Metode de cercetare bacteriologică, director medic

Metode de examinare bacteriologic. Izolarea agentului din sânge (cultura sângelui) este o metodă de diagnostic precoce a bolilor. Bacteriemiei la pacienții cu boli-tifoide paratifoidă apare la sfârșitul perioadei de incubare, și nu dispare în timpul perioadei agitate a bolii și în timpul recidivelor. Rezultatele cercetării bacteriologice, într-o anumită măsură, depind de momentul capturării materialului și numărul de sânge semănate. Cu cât mai devreme debutul bolii produse prin cultura de sânge, cu atât mai mare probabilitatea de detectare a agentului patogen. În prima săptămână a sângelui pacientului tifoide luat din vena cubital în cantitate de 10 ml, la un moment ulterior și în timpul recidivei - 20 ml.

În prima zi a sângelui studiu inoculat 1:10 într-unul din mediile de fluid. Raportul menționat trebuie strict respectate, deoarece mai puțin microbii de diluție din sânge poate muri din cauza acțiunii sale bactericid. Pentru însămânțare sunt soluție 10% sau 20% din bulion colic vărsat 50-100 ml flacoane, carne-peptonă bulion suplimentat cu 1% glucoză în apă distilată sterilă - prin metoda N. N. Klodnitskogo în care liza eritrocitelor, produsele lor de dezintegrare, în același timp, oferă un teren propice pentru bacterii bune. Este de asemenea posibil să se utilizeze apă sterilă de la robinet. Cele mai bune rezultate se obțin atunci când materialul de însămânțare în bulion de bilă. Dacă este imposibil să se producă culturi de sânge în loc, împreună cu serul sau cheag citrata sânge (10 ml de sânge a fost turnat într-o eprubetă cu 2 ml de 5% citrat de sodiu steril) este trimis la laborator. un cheag de sânge în laborator zdrobit și placate într-una din aceste medii. Fiolele au fost plasate într-un incubator la 37 ° C

A doua zi a studiului. După 14-24 ore de la începerea studiului materialului însămânțat într-un vas Petri pe mediu Endo sau mediu cu eozină și albastru de metilen (mediu Levin). Nu este recomandat pentru mediul de plantare Ploskireva bețele-tifoide parathyphoid găsite în sânge, sunt tipul de putere nu se schimba paratrofami obligatorii imediat tipul de alimente pe metatrofny (de exemplu, substraturi organice moarte). Prin urmare, acest mediu care conține săruri biliare, bastoane tifoidă cresc foarte slab sau nu cresc. În absența creșterii bacteriilor după prima inoculare produc ulterior după 48, 72 ore, iar în ziua a 5-a și a 10. În cazul în care agentul patogen nu a fost posibil să se aloce, dat un răspuns negativ. În cazurile îndoielnice, se recomandă din timp în timp - 1 la fiecare 3-4 zile - pentru a produce recolte înainte de a 24-a zi de la data luării materialului. Un răspuns negativ este dat încă pe 7-a zi.

A treia zi a studiului. Crescute pe mediu Endo și Levine, colonii „suspecte“ (colonii pe mediu Endo patogeni incolor) a fost identificat, pentru care 2-3 colonie subcultivat pe agar și mediul înclinate Russell.

A patra zi a studiului. Și să ia în considerare rezultatele înregistrate pe un mediu de însămânțare a lui Russell, studia proprietățile morfologice ale culturilor izolate în frotiul colorat prin colorare Gram. Definiți mobilitatea - prezența sau absența flagella - în agățat picătură sau zdrobite, luate din cultura bulion 4-6 de ore. Pentru această cultură agar (o buclă) a fost inoculată în 1 ml de pre-încălzită ușor bulion. Cultura selectat passaged (tuburi 2-3) la sâsâitură mediu cu manitol, sucroză și agar înclinat, și 2 tuburi cu bulion de carne-peptonă, în care un tub este plasat o fâșie de hârtie de filtru, îmbibate cu soluții speciale pentru determinarea hidrogenului sulfurat și indol (desfășurat „numărul pestriță“).

A cincea zi a studiului. Modificările în extins „rândul pestriță.“ În prezența gazarea da reacție de aglutinare cu un amestec de Salmonella seruri. Dacă o reacție pozitivă se realizează reacția de aglutinare cu O- și N-seruri și răspunsul final la ieșire bazat pe multitudinea de caracteristici.

Izolarea mielokultury realizată prin însămânțare rezultat os punctiformă măduvă 3-5 ml biliar steril bovin sau în 25-30 ml de 10% bulion colic, se pune într-un termostat și a doua zi a mediului pentru a produce Endo reseeding sau Wilson - Blair. etapele ulterioare ale aceluiași cercetare.

Izolarea bacteriilor din fecale. De la 8 până la 10-a zi a bolii, de obicei, a treia săptămână la pacienții cu febră tifoidă, bacteriile germen sunt excretate în fecale. Pentru a studia luând ultimele porțiuni ale consistenței scaun lichid, este emulsionată într-o soluție de clorură de sodiu izotonică (1:10) și lăsate timp de 30 de minute înainte de decantare particule grosiere. Pentru însămânțarea o picătură de material prelevată de la suprafața lichidului.

În prima zi a materialului de studiu este inoculat pe îmbogățirea mediului - bulionul biliar, mediul de magneziu, Muller, Kaufman - și a pus într-un incubator. În a doua zi a studiului cu îmbogățirea mediului face culturile de pe cupe cu mass-media Ploskireva, Endo și Levine și Wilson - Blair (bismut sulfit de agar). În etapele ulterioare ale studiului sunt aceleași ca și în alocarea culturii de sânge.

Izolarea bacteriilor tifoidă-germen grup de urină este mai bine pentru a produce a doua-a treia săptămână de boală. Înainte de a lua materialul trebuie să se spele cu o soluție sterilă de clorură de sodiu izotonică soluție de deschidere externă a uretrei; femei e mai bine să ia un cateter urinar. Pentru cercetare ia 20-30 ml de urină. După centrifugare, peleta a fost inoculată în agar-agar-sulfit de bismut mediu 2 cești Ploskireva sau. Supernatantul a fost însămânțat pe mediu de îmbogățire (10% bulion bilă) și pus într-un termostat, timp de 24 ore, apoi inoculate într-un mediu electiv ceașcă 2. Coloniile izolate au fost identificate în mod obișnuit.

Un studiu al conținutului duodenal - biliar. Metoda cea mai des utilizată în faza de convalescență. Secreția biliară a fost colectată în timpul de detectare în tuburi sterile. Conținutul duodenale inoculate în flacoane cu 50 ml de bulion, iar restul materialului, împreună cu culturile plasate într-un incubator la 37 ° C în ziua următoare, face 2 cesti insamantarea cu mediu diferential solid. Coloniile izolate identificate așa cum este descris.

Extrem de sensibil și promițătoare în diagnosticarea precoce a tifoidă și paratifoidă este metoda imunofluorescentă prin care a examinat sânge din primele zile ale bolii, fecale de a 10-a zi, conținutul duodenale pe 10-a zi a temperaturii normale a corpului. Specific fluorescent eticheta tifoide seruri parathyphoid-bacterii, care sunt determinate ulterior prin microscopie fluorescentă. Metoda permite diagnosticarea bolii in 10-12 ore de la începutul studiului.

diagnosticul serologic al febrei tifoide, boli germen. Din a doua săptămână a bolii apar în sângele pacienților cu anticorpi specifici, care pot fi determinate prin reacția Widal. Când tifoidă și paratifoidă acumulează O-, și apoi N-aglutinele. În cursul bolii este uneori detectată și Vi-aglutinele, dar acesta din urmă, spre deosebire de sitelstva, dar nu au valoare de diagnostic. Determinarea în sângele pacienților cu aglutinele specifice la tifoide patogen și germen (reacția Widal) poate ajuta la stabilirea diagnosticului în perioada acută a bolii și în timpul convalescenței.

Când salmonella reacția Widal este o metodă de diagnostic auxiliar. Trebuie amintit faptul că forma mai puțin frecventă a bolii cu răspunsul imunologic slab. Foarte adesea titruri scăzute ale aglutinele, până când absența lor, au fost raportate la pacienții tratați cu antibiotice.

reacția Widal ia 1-3 ml de sânge de la un deget sau vena cubital într-un tub steril. Pentru a accelera de coagulare a pus într-un incubator timp de 30 de minute. Coagulat încercuiesc de sânge pipetă de sticlă și plasat într-un frigider până la un ser supernatant limpede. Cheagului însămânțări (hemocultura). Aglutinarea care prezintă cu H și O-tifoidă, A și B, diagnosticums germen. Serurile au fost diluate, începând cu un titru de 1: 100 până la 1: 800, prin următoarea procedură. În eprubetă se toarnă 9,9 ml de soluție izotonică sterilă de clorură de sodiu și 0,1 ml de ser de test - preparat diluție 1: 100. Tuburile 4 de testare (a numărului de antigeni utilizați în reacția Widal) și ser de control care deservesc singur, este distribuit 5 ml de ser diluat la 1 ml. Din restul de 5 ml de ser (diluție 1: 100) 1 ml se toarnă și se adaugă la 4 ml de soluție 4 ml clorură de sodiu izotonică pentru a se obține o diluție de 1: 200. 4 ml din diluția 1: 200 este, de asemenea, se toarnă în 4 tuburi de 1 ml, iar 4 ml rămași din nou adăugat 4 ml de soluție izotonică de clorură de sodiu pentru a se obține o diluție de 1: 400. diluții ulterioare (1: 800, 1: 1600) produc metoda descrisă. Tuburile 4 care sunt controlate de antigeni este turnat, 1 ml de soluție izotonică de clorură de sodiu. În toate tuburile de testare, cu excepția celor care sunt serul de control, se toarnă 1-2 picături de instrumente adecvate de diagnosticare. tuburile stative sunt agitate și plasate în termostat la 37 ° C timp de 24 h H aglutinare (krupnohlopchataya) are loc după 2 ore, Despre aglutinare (bob) -. Considerabil mai târziu. Intensitatea reacției, după 24 de ore sarbatoresc titrului de diagnosticare reacția Widal la o diluție de cel puțin 1 :. 200 în prezența manifestărilor clinice.

Rețineți că această reacție poate fi pozitiv și în alte boli - tuberculoza, malaria, bruceloza, tumori maligne si unele state (sarcina). Vidal de reacție pot fi persoane fizice pozitive și sănătoase (răspunsul consumatorilor), vaccinate și care au fost supuse în boala trecut (răspuns anamnestic). Pentru a spori specificitatea reacției Vidal Fischer soluție diluată propusă hipertonică ser de clorură de sodiu (2,9 și 5,8%). Aceasta conduce la o reducere de grup sau reacțiile de eliminare. Valoare crește reacție de aglutinare cu studii repetate, atunci când o dinamică boala stabili creșterea titrului de anticorpi. Când paratifoidă reacție A Widal poate fi titrului negativ sau mai mic de anticorpi de grup specific.

reacție în ultimii ani, recunoașterea bolilor enterice utilizate pe scară largă de hemaglutinare pasivă (PHA) Antigenii cu bacterii tifoidice parțiale. PHA turnate sensibilitate și specificitate mare, pozitiv este a 5-a zi de boală. Titrul diagnostic minimă la pacienții cu febră tifoidă, paratifoidă, salmoneloză O-antigen - 1: 200. Reacția a fost pus în dinamica de creștere pentru a determina titrul de anticorpi.

Metode pentru diagnosticul de laborator al bacteriilor cu tifoidă și paratifoidă. Examenul bacteriologic de fecale, urină și conținutul duodenal se realizează prin metode convenționale. Cele mai bune rezultate se obțin atunci când se utilizează medii selenitovyh.

În legătură cu alocarea frecvenței de bacterii este de multe ori nu este posibil să semene patogen. Marea majoritate a transportatorilor de bastoane tifoide detecta microbi care conțin Vi-antigen, în legătură cu care sângele purtători acute și cronice apar Vi-anticorpi (în sângele pacienților, acestea sunt mai puțin probabil). Titrul reacție diagnostic 1:20 și mai mare. In paralel cu reacția Vi aglutinare (cu ser încălzit) plasat reacția Widal (ser nativ), cu H și diagnosticums O-tifoidă. In bacillicarriers tifoide seruri H titru de anticorpi de 1: 200 până la 1: 800 se găsesc în 60-80% din cazuri. Prezența combinație de anticorpi H și Vi-specific are valoare de diagnostic pentru identificarea transportatorilor de bastoane tifoidice.

De metode de cercetare suplimentare pentru a identifica transportatorilor de bastoane tifoide folosit testul-alergie de piele cu Tifina River și cu PHA Vi-antigen.

Astfel, o condiție importantă pentru succesul luptei împotriva bolilor-tifoide germen este depistarea precoce și completă și neutralizarea surselor de infecție. In prezent, febra tifoidă apare sporadic. Astfel, boala mai lung și nu este însoțită de toate caracteristicile tipice ale formei clasice, care împiedică recunoașterea clinică.

În legătură cu examinarea de laborator complex de mai sus devine importantă.