Diagnosticul microbiologic al tusei convulsive și parakoklyusha

Material pentru studiu: sputa, mucusul din nas și gât. Materialul luat cu un tampon de bumbac steril din nazofaringe unui copil bolnav. Pentru a lua materialul de la copii Malenov-cal TAMPON fierte pe un elastic pro-portage subțire administrat intranazal.

Examinarea microscopică (Schema 14.2.2). Metoda Bacteriile microscop ca atare pentru diagnosticarea pertussis nu este aplicabilă. Pentru detectarea rapidă și identificarea Bordetella pertussis folosind metoda imunofluorescentă (vezi. De mai jos).

Examenul bacteriologic. Metoda de bază diagnostic Labora-Tornio de pertussis. Material pentru semănat luate prin tampon nazofaringian sau prin „plăci de tuse“. Pentru a face acest lucru, în momentul în care tuse deschis vasul Petri cu mediu nutritiv este mutat la gura copilului și țineți pentru 6-8 șoc tuse. captarea corectă și timpurie a materialului face posibilă alocarea agentul cauzator în stadiul inițial al bolii cu 80-90% dintre pacienți. Materialul AMC inoculat pe mediu sau sânge - sânge agar lactic agar cu sânge de cartof (mediu Bordet-Gengou) și. S-a adăugat mediul de cultură pentru a inhiba penicilina creștere microflora străine. Coloniile de B.pertussis în mass-media Set-guvernamentale apar, de obicei, 48-72 ore kultivirova-TION. V.parapertussis - ceva mai devreme: 24-72 ore Bordet înălțime formă mică (cu diametrul de aproximativ 1 mm) colonie lucios convex umed .. La AMC Serov colonii au o culoare crem, iar pe un mediu Bordet-Zhang-cumpărare se arată chuzhny sau strălucire mercurial. Colonii V.parapertussis mai multe cereale Nye. Pe Bordet-Gengou agar cu sânge de mediu și lactic ei formează zona limitată hemoliză. Din coloniile crescute pe plăci de preparate frotiuri colorate conform metodei Gram și mikroskopiruyut. În prezența frotiuri ovoide tije Gram-negative, a pus răspunsul de orientare agglyuti-națiune cu pertussis și parakoklyushnoy seruri. Apoi coloniile suspecte pasate în tuburi pentru studiu lung Sheha a culturilor pure.

Identificarea culturilor selectate pentru a produce Ba-Vania studiu cuprinzător morfologice, kultural-TION, biochimice și serologice proprietăți (vezi tabelul. 14.2.2). Spre deosebire de alte Bordetella B.pertussis nu crește pe agar nutritiv simplu și nu se schimba culoarea mass-media speciale-feeder guvernamentale.

Tabelul 14.2.2. Caracteristici distinctive ale Bordetella spp.

agar (simplu) - +

culoare
agar tirozina +

Bright maro schimbare de culoare de culoare:

agar cu sânge - Întunecare -

generic (comun) 7 7 7

specii (e specific) 1 14 decembrie

Cheie: (+) - prezența caracteristică; (-) - otsutst Wie feature; cifre indică numărul de antigeni.

Pentru determinarea ureazei în aglutinare tuburi face 0,3 ml dintr-o soluție de uree 2%, 0,3 ml de suspensie densă a culturii de testare și 2-3 picături de soluție de alcool fenolftaleina 0,1%. În cazul pozitiv apare după 20-30 de minute colorație purpurie indicând divizarea Leniye ureazei-uree.

Bordetella identificarea serologică, specii de diferențiere-TION și definiția serotipuri (serotipizare) DYT CHECK în reacțiile de aglutinare cu seruri adsorbit factorial. Se presupune că antigenul (factorul) 7 este generic, iar antigenul (factor) unic la V.reg 1-tussis, 14 - 12 și V.parapertussis - B.bronchiseptica.

În cazul în care diagnosticul bacteriologic al pertussis este un coș de-niknut nevoie pentru diferențierea Bordetella hemo-Philus influenzae. H.influenzae adesea găsite pe mucoasa tractului respirator și provoacă pneumonie și alte boli inflamatorii ale tractului respirator. Spre deosebire de Bordetella H.influenzae creste doar pe medii de cultură sânge - agar cu sânge, „ciocolată“ Levinthal agar cu hemină adăpostirii și coenzima dehidrogenaza. de cercetare bacteriologice continuă, unele cel puțin 5 zile.

Metode de diagnostic rapid: imunochimice, biochimice și de cercetare-CAL biologice moleculare. Studii imuno-chimice. IF metodă: tampon făcut două frotiuri au fost uscate în aer și fixat la flacără. Un frotiu fluorescent tratate protivokok-

anticorpi Lushnja, alți anticorpi - parakoklyushnymi. Preparatele mikroskopiruyut în NE microscopie fluorescentă, scanare cel puțin 50 de domenii de vedere. Un rezultat pozitiv indică detectarea întunecos-TION celulelor bacteriene cu o aureolă luminoasă clară.

cercetare biologica biochimice si moleculare. Materialul de testat obținut de la locul infecției este utilizat pentru detectarea ADN-ului patogen prin PCR. În cazul în care respectivul mole-rece poate face un diagnostic preliminar.

Serodiagnosis. Aglutinarea și RSK este folosit în principal pentru confirmarea retrospectivă a diagnosticului și diagnostic diferențial al formelor atipice de pertussis. aglutininelor în sângele pacienților apar pe saptamana 3-4 bolii in creditele de 01:20 sau mai mare. În contextul copiilor tsinatsii VAK-masă împotriva tusei convulsive este importanta de diagnostic creșterea titrului de anticorpi în dinamica bolii, astfel încât reacția este pus din nou în 4-5 zile.

• Diagnosticul microbiologic al difteriei

MATERIAL PENTRU CERCETARE: tampoanele și mucoasa faringiană a nasului, cu suprafața de film și amigdale, dar soglotki. Material ia două steril de bumbac de contact din Tampa, dintre care unul a fost folosit pentru a prepara frotiuri, o alta - pentru însămânțare.

Examinarea microscopică (Schema 14.2.3). Frotiuri ok-rugozității metodei Gram, albastru de metilen de Leffler, prin Neisser. Pentru Corynebacterium diphtheriae caracterizat Nali-Chie granule volutin diametral dispuse și amplasarea literei "V" (vezi. Fig. 2.2.4). Corynebacterium pseudodiphth-eriae și difteroizi au volutin cereale conțin sau nu la capete și de-a lungul lungimii tijei. In plus, bacteriile înșiși sunt aranjate într-o palisadă. Utilizarea de microscopie de fluorescență permite creșterea eficienței studiilor-TION. Astfel C.diphtheriae pot fi distinse de alte bacterii CORINE-brun-roșie luminescență boabe volutin care le dobândesc după colorarea rujeola-fluorocrom fosfină. Citoplasmă acestor bacterii dă o lumină verde sau galben. Cu toate acestea C.diphtheriae schimba adesea morfologică și Gia lor, în special atunci când renovarea gât cu antibiotice. Prezenta examinare microscopică perfuzie timp în difterie utilizat, practic, datorită fiabilității sale reduse (o frecvență mare de rezultate pozitive false și rezultate lozhnootritsatel-TION).

Examenul bacteriologic. Este un lider de meto-

Casa de diagnosticare difteric. Materialul inoculat pe agar cu sânge și mediu nutritiv electivă care contin telurit: mediu Clauberg (agar nutritiv cu telurit de sodiu, gli-Cerinu și sânge defibrinat) etc. In medii cu Telurit întârziată coci creștere și alte faringelui microflora care promovează creșterea patogenului difteriei .. Pe telluritovoy formele medii C.diphtheriae colonii negre (Fig 14.2.1 ;. Element de inserție) datorită restaurării Telurit (biovar gravis generează colonie neagră cu striuri radiale gri suprafață asemănătoare cu ECE-curent daisy biovar mitis - colonii rotunde convexe negru culoare). Coloniile tipice reprezentate tije zhitelnymi Gram-clavate cu localizare caracteristică ce conține volutin cereale, subcultivate pe agar de sânge pentru a obține o cultură pură.

Pentru a confirma diagnosticul de difterie este mai întâi necesar să se stabilească o cultură toxigenicitatea dedicat (capacitatea de a produce toxina difterică). Prezența toxina este determinată prin diferite reacții serologice (precipitare în agar, ELISA, etc.). De asemenea, metoda PCR utilizată pentru detectarea prezenței bacteriilor y negativ izolate de vulpe gena care controlează sinteza toxinei difterice. Până de curând, metoda convențională de toxigenicitatea op-definiteness a fost reacția de precipitare în ser agar difterie antitoxică. PCR si tehnici ELISA dezvoltate în ultimii ani sunt mai sensibile si da un rezultat în 3-5 ore.

Determinarea toxigenicitatea o reacție de precipitare: într-un vas Petri de agar nutritiv conținând ser de cal 15-20%, 0,3% maltoză și 0,03% cistină, pune o fâșie de hârtie de filtru impregnată cu un ser difterie antitoxică conținând 5000 AU / ml . Vasul a fost uscat la 37 ° C timp de 30 minute și cultura inoculată studiate ca accidente vasculare cerebrale perpendicular pe hârtie în regiunea de 0,6-0,8 cm de marginea hârtiei. Ca martor cunoscut toxigenic cul-rotund. Culturile sunt incubate la 37 „C până la culturile ziua următoare de toxigenic Când reproducerea la conexiunea cu anticorpii antitoxice curent formează un precipitat ca Sina linii albe în mediul dens. -“ Mustățile „(vezi figura 10.1.7 ..).

Cultura izolată identifică și diferențiază de corinebacterii nonpathogenic similare cu caracteristici morfologice din punct de vedere, prin criterii de cultură și biochimice: mostre pentru tsistinazu, ureazei, fermentare Carbohidrati-ing, etc. (Tabelul 14.2.3) ... În cazul alocării culturii nontoxigenic prezintă aglutinare suplimentară cu