Metode de microorganisme colorare

Metoda simplă de colorare. Când se folosește această metodă numai un singur colorant. La medicament fix plasat pe puntea de deasupra cupei de scurgere, soluția a fost turnată în albastru de metilen (pata 4-5 minute) sau carbolice fucsin Pfeiffer (1-2 minute) sau violet de gențiană carbolic (1-2 min). Vopseaua se clătește cu apă din sticla, preparatul este uscat cu hârtie de filtru și cauza picătură de ulei de imersie. Produsul finit este plasat pe scenă și mikroskopiruyut.

Complex (diferentiere) tehnici de colorare. Acestea diferă de metodele obișnuite în care preparatul colorate cu mai multe culori, iar în unele cazuri, folosind reactivi mai speciale (soluție Lugol, acizi, etc.). Metodele sofisticate permit să identifice prezența (sau absența) a elementelor structurale individuale și anumiți compuși organici, celulele, iar acest lucru se determină proprietățile tinctoriale ale fiecărui tip de microb.

Metoda de colorare Gram. Lamelele fixate au fost colorate cu carbolice violet de gențiană timp de 2-3 minute. Fără spălare cu apă, vopseaua este drenat timp de 2-3 minute în soluție Lugol a fost aplicat la droguri (iod cristalin - 1 g; iodură de potasiu, ca solvent de iod - 2 g; apă distilată - 300 ml). soluție Lugol a fost golit; preparare, fără spălare cu apă, tratat cu alcool 96% timp de 30 de secunde, apoi se spală bine cu apă. Ulterior, formularea suplimentară soluție de lucru de colorant magenta (1 min), se spală din nou cu apă, se usucă cu hârtie de filtru și mikroskopiruyut.

Pe colorația Gram o specie de bacterii nu este decolorată după colorare alcool primar și păstrează culoarea purpurie; acestea sunt numite Gram pozitive. Alte tipuri de alcool sunt decolorate, iar apoi să accepte magenta culoare suplimentare și devenind de culoare roz-roșu; acestea sunt numite Gram-negative. colorație Gram datorită caracteristicilor structurale ale peretelui celular în grupuri de bacterii Gram-pozitive și Gram-negative, lungimea și forma pori, compoziția chimică neuniformă și structura stratului peptidoglican al peretelui celular al microorganismelor. violet de gențiană (sau cristal violet) și acid nucleic în citoplasmă prezența iodului (soluție Lugol) pentru a forma un complex stabil, care este insolubilă în apă și puțin solubil în alcool. Prin urmare, sub acțiunea alcoolului timp de 30 de secunde cu un cadru de peptidoglican bacterii multistratificate (gram) nu se decoloreze. In Gram-negativi bacterii strat peptidoglican are pori mari, care facilitează trecerea alcoolului; complexul rezultat este distrus, celula este albită.

Tehnicile de colorare acid-, un alcool, bacteriile rezistente la solutii alcaline. Microbii acestui grup (Mycobacterium tuberculosis, enterite paratuberculous la bovine, lepra umană și altele). Aparțin bacteriile Gram-pozitive. Pentru diferențierea lor se folosesc metode speciale de colorare, bazate pe diferite structura chimică a membranei și citoplasmei celulare. Compoziția acestor bacterii includ o cantitate semnificativă de grăsime, substanțe de ceară, în special acid stearic (inclusiv ftionovoy acid la 40%), astfel încât acestea sunt greu de a percepe culoarea. Dar, dacă acestea au fost pictate sub influența dezinfectant, este dificil de a fi decolorate acizi, alcooli și baze.

Cea mai comună metodă de bacterii colorare a acestui grup este metoda Ziehl-Neelsen. La medicament fix a pus o bucată de hârtie de filtru alb (pentru protecție din precipitat), se toarnă într-o soluție de fucsin carbolic, preparare de mai jos se încălzește la o flacără până când vaporii și lăsate să „punte“ (5-7 min). Apoi, vopseaua este turnat dintr-o bucată de hârtie (fără spălare) și decolorat cu soluție 3-5% apoasă de acid sulfuric (5-7), se spală bine cu apă și se colorează în continuare cu metilen Leffler albastru (4-5 min). Apoi, preparat a fost spălat cu apă și se usucă cu hârtie de filtru. Acid (un alcool, alcalino-rezistente) bacterii sunt colorat în roșu (nu se decoloreze acidul) și acid-rapid - în albastru, deoarece fucsin pata ușor, ele sunt ușor decolorate acide și percepe culoare albastru secundar.

Metode de celule microbiene nepermanente elemente de colorare. În structura celulei microbiene distinge elemente permanente și nepermanente. Permanent - este citoplasmei, coajă, substanța nucleară; Intermitenta - dispute, capsulă, flageli, care în anumite condiții, sunt formate numai din specii de bacterii, cu toate acestea sunt un caracter specific.

Okraskaspor. Rod în formă de bacterii care se formeaza in mediu (sol, apă, hrană pe mediul nutritiv) sub formă rezistentă de existență - disputa numită bacili. Când sporulare are loc în procesele celulare responsabile pentru condensarea citoplasmei, în scădere de apă liberă (până la 40%). Conținutul citoplasmatice acoperit membrane multistrat, a căror compoziție chimică asigură sporilor bună rezistență la căldură, uscare, acțiunea acizilor numeroase, baze, coloranți. Când a terminat disputa sporulare se află celule vegetative libere, fără reziduuri; când procesul dur de dispute, în funcție de tipul de microb, sau situat în centrul celulei sau la capăt (terminal) sau între celula de capăt și centrul (subterminal). Când preparatele de microscopie pătată metoda simpla sau celule vizibile porțiuni colorate vegetativi Gram și necolorate spori bine refractante lumina.

Metoda Aujeszky. Formularea uscată cu aer, fără a fixa, corodat 0,5% acid clorhidric cu încălzire (2-3 minute), se răcește, se spală cu apă și fixată în flacără. Apoi, medicamentul este plasat o bucată de hârtie de filtru, se toarnă soluția Ziehl lui, colorate cu preîncălzire la vapori (7-8 min), vopseaua este turnat, preparatul este tratat cu o soluție 5% de acid sulfuric (5-7), se spală bine cu apă. In plus, se colorează cu albastru de metilen (5,4 minute), din nou, se spală cu apă și se usucă cu hârtie de filtru. Mikroskopiruyut prin scufundare: partea vegetativă a celulei - albastru, disputele - roșu.

Metoda Moeller. preparare flacără fix este gravat cu 5% acid cromic (2-3 min), se spală cu apă, se usucă cu hârtie de filtru. Procedați la fel ca în metoda anterioară. Culoarea Rezultatul este același: partea vegetativă a celulei - albastru, disputele - roșu.

Metoda Zlatogorova. Procesul de pătare, la fel ca în cele două metode anterioare, dar fără mordant. După colorarea celulelor vegetative - albastru, disputele - rosu.

Metoda Peshkov. Pătarea fix, colorant albastru de metilen cu încălzire la fierbere spălare. Dokrashivayut neytralrota 1% apos (10 secunde), se spală, se usucă. Sporii sunt colorate in celule vegetative albastre - roșu.

Acoperirea capsulelor. Capsula - strat înveliș exterior derivat. Este o substanță mucinei cum ar fi, polizaharidic cu greutate moleculară ridicată. În prezența bacteriilor patogene kapsuloobrazuyushih capsula a fost observată numai în organism infectat ca un dispozitiv de protecție împotriva fagocitoza (în medii artificiale numai capsulele sunt formate prin adăugarea de ser sanguin sau sânge defibrinat). Kapsuloobrazovanie act de antrax, edem malign, diplokokkovoy septicemie. substanța capsular este grav pătată, deci detectarea folosind tehnici speciale de colorare, bazată pe fenomenul metacromă.

Metoda Mihina. preparare frotiu de sânge fix sau amprenta țesutului adipos (ficat, splină, rinichi) au fost colorate cu albastru de metilen, înainte de a vaporilor de încălzire (5-7 min). Vopseaua se toarnă, repede spălat cu apă (nu se poate spăla), se usucă cu hârtie de filtru. Celulele microbiene au fost colorate albastru, capsula - în roz deschis.

Metoda Romanovsky-Giemsa. specimene fixate au fost colorate așa cum este indicat mai sus: prepararea frotiu a fost plasată într-un vas Petri pe sticla sau bastoane de lemn amprenta în jos în pregătire se toarnă vopsea, culoare 40-50 min. Rezultatul este același ca atunci când pictura pe Mihin: celule microbiene au fost colorate albastru, capsula - în roz deschis.

Metoda Olta. soluție apoasă proaspătă safranina 2% se toarnă peste medicament și se incubează timp de 5-7 minute. Apoi, ușor se spală cu apă și se usucă. celulei vegetative - cărămizie capsulă - galben-portocaliu.