Prepararea preparatelor histologice

pregătirea histologică a oricărei forme trebuie să îndeplinească sleduyuschimtrebovaniyam:

· Menținerea structurilor de stat pe durata de viață;

· Să fie suficient de subțire și transparent, pentru a studia la microscop în lumină transmisă;

· Fii un contrast, care este, pentru a studia structura sub un microscop trebuie să fie clar definite;

· Pregătirile pentru microscopie cu lumină trebuie menținută pentru o lungă perioadă de timp și folosite pentru re-examinare.

Aceste cerințe sunt îndeplinite în prepararea formulării.

Aloca sleduyuschieetapy prepararea de preparare histologice.

· Material Capture (fragmente de țesut sau organ), pentru a prepara formularea. Acest lucru ia în considerare următoarele puncte:

· Material pentru garduri ar trebui să se desfășoare cât mai curând posibil după moartea sau sacrificarea animalului și, dacă este posibil, din obiectul viu (biopsie) la structura celulei, țesutul sau organul mai bine conservate;

· Bucăți de gard trebuie să fie făcută cu un instrument ascuțit, astfel încât să nu traumatiza țesutul;

· Grosimea Slice nu trebuie să depășească 5 mm, la soluția de fixare ar putea pătrunde în interiorul unei piese;

· A produs un marcaj Neaparat piesă (precizați numele corpului unui un număr de nume de familie umană sau animală, data prelevării de probe, și așa mai departe).

· Fixarea materialului necesar pentru a opri metabolismul și de a conserva structurile de degradare. Fixation se realizează prin imersiune adesea bucăți în fixarea fluid, care poate fi alcooli simpli și soluție Carnoy formaldehidă și complex. Tsinker și alte blocare. Dispozitivul de reținere cauzează denaturarea proteinei și, prin urmare, suspendă procesele metabolice și stochează structura în starea vieții sale. Fixation poate fi realizat, de asemenea, prin congelare (răcire într-un curent de CO2. Azot lichid și altele). Fixarea Durata selectată empiric pentru fiecare țesut sau organ.

· Completarea bucăți în mediu (ceară de parafină, celloidin, rășină) de etanșare sau prin congelare pentru producerea ulterioară de felii subțiri.

· Pregătirea secțiunilor privind instrumentele speciale (microtomice sau ultramicrotom) cu cuțite speciale. Secționată pentru microscopie lumina sunt lipite pe lamele de sticlă, iar pentru microscopie electronica - montat pe o plasă specială.

· Culoarea felii sau contrastante (pentru microscopie electronică). Înainte de vopsire secțiuni de etanșare îndepărtat mediu (deparafinare). contrast de culoare a structurilor se realizează. Coloranții sunt împărțite în bază, acide și neutre. coloranți de bază (de obicei hematoxilină) și acid (eozină) sunt cele mai des utilizate. folosesc adesea coloranți complecși.

· Secțiunile Awakening (xilen, toluen), în încheierea rășinii (balsamul, polistiren), închizând un capac de sticlă.

După aceste tratamente medicamentoase succesivi poate fi studiat la microscop lumina.

În scopul microscopie electronică în etapele de preparare a medicamentelor sunt unele dintre caracteristicile, dar principiile generale sunt aceleași. Principala diferență constă în faptul că preparatul histologic pentru microscopie cu lumină pot fi stocate definitiv și reutilizate. Secționată pentru microscopie electronică sunt folosite doar o singură dată. În acest caz, fotografiat în primul rând obiectele de interes de droguri, precum și studiul structurilor se realizează deja în electroni.

consistență lichidă din țesuturi (sânge, măduvă osoasă, etc.) sunt realizate sub forma preparatelor frotiu pe o lamelă de sticlă, care este fixat, colorate și apoi examinate.

Din organe parenchimatoase casante (ficat, rinichi, etc.) sunt realizate în preparatele sub formă corp amprentă. după interstițiul fracturii sau de organe la organe și localizare a defectelor aplicate de sticlă de diapozitive pe care sunt lipite unele celule libere. Preparatul a fost apoi fixat, se colorează și studiat.

În final, unele dintre corpurile (mezenter, PIA) sau de preparate de țesut conjunctiv în vrac sunt realizate prin întindere a filmului sau zdrobirea între cele două geamuri și cu fixarea ulterioară, colorare și turnarea în rășină.

· Microscopie de lumină (rezoluție de 0,2 microni), cel mai frecvent tip de microscopie;

· Microscopie Ultraviolet (rezolutie 0.1 microni);

· Fluorescente (fluoresceină) microscopie pentru a determina substanțele chimice din aceste structuri;

· Microscopie cu contrast de fază pentru studiul structurilor din specimene de țesut necolorate;

· Pentru a studia microscopie cu polarizare, în principal, structuri fibroase;

· Microscopie cu câmp întunecat pentru studiul lucrurilor vii;

· Microscopie în lumină incidente pentru studiul obiectelor groase;

· Microscopie electronică (rezoluție 0.1-0.7 nm), două variante sale translucide (transmisie) microscopie electronică și microscopia de scanare sau de cartografiere raster dă suprafață ultrastructures.

Histochimice și metode citochimice permite determinarea compoziției substanțelor chimice și cantitatea acestora, chiar și în structurile studiate. Metoda se bazează pe efectuarea reacțiilor chimice cu reactivii utilizați și substanțele chimice din substrat pentru a forma un produs de reacție (contrast sau fluorescență), care este apoi determinată prin lumina sau microscopie cu fluorescență.

Metoda de centrifugare diferențială ne permite să studiem organite individuale, sau chiar fragmente. izolat din celule. Pentru aceasta felie examinate organ se triturează, se toarnă soluție salină normală și apoi dispersată într-o centrifugă la viteze diferite (2-150 th.) Pentru a da fracțiuni de interes sunt apoi studiate prin diverse metode.

Metoda Interferometria pentru determinarea masei substanțelor uscate în obiectele vii sau fixe.

Metode Immunomorfologichesky permite utilizarea reacțiilor pre-imune efectuate pe baza interacțiunii antigen-anticorp, pentru a determina o subpopulație de limfocite. determina gradul de celule străine. efectuarea tastarea histologică a țesuturilor și organelor (determina histocompatibilitate) pentru transplanturi de organe.

Metoda de cultură de celule (in vitro, in vivo) - cultivarea celulelor in vitro sau in capsule speciale într-un organism și studiu ulterior al celulelor vii sub microscop.

Unitățile utilizate în histologie

Pentru a măsura structurile într-un microscop optic este utilizat în principal micrometri: 1 m este 0,001 mm; în nanometri microscopie de electroni utilizate 1 nm este 0,001 microni.