Metode de studiere a activității enzimatice a bacteriilor - studopediya

Enzime - sunt catalizatori biologici (rata crescută a reacțiilor chimice). Chimic, ele sunt proteine.

Ca și alte organisme, enzime, enzime bacteriene sunt împărțite în 6 clase, conform reacțiilor de tip catalizate:

- Clasa 1 - oxidoreductaza - cataliza reacțiile redox;

- Clasa 2 - transferază - catalizează reacția de transfer a diferitelor grupe de compuși de la una la alta;

- Clasa 3 - hidrolază - catalizat substanța de reacție de scindare în compuși mai simpli cu participarea apei;

- Grad 4 - liazei - reacția catalizată de eliminare (sau atașament) a diferitelor grupe chimice substraturi mijloace non-hidrolitice;

- Grad 5 - isomerase - catalizează reacția de izomerizare, adică transformarea substanțelor organice în izomerii lor;

- Clasa 6 - ligase - catalizeze compuși complecși reacției de sinteză, din compuși mai simpli.

Enzime Bacteriile sunt împărțite în exogenă și endofermenty.

Endofermenty catalizat procesele din interiorul celulei. Exoenzymes alocate de bacterii din mediu. Acesta enzime: a) enzime digestive care descompun substanțe nutritive complexe la substanțe mai simple; b) enzime protectoare, cum ar fi penicilinazei protejează peretele celular prin acțiunea penicilina antibiotic; c) Enzimele agresiune - factori de virulenta de bacterii patogene;

- hialuronidaza - scindează acidului hialuronic;

- deoxiribonucleoză - scindează ADN celular;

- fibrinolizin - digeră colagenul;

- plazmokoagulaza - role de plasma din sânge;

- neuraminidaza - scindează acidului neuraminic;

- letsitovitellaza - împarte lecitină.

Compoziția enzimă bacteriană este determinată de genom și, prin urmare, caracteristic pentru anumite specii, adică, este un caracter specific. Prin urmare, studiul proprietăților enzimatice sau biochimice sunt foarte importante pentru diferențiere (diferență) și identificarea (determinarea tip a) bacterii. Cel mai adesea determina clasa de enzimă hidrolazelor și oxidoreductaze.

Printre enzimele oxidoreductază pentru enzimele de identificare folosind microbiene precum catalaza și citocromoxidază (CO).

Catalaza - o enzima care descompune H2 O2 pentru a produce hidrogen și oxigen. Catalaza poate detecta bule de oxigen care devin proeminente după amestecarea celulelor microbiene cu soluție 1% H2 O2 rom.

Citocromul detectate după cum urmează: hârtie reactiv umezită și aplicat cultura microorganismelor pe zi. Se pare colorație albastră.

Printre hidrolazelor sunt enzime enzime care scindează carbohidrați (sau zaharuri) și enzime care scindează proteinele (sau proteine) studiate. Capacitatea bacteriilor de a cliva carbohidrații numite proprietăți saccarolitic, și capacitatea de a cliva proteine ​​- proprietăți proteolitice.

Aceste proprietăți sunt identificate prin clivajul produselor finale după însămânțare anumit mediu. Când zaharuri descompunere determină formarea de acizi (lactic, acetic, formic) și gaz (CO2 și H2), iar descompunerea proteinelor - formarea alcalină, H2S, NH3.

Saccarolitic setului, proteolitică sau alte proprietăți enzimatice de bacterii numite bacterii proprietăți biochimice.

Studierea proprietăților saccarolitic.

Pentru determinarea proprietăților utilizate mediu saccarolitic: Mediul Endo și Levine Ploskireva și takzhezhidkie Hiss și semilichid dens mediu.

mediu Endo, Levin Ploskireva conțin lactoză și la un anumit indicator.

Aceste medii permit să se facă distincția între bacteriile patogene de E. coli - E. coli. E. coli este capabil de a scinda lactoza, deoarece o enzimă galactozidază. La scindarea lactozei format alimente acide care modifică culoarea indicatorului. colonii Prin urmare, E. coli forme în mediile colorate pe mediu Endo - colonii roșii cu un luciu metalic; Levin miercuri - colonii albastru inchis; miercuri Ploskireva - colonii roșii. Salmonella și Shigella au galactozidază, nu despica lactoza, iar culoarea mediului nu este schimbat. De aceea, Salmonella și Shigella formate pe Endo Agar, Levin și colonii incolore Ploskireva.

Astfel, în același mediu, există un model diferit de creștere a diferitelor specii de bacterii, cum Ei au o varietate de enzime. Acest lucru face posibil să se distingă o specie de alta.

Hiss lactoză mediu conținând, glucoză, maltoză, sucroză și manitol, și diverși indicatori. În cazul în care bacteriile glucide digerabile pentru a forma produse acide observat schimbarea culorii în mediu, și dacă la gazele acide și - observarea aspectului produsului gazos.

Hiss mediu lichid compus din apă peptonată, 1% carbohidrați și indicator Andred (fucsin acidă, decolorată cu alcaline). Mediul este coborât cu plutitor, care este umplut cu mediul de sterilizare. Culoarea originală a mediului - galben pai. După separarea mediului de culoare carbohidrat este roz deschis (roșu). În cazul în care se formează gaz, se acumulează în float. În cazul în care carbohidratii nu sunt defalcate, culoarea mediului nu se schimbă.

Șuieră mediu semisolid compus din 0,2-0,5% agar carne-peptonă (IPA), 1% carbohidrați și indicator BP (colorant albastru-apă și acid rozolovaya). Culoarea originală a mediului - un roz-gri. După separarea de culoare medie carbohidrat devine albastru, iar în cazul în care se formează gazul, există discontinuități în mediu.

Un anumit tip de bacterii fermenteze, nu toate, ci doar o parte din carbohidrati, astfel încât modificările de culoare în unele tuburi, iar în cealaltă - nu se schimbă, și se pare că „o serie de colorat“ tip .Each de bacterii se caracterizează prin „următor pestriță.“

Proprietățile de studiu proteolitice.

Proprietățile proteolitice ale bacteriilor studiate:

a) capacitatea de a lichefia gelatina. diferite specii de bacterii au diferite forme lichefierea gelatinei; S. aureus - într-o formă de pâlnie; Bac. antracis - sub forma unui arbore răsturnată; cholerae Vibrio - sub forma unui cui, etc. bacterii Gelatina lichefiate având enzimă - colagenaza;

b) la produsele finale ale catabolism după semănat pe bulion de carne-peptonă (BCH). Poate fi următoarele produse finale: indol, H2S, NH3.

Pentru a detecta aceste produse sunt folosite cu indicatori de hârtie. Indicatorul pentru indol - acidul oxalic (o bucată de hârtie este colorată în roz). Pentru H2 S - acetat de plumb (negru). Pentru NH3 - hârtie de turnesol (albastru).

proprietăți de studiu suplimentare, cum ar fi reducerea nitraților la nitriți, mediul de fermentație Clark butandiolovoe și alte degradarea amidonului.