metode genetice moleculare

Pentru detectarea și identificarea bacterii, virusuri, fungi, și cel mai ușor început recent să fie utilizate pe scara larga tehnici de genetica moleculara.

Reacția ADN și ARN hibridizare (răspuns sondă genă). secvența nucleotidică a ADN-ului sau ARN-ului este unic pentru genomul tuturor organismelor. Orice porțiune de acid nucleic poate fi determinată folosind copii complementare ale ADN-ului sau ARN marcat cu o enzimă sau radiomarcaj (ADN și sonde de ARN). Astfel de sonde sunt pregătite pentru bacteriile cele mai patogene și viruși. Pentru identificarea lor se realizează folosind ADN-ul sau ARN-agenților patogeni ai infecțiilor bacteriene și virale în probe clinice. reacție molecular

Hibridizarea este foarte

sensibil și foarte specifice. Aceasta permite de a detecta ADN-ul sau ARN în cantități foarte mici (1-10 pg).

Metodele de sonde genei reduce reacția la care este izolat din material patologic patogeni ADN sau ARN este denaturat și aplicat pe membrane de nitroceluloză speciale.

Apoi introduc ADN sau ARN sonde este menținută o anumită perioadă de timp, fac spălare reutilizabile pentru a elimina reactivii care nu au reacționat. În cazul în care este utilizat cu sonde radiomarcate, rezultatul a fost determinat prin g de numărare. În cazul în care sonda este marcat cu o enzimă (de exemplu, peroxidaza), sonda adăugat la un astfel de substrat (de exemplu, ortofenildiamin). Rezultatele substratului de fermentație într-o schimbare de culoare, care poate fi văzut cu ochiul liber.

reacție în lanț a polimerazei (PCR) - una dintre cele mai noi metode pentru detectarea și identificarea bacteriilor și virusurilor în materialele investigate. Principiul de reacție se bazează pe numeroase copiere (amplificare selectivă) a ADN-ului țintă prin enzima polimerază ADN. Cele formate exemplare ADN au fost identificate prin metoda de electroforeză.

Reacția se desfășoară în trei etape. În prima etapă, la o temperatură de 95 ° C Denaturarea trece molecula de ADN dvonitkovoi și filamentele sale divergență rozpletennya.

La a doua etapă (renaturare) hibridarea amorselor are loc, adică dvolantsyugovih formarea de complecși primer-șablon care sunt necesare pentru inițierea sintezei ADN-ului. Care temperatura amestecului scade la 55 ° C

In sinteza etapa (75 ° C) trece elongatie spiralele ADN complementare folosind o enzimă ADN polimerază. Petreceti 15-35 cicluri de sinteză.

repetiție reutilizabil conduce la o îmbogățire a ADN-ului în materialul de testat.

PCR este foarte sensibil. Acesta este utilizat pentru a identifica orice agent infecțios, dacă se cunoaște secvența de nucleotide a unei gene (sau fragment al acestuia), specific doar acelui agent patogen. RLP utilizat în mod avantajos în cazurile în care bacteriile sau virusurile sunt foarte variabile și sunt investigate materialul în cantități mici (chiar si o singura molecula de genomnoi ADN).

In prezent, PCR aparține unei înalte metode genetice moleculare, care sunt disponibile pentru mai multe laboratoare. Durata studiului a fost de 2 # 8209; 3 ore. Este deosebit de avantajos să-l folosească pentru a detecta și de a identifica Mycobacterium tuberculosis, sifilis, gonoree, mikoplazi, virusul SIDA, herpes, hepatita B, rotavirus si enterovirus.

Subtotal: Identificarea esențială a culturilor pure de

Identificarea morfologică - determina tipul de bacterii, datorită caracteristicilor lor morfologice.

Să ia în considerare forma și semnele exterioare ale bacteriilor (coccidiostatice, tije, spirochete) capsulei navnist, spori, flagella.

Identificarea morfologică și tinctoriale bacteriilor.

Identificarea culturii - determinarea tipului de bacterii din cauza proprietăților lor culturale.

Să ia în considerare natura creșterii bacteriilor pe solide și lichide mediu nutritiv (colonii caracteristice care cresc pe mediu lichid).

Identificare biochimice - determina tipul de bacterii din cauza caracteristicilor lor biochimice.

Luând în considerare tsukrolitichni, proteolitică, peptolitichni, reductoare și alte proprietăți enzimatice hemolitice ale bacteriilor.

Creștere microorganismelor pe mediu Olkenitskogo. 1 - neinoculat miercuri; 2 - microorganismele descompun glucoza la acid; 3 - microorganismele descompun glucoza sau lactoza la acid și la gaze; 4 - microorganisme formează hidrogen sulfurat; 5 - dezvoltarea de microorganisme, care nu se descompun de zahăr.

Fig. Determinarea proprietăților reducătoare ale bacteriilor.

Identificarea serologică - determinarea tipului de bacterii din cauza structurii lor antigenic.

În acest scop, ser aglyutinuyuchi antimicrobian specific.