radioimunotestare

Formarea și dezvoltarea de P. m. Legate de muncă Yalow și Berson (R. S. Yalow, S. A. Berson, I960), a propus o metodă pentru determinarea insulinei endogene în plasma sanguină.

. REZUMAT R. m este utilizat pentru a defini antigen (a se vedea.) De seruri imune respective, și se administrează în antigen - anticorp antigen marcat cu un izotop radioactiv, de exemplu, iod (125 I), având ca rezultat legarea determinată (nemarcate) și etichetate antigen cu o cantitate limitată de anticorp. Deoarece. Antigenul Etichetat este adăugată la o doză dată, este posibil să se determine care parte în contact cu anticorpii și care parte rămâne nelegat prin competiție cu antigenul nemarcată detectabil. La anumite concentrații cantitatea de antigen marcat legat la anticorpul este invers proporțională cu cantitatea de antigen determinat. Schematic, acest proces poate fi reprezentat după cum urmează:

După interacțiunea antigenelor cu anticorpi formați complexele antigen-anticorp (vezi. Reacția antigen-anticorp) este separat de antigenul marcat liber. Clasificatorului complex antigen-anticorp produs în diverse moduri: prin electroforeză (. Cm), filtrare pe gel (. Cm), Fracție precipitare cu etanol a complexului imun, sulfat de amoniu, etc. precum și prin agregarea complexelor imune antiglobulină ser sau le Sorbtia imobilizat. (atașat la suprafața fazei solide) anticorpi. În plus, sorbția antigen disponibil gratuit marcate folosind substanțe adăugate, de exemplu, talc, celuloză, cuarț, carbon activat și altele. Separând antigenul marcat nelegat de complexul antigen-anticorp, determinarea cantității de antigen marcat legat în complex, dar numărul de impulsuri (via contor de scintilație). Reducerea numărului de impulsuri pe unitatea de timp, în comparație cu controalele corespunzătoare indică prezența antigenului omolog marcat legat la anti-ser, în care antigenul marcat nu a intrat în reacție și nu este definită în complexul antigen-anticorp.

Ser imun împotriva antigenului determinat și antigenul marcat titrat și utilizat în P. m anterior. In diluarea optima, cu o legare de rom se produce 50% din eticheta introdusă. Pentru evaluarea datelor este utilizat (grafic) în funcție de legarea antigenului marcat în ser diluția optimă a concentrației de antigen marcat (standard).

Acesta este utilizat pe scară largă în P. m. Ser de anticorpi împotriva antigenului, imobilizat (adsorbție Rowan) pe suprafețele de plastic sau chimic legat la suprafața polimerului. In 1966 g. Kett (K. J. Catt) un grup de cercetători, precum Wide și Porat (L. Wide, J. P. Porath) utilizat în P. m. Imobilizarea anticorpului pe rășină. Sa demonstrat că imobilizarea anticorpilor asupra celulozei și Sefadex tratate cu bromură de cianogen, precum și diverse materiale plastice, fără un tratament activator. Pentru efectuarea reacției în tuburi de polistiren cu anticorpi imobilizați pe suprafața interioară definită prin realizarea antigenului. După incubare, antigenul nelegat este îndepărtat prin spălare și se introduce antigenul marcat, care este apoi eliminat în același mod definind o proporție suplimentară de radiomarcaj legat.

Există o varietate de metode de sistem F. M. dublu anticorp atunci când complexul antigen-anticorp este prelucrat precipitant ser antiglobulină (al doilea anticorp), urmată de separarea precipitatului prin centrifugare. Adăugarea împreună cu ser antiglobulină de ser sanguin normal al aceluiași animal. de la- primul anticorp preparat favorizează precipitarea complexelor.

Determinarea antigenului folosind anticorpul marcat a fost numita metoda IRMA. În acest caz, antigenul este fixat în prealabil la o fază solidă, de exemplu, în tuburi de polistiren. La formularea de reacție definit forme de antigen un complex cu anticorpul marcat care rămâne în soluție, și anticorpul nereacționat reacționează cu un antigen atașat la o fază solidă. În varianta de realizare, metoda imunoradiometrica - metodă de cuplare dublă - antigen definit este complexat cu un anticorp imobilizat pe o fază solidă. Apoi, după îndepărtarea antigenului liber prin spălare, se adaugă anticorpi marcați care detectează complexul suprafeței în fază solidă. Radioactivitate anticorpului - antigen - anticorp - 125l radioactivitate în comparație cu probele de control, probele care conțin cunoscute și nu conțin antigen.

Sensibilitate ridicată P. m. (Picograme la analitul) a permis determinarea mai precisă a concentrației multor compuși biologic activi. Dezavantajele P. m. Include o posibilă descreștere a specificității datorită impurităților din probă este determinată, de exemplu, anumite medicamente, și prezența în serul de anticorpi cu reactivitate încrucișată. In plus, antigene și anticorpi marcați cu izotopi care emit gamma, durată scurtă de viață; în cazul în care măsurile speciale de securitate ar trebui să se conformeze acestora. În acest sens, există o metodă mai puțin periculoasă este similară în principiu P. m. A-set aplică antigene sau anticorpi marcați cu o enzimă (vezi. Metoda Enzyme-imunologică). Introducerea pe scară largă a P. m. Îngreunate de dificultatea de a obține standard marcat de seruri și antigeni, să respecte regulile substanțelor radioactive utilizate echipamente scumpe (gamma și beta contoare, camera de congelare, calculatoare etc.) și reactivi cu înaltă cerința privind standardele de puritate, precum și ser foarte specific.

Bibliografie: metode de cercetare imunologici în clinică și experiment, ed. . A. Ya Lysenko, M. 1978; Metode imunologici, ed. X. Frimelya, trans. cu ea. M. 1979 Ch T. Radioimmunological metode de ape acide Lane. din limba engleză. M. 1981 ref.; Yalow R. S. a. Berson S. A. Imuno insulinei plasmatice endogene în om, J. Clin. Invest. v. 39, p. 1157, 1960.