprimate de gene virale clonate. Genele care codifică antigene protectoare sunt introduse într-o plasmidă adecvată care este donat într-un sistem de celule de expresie. Sistemele de expresie eucariote folosite includ drojdii, celule de insecte și celule de diferite mamifere. Avantajul este posibilitatea cultivării drojdiei pe scară largă. Primul vaccin preparat prin exprimarea genei donate în drojdie a fost un vaccin împotriva hepatitei B, uman.
Dacă o proteină virală imunogenă este de a fi glicozilate, trebuie să utilizați un sistem de expresie eucariot. Astfel, proteina exprimată este glicozilată și are conformații corespunzătoare. Producerea proteinelor virale în sistem procariot a avut mai puțin succes [958].
Un avantaj al celulelor de insecte este o simplă tehnologie legată de culturi de celule moth (sau piste), capabil de a oferi o cantitate mare de proteine virale cauzate de infecția cu baculovirusuri care poartă gena (e) a unei proteine protectoare (e) de interes a virusului. Promotorul genei care codifică proteina baculovirusului poliedrozei, este atât de puternică încât produsul genei virale interes inserat în gena polihedrin baculovirus poate fi jumătate din proteine sau moliilor totalul omizile celulele infectate.

Avantajul celulelor de mamifere, în comparație cu celulele de eucariotele inferioare este că acestea sunt mai precise (corecta) se efectuează procesarea post-translațională, inclusiv glicozilarea și secreția proteinelor virale.
Când selectați un sistem de celule pentru exprimarea antigenelor virale recombinante sunt criterii importante, cum ar fi eficiența, siguranța și manufacturability. În primul rând, trebuie să determine identitatea antigenului de protecție exprimat și fezabilitatea economică a producției sale. In cazul liniilor celulare continue, este necesar ca proteina virală exprimată este ușor de separat din ADN-ul celular, datorită potențialului său de pericol oncogen. Secreția de glicoproteine virale în mediul face mai ușor pentru a le curăța, care nu ar trebui să fie însoțită de nepliate neutralizanți epitopi. Este de asemenea necesar să se determine oportunitatea adăugării unui adjuvant pentru a spori imunogenitatea proteinei purificate.
In sistem procariot E. coli au fost exprimate de capsidă de proteine VP1 a virusului febrei aftoase, antigenul de suprafață al virusului hepatitei B, hemaglutinina virusului gripal A, o glicoproteină de suprafață G a virusului rabic glicoproteina D de virus herpes simplex și proteinele codificate de diferitele segmente ale genomului de rotavirus [1131]. Cantitatea de proteină recombinantă VP1 a virusului febrei aftoase, sintetizat în E.coli, a ajuns la 17% din masa totală de proteine. O astfel de proteină, în combinație cu o imunitate indusă de adjuvant la animale [222, 1131, 1219].
D glicoproteina de virusul herpes simplex, exprimată în E. coli sub formă negli- kozilirovannom, provocat anticorpi neutralizanți la iepuri. Aceasta indică faptul că glicozilarea glicoproteine virale de suprafata a virusului nu este o condiție necesară pentru dezvoltarea de anticorpi neutralizanți. Cu toate acestea, proteina non-glicozilată de hemaglutinina virusului gripal, sintetizat în același sistem, nu se produce la iepuri și șoareci, anticorpi care neutralizează virusul sau întârzierea hemaglutinare. Virusul rabic glicoproteina preparat într-un mod similar și nu a fost glicozilate în ciuda napolnorazmernost nu a indus imunitate la șoareci [1131].
Recombinant glicoproteinei E și proteina nestructurală NS-1 virusul encefalitei japoneze, sintetizate în E.coli și adjuvant îmbunătățit provocat VN-anticorp și rezistența la infecții la șoareci după patru ori de administrare [1443]. Proteina recombinantă a reprezentat partea C-terminală a glicoproteinei E și partea N-terminală a virusului dengue NS-1, exprimate în E. coli, protejat șoarecilor împotriva infecției cu virusul omolog letale [1442]. Hrănirea șoarecilor cu Salmonella recombinant care exprimă antigene ale virusului hepatitei B, însoțită de formarea de anticorpi specifici în titru ridicat [1382]. Poate că acesta a fost primul pas spre crearea vaccinurilor enterici împotriva hepatitei B și a altor boli virale.
In ciuda unor rezultate pozitive atunci când se utilizează un sistem de expresie procariot, o serie de probleme, dintre care principalele au un randament scăzut și agregarea proteinei recombinante [1167].