Proprietățile biochimice ale bacteriilor

Copierea, distribuirea, publicarea textului sau a unei părți privind resursele, acceptați răspunderea conform legislației în vigoare.

Metodele pentru bacteriile anaerobe cultivarea

Culturing spori anaerob care formează bacterii, cum ar fi (Clostridium). și nesporogen (veylonelly, Bacteroides și colab.) pentru a produce condiții anaerobe.

Condițiile anaerobe pot fi create prin cultivarea anaerobă. desicator (în partea de jos, care este instalată o lumânare sau soluție alcalină se toarnă oxigen absorbant piragalola) și metoda biologică la Fortner. Malkin și așa mai departe.

La semănat metoda Fortner Petri cu un strat gros de agar nutritiv bisect, banda tăiată. Pe de o jumătate de cultură agar de aerobi semăna, pe de altă parte - anaerobii. O ceașcă încorporate în parafină și plasat într-o primă creștere bacterii aerob termostat apare când se execută din cupe tot oxigenul incepe cresterea anaerob.

La semănat Malkina metoda utilizează două tuburi cu un IPA teșite. tub conectat. Un sow cultură tub de aerobi într-o altă -anaeroba Când oxigenul este epuizat în timpul creșterii bacteriilor aerobe, începe creștere anaerobă

Culturi anaerobi produc un mediu Kitty Tarotstsi constând din BCH, 0,5% glucoză și bucăți de ficat sau carne tocată. Înainte de inoculare mediul este încălzit într-o baie de apă timp de 10-15 minute pentru a îndepărta aerul și răcit. După însămânțare mediul este turnat strat de vaselină sau parafină ulei pentru a izola aerul atmosferic

Izolarea culturi pure de bacterii anaerobe

In laboratoare practice, de obicei, pentru izolarea culturilor pure de anaerobi folosite metode Tseysslera sau Weinberg. Procesul de selecție a unei culturi pure poate fi împărțită în mai multe etape.

Prima etapă. Din testul de material preparat citologic, Gram colorare sau altă metodă, și mikroskopiruyut. Dacă vedeți suspecte pe material de test microbi anaerob este inoculat miercuri Kitty Tarotstsi. Dacă este necesar, materialul de testat diluat în prealabil cu soluție sterilă 0,9% NaCI. Tuburile au fost turnat strat de vaselină sau ulei de parafină, semn și pus într-un termostat la 37 ° C timp de 18-24 ore.

Cea de a doua etapă. A doua zi, culturile sunt navigarea și să descrie natura creșterii. Se prepară frotiuri colorate Gram mikroskopiruyut descriu proprietățile morfologice și tinctoriale ale bacteriilor. atunci

produc reseeding într-un vas Petri pe agar de zahăr din sânge, pentru a obține colonii izolate. Plăcile au fost plasate în anaerobă și se incubează la 37 ° C timp de 18-24 ore.

A treia etapă. Culturi Viewers, explorând izolate colonii și descrie natura creșterii. Morfologia bacteriilor testate prin prepararea unui frotiu de colonii colorate prin colorare Gram. Mai mult, pentru separarea și acumularea în cultură pură a produs reseeding colonii suspecte într-un tub cu mediul Kitty Tarotstsi. Tuburile au fost incubate timp de 18-24 ore la 37 ° C

A patra etapă. Sărbătorirea caracterul vizual al creșterii culturii pure pentru a efectua controale a evidențiat cultura curățeniei, pentru care mikroskopiruyut (cultura pură din punct de vedere morfologic și uniform tinctoriale).

Primul pas este realizată în același mod ca în metoda Tseysslera. Apoi, materialul de testare, ridicări pe mediu Kitty Tarotstsi, diluat în serie în eprubete cu zahărul topit și ostuzhennym IPA. După care a fost transferat într-o pipetă Pasteur 3-5 (tub Vigna). Tuburile inoculate au fost răcite rapid cu apă rece și se solidifică agar și fixează poziția deconectat a celulelor microbiene individuale în adâncimea coloanei de agar. Tuburile au fost incubate la 37 ° C timp de 18-24 ore.

Cea de a doua etapă. Având crescut în tuburi de colonii înguste studiate cu o lupă. La locul coloniilor suspecte selectate face tuburile taiate. Coloniile au fost preluate și subcultivate pe mediu Kitty Tarotstsi. Tuburile au fost cultivate într-un incubator timp de 18-24 ore la 37 ° C

A treia etapă. După o zi de cultură puritate de validare dedicat.

Proprietățile biochimice ale bacteriilor

Bacteriile sintetiza o varietate de enzime, aparținând șase clase. Compoziția enzimatică a oricărui microb este determinată de genomul său și este o trăsătură destul de stabilă. Prin urmare, definiția saccarolitic, proteolitice și alte enzime, formate de anumite tipuri de realizări și chiar (biovar) bacterii sunt importante semnificație taxonomic, aplicarea pe scară largă sistematicii și identificarea acestora. Un număr de enzime (hialuronidaza, coagulazo și colab.) Proprietăți contribuie la manifestarea agenților patogeni datorită substratului lor de acțiune sunt substanțe care alcatuiesc celule si tesuturi ale corpului uman.

Unele enzime sunt localizate în citoplasmă, membrană citoplasmatică și spațiu periplasmic de bacterii - endofermenty, altele

- exoenzymes. eliberate în mediul înconjurător. Valoarea exoenzymes funcțională asociată cu scindarea macromolecule în mediu la compuși mai simpli.

Enzimele pot funcționa independent unul de celălalt sau să fie strâns legate între ele, oferind un flux de reacții metabolice în secvență. Ultimii sunt numite -multifermentnye complecși (enzime lanțului respirator. Localizate in membrana citoplasmatică).

In bacterii, exista trei grupe principale de enzime:

1. constitutivă - constant sintetizat in celulele microbiene.

2. Inductibile - a cărui sinteză este indusă de un substrat adecvat.

3. Repressibelnye - a cărui sinteză este suprimată ca urmare a unei acumulări excesive a produsului de reacție catalizată de această enzimă.

Pentru identificarea microorganismelor - agenți cauzatori de boli infecțioase, în plus față de proprietățile morfologice și culturale, este necesar să se studieze caracteristicile biochimice, care includ: saccarolitic. Proprietăți bacterii proteolitice formare pigmento- și toxine.

Bacteriile sunt caracterizate prin capacitatea inegală de a folosi diferite carbohidrați. Utilizarea de glucide, cu bacterii conduce la formarea de acizi organici sau de acizi și gaze.

Determinarea enzimelor saccarolitic Hiss petrece pe suport format din 1% apă peptonată. 0,5% anumite glucide (glucoză, lactoză, manitol, etc.) și indicatorul Andred (fucsin de acid în soluție 1N. NaOH). In tub float (tub de sticlă al cărui un capăt este sigilat) este coborâtă cu un mediu pentru captarea produselor gazoase. mediu proaspăt preparat are o culoare galben pai. Culturi rezultate înregistrate după 24-48 ore. Descompunerea carbohidraților este evaluată prin schimbarea culorii a mediului (se colorează în roșu, ca rezultat al schimbării pH-ului la partea acidă). Despre formarea gazului indică acumularea gazului în flotorului.

Unele bacterii produc și eliberarea în mediu, enzime proteolitice - proteaza clivaj catalizare a proteinei.

Pentru a determina enzimele proteolitice - collagenases înțepa cultura inoculată în studiu într-o coloană de gelatină carne-peptonă (NRM). Durata de cultivare 7-10 zile la temperatura camerei. Cu un rezultat pozitiv, există lichefierea gelatinei. De exemplu: antrax formeaza un crater-lichefiere NRM.

În practică, asupra activității proteolitice a bacteriilor cel mai adesea determinat în funcție de capacitatea sa de a cliva proteine ​​la produsele de descompunere profunde: indol

hidrogen sulfurat. În acest scop, cultura investigate sunt însămânțate pe BCH dintre dop și gâtul tubului de armare au benzi. La hidrogen sulfurat - hârtie indicator impregnat cu acetat de plumb (H2S alocare - l blackens) și indol - hârtie de testare impregnat cu o soluție de acid oxalic (la alocarea indol - l roși).

In prezent, pentru a studia proprietățile biochimice ale bacteriilor indicatoare de sistem de hârtie (SIS) sau multimikrotesty utilizate (MMT)

SIB - un set de discuri de hârtie impregnate cu diferite substraturi și indicatori care sunt plasate în tuburi cu suspensii de culturi studiate MMT - sunt plăci din material plastic, din care godeurile sunt indicatori ai diferitelor substraturi, la care se aplică un studiu de cultură în suspensie. După incubare într-un termostat zilnic de un disc indicator de schimbare a culorii (folosind IRB) sau conținuturile sondelor (folosind MMT) judecau asupra proprietăților biochimice ale culturii.

Pigment este rezistent genetica microb trăsătură și culoarea este utilizată pentru identificarea bacteriilor cromogene. Pentru majoritatea pigment bacterii patogene nu este tipic. Alb. aur, galben-lămâie pigment formă stafilococi, galben, crem - Mycobacterium tuberculosis, rubin rosu - Serratia. albastru-verde - Pseudomonas aeruginosa.

Pigmenții sunt de obicei protejate de celule microbiene la radiații ultraviolete.

Caracterizarea toxinelor bacteriene

Substanțele toxice sintetizate de bacterii sunt lipopolizaharide si proteine ​​in natura lor chimică (LPS). În primul rând, ca regulă. secretat de celule bacteriene care trăiesc și, prin urmare, sunt numite -ekzotoksiny. A doua eliberat după moartea celulelor - endotoxine.

Endotoxinele - LPS. conținute în peretele celular al bacteriilor gram-negative. Proprietățile toxice ale endotoxinei sunt determinate de întreaga moleculă LPS. Endotoxinele spre deosebire de exotoxine sunt mai rezistente la temperaturi ridicate, mai puțin toxic, nu este specific. slab imunogen.

Endotoxine bacterii Gram negative, diverse, atunci când sunt administrate la animale experimentale determina același tip de reacție. Odată cu introducerea unor doze mari de toxina la animale observată inhibarea toxicității fagocitoză și a fenomenelor pronunțate (oboseală, scurtarea respirației, diaree, picătură în activitatea inimii, temperatură scăzută a corpului). În cazul în doze mici administrate observat efectul opus: stimularea fagocitozei, toxemia mai puțin pronunțat, creșterea temperaturii corpului.

primirea Oamenii de o cantitate mare de endotoxină în fluxul sanguin duce la un șoc toxico-septic. Ca urmare, scăderea tensiunii arteriale se observă ca urmare a unor cantități crescute de serotonină și kininele Incoming în sânge și tulburări circulatorii ale organelor și acidoza. Efectul endotoxine în celulele sanguine (granulocite, monocite) care duc la febră, din cauza lor sunt pirogeni endogeni. Debutul febrei coincide cu leucopenie precoce, leucocitoza, care se înlocuiește cu secundar.

Unele bacterii sunt capabile de a sintetiza simultan atât endotoxine și toxine proteice, cum ar fi holera, ciuma, Salmonella, etc.

toxine proteice - exotoxine - în funcție de comunicarea cu stroma celulelor bacteriene sunt împărțite în secretate, parțial secretat și nesekretiruemye. Descris mai mult de 80 de exotoxine diferite. care diferă în greutate moleculară, structura chimică, „celule țintă“ de microorganisme și activitatea biologică. Poate, toxinele proteice nu sunt numai pentru distrugerea celulelor, țesuturilor și organelor, dar, de asemenea, pentru a participa la reacțiile metabolice ale bacteriilor înșiși, producătorii acestora.

Referitor la temperatura se disting: toxinele proteice stabile termic termic și labile. Deci de exemplu, toxina difterică este distrus termolabile la 60 ° C timp de 1 oră, și tetanos - timp de 20 min. - termostabile Clostridium botulinum toxine, E. coli, stafilococi poate tolera fierbere scurt.

Toate exotoxine sunt compuse din două componente. A - este un receptor și servește pentru a fixa molecula de toxină la „celula țintă“ corespunzător, al doilea - fragmentul toxic real - pătrunde în celulă, blocând reacțiile metabolice vitale.

Toxicitatea ridicată a toxinelor proteice se datorează caracteristică fragmentul toxic al structurii care imită structura hormonilor, enzimelor si neurotransmitatorilor microorganisme. Acest lucru le face antimetaboliți compusi vitali menționați mai sus, care blochează activitatea funcțională a acestuia din urmă.

Specificitatea este determinată de acțiunea toxică a exotoxine fixarea selectivă a toxinei la receptorii de „celule țintă“ ale anumitor țesuturi (epiteliale, ale nervilor, etc.). Corpul uman și animal. Diferențele în mecanismul de acțiune al acestor toxine le-au permis de a clasifica în patru grupe, fiecare fiind format din mai multe sub-grupe (Tabelul 1)..

sinteza proteinelor bloc la nivel subcelular - citotoxine. De exemplu, antielongatory (gistotoksin toxina difterica Pseudomonas

coli și altele.). incapacitarea enzima transferaza II responsabil pentru alungirea lanțului (capacitate) podipeptidnoy pe ribozomului.

Acest grup include, de asemenea, dermonekrotoksiny care afectează celulele pielii și enterotoxine care afectează celulele mucoasei intestinale.