Determinarea conținutului de acid uric

In fluidele biologice prin metoda Mueller și Seifert.

Determinarea azotului urinar totale prin metoda Kjeldahl.

Principiul. Metoda se bazează pe capacitatea de a restabili reactiv uric fosfat acid de Wolframat (reactiv Folin), pentru a forma compuși, intensitatea culorii care este proporțională cu concentrația acestui acid.

Progresul. Tubul de centrifugare este realizată din 1,5 ml de ser sanguin, apă și soluție TCA 20%. Stârnite 5 min se centrifughează timp de 10 minute la viteza de 3000 rot / min. Ia fost adăugat în acesta reactivi în conformitate cu diagrama tuburi (experimentale standard) două curate gradat.

Pe peleți (0,5 ml de ser)

Soluție standard de acid uric, 0,2 mg / ml

Acid tricloracetic 20%

Soluție saturată de carbonat de sodiu

reactiv Folin lui (atenție!)

X = (PFU. X 0,01 x 200) / (Est. X 168) unde Eo. - proba test de dispariție; Eats. - proba standard de dispariție; 0,01 - greutate acid uric într-o probă de soluție etalon luate pentru reacția (mg); Coeficientul de recalculare în 1 litru de ser - 200; 168 - greutatea moleculară a acidului uric.

Principiul. Metoda se bazează pe capacitatea de a restabili reactiv uric Wolframat fosfat de acid (reactiv Folin) în albastru tungsten fosfat, intensitatea culorii care este proporțională cu concentrația de acid uric. Numărul de tungsten sau fosfat B este determinat prin titrare cu o soluție de hexacianoferat de potasiu (III). fosfat Ultima oxida tungsten albastru, care dispare culoarea.

3. Determinarea azotului total țintă de urină prin metoda Kjeldahl.

Principiul. Urina a fost ars (mineralizate) în acid sulfat concentrat. Astfel azot toți compușii organici și anorganici ca sulfatul de amoniu se leagă cu acid merge în sulfat de amoniu, care reacționează cu reactivul Nessler, compusul formează o culoare galben-portocalie. Intensitatea culorii este proporțională cu concentrația soluției de azot.

Progresul. 1. Mineralizarea. În eprubetă se toarnă 0,5 ml de urină s-a adăugat 0,05 ml conc. sulfat de acid. Arderea este efectuată într-o baie de nisip: tubul trebuie să atingă numai stratul superior de nisip. Inițial de apă se evaporă, urina capătă o culoare maronie. Tubul a fost îndepărtat din baie, se lasă să se răcească, se adaugă 2 picături de perhidrol și pus din nou incinerator până lichid incolor. Ar trebui să verificați culoarea lichidului din tubul după răcirea acestuia, ca parte a lichidului, care apare incolor într-un cald, întunecat în timpul răcirii. După tub de răcire se adaugă 10 ml de apă distilată fiartă, neutralizată cu soluție de hidroxid de sodiu M 12,5 la o reacție slab alcalină, determinată prin schimbarea culorii de turnesol de la roșu la albastru. Excesul de bază în cazul neutralizarea soluției rezultate la turbiditate. eșec fundație determină pierderea sărurilor de mercur de reactiv Nessler, iar experiența este considerată stricată.

2. Reacția Color (nesslerizatsiya). Tubul de testare se adaugă 0,5 ml de reactiv Nessler, prin care conținutul tubului este vopsit în culoarea galbenă a intensitate variabilă în funcție de conținutul de azot. In paralel cu probele experimentale tratate cu standard de 0,2 ml de soluție standard de sulfat de amoniu; 0,05 ml conc. sulfat de acid; 0,3 ml de soluție de hidroxid de sodiu 12,5 M; 0,5 ml de reactiv Nessler și 9,8 ml de apă distilată. mostre experimentale standard și se măsoară în raport cu controlul, la o lungime de undă de 440-450 nm în 5 mm cuvetă. Controlul a fost preparat în același mod ca proba standard, dar în locul soluției etalon de sulfat de amoniu s-a adăugat apă. Eșantionul de control ar trebui să aibă o tentă de culoare galben deschis. Un control al culorii mai saturate indică prezența azotului în apă distilată (amoniac). Calculul se realizează conform formulei: Sup = cSt # 8729; .. (PFU. / Est.), Unde Sop. - concentrația totală de azot în urină (mmol / l); Apr. - proba test de dispariție; Cst. - concentrația de azot total în standard; Mănâncă - dispariția unei probe etalon.

Valoarea clinică și diagnostic. La zi 10-17 g persoană produce azot, care reprezintă 80-90% din uree. Prin această măsură determină echilibrul de azot al corpului, precum și starea funcțională a ficatului, rinichi și alte organe.

Subiect: biosinteza acizilor nucleici și proteinelor (biosinteza matricei). Transferul informației genetice. Bazele genetica moleculara.

Relevanța. Una dintre cele mai importante realizări ale biochimiei moderne și cele mai noi secțiuni sale este descifrarea mecanismelor biosintezei acizilor nucleici și a proteinelor. Aminoacizii situate într-un lanț de polipeptidă nu este la întâmplare, ci într-o secvență definită cu precizie, care asigură structura unică și funcția. Mecanismul biosinteza proteinelor trebuie să aibă un sistem precis de coordonare care programează automat includerea fiecărui rest de aminoacid într-o locație specifică a lanțului polipeptidic. Sistemul de coordonare determină structura primară și structura secundară și terțiară a moleculei de proteină definită primară, proprietățile fizico-chimice și a structurii chimice. Funcții de economisire, implementare, și transmiterea informației genetice se realizează, acizi nucleici (ADN, ARN). ADN-ul servește ca un purtător de informații genetice care pot fi transmise prin intermediul unei labil decât structura ADN - ARN. Singurele materiale în care se realizează informația genetică, sunt macromolecule proteice. Procesul de transfer de informații genetice determină dezvoltarea și activitatea organismului viu. Funcția de specialitate celulară (ficat, creier, mușchi, etc.), depinde de un set de proteine ​​și, în particular, enzimele care controlează procesele metabolice la nivel celular.

Scop. Detaliu învăța șablon biosinteză în scopul de a utiliza aceste cunoștințe pentru a înțelege mecanismele de reglementare a activității genei în procariote și eucariote, efectul inhibitorilor biosintezei matricei - medicamente si toxine bacteriene, mecanismele moleculare de variabilitate genetică a biosintezei moleculare proteinelor patologie, principii de tratament și profilaxia bolilor moleculare, utilizarea recombinant ADN-ul si clonarea genelor in medicina.

exerciţii

replicare 1. ADN; semnificație biologică; replicare semi-conservatoare. Deschiderea J. Watson și Frederick. Crick.

2. Schema generală a biosintezei lanțurilor ADN. Enzimele replicarea ADN-ului în procariote și eucariote: schema de replicare a ADN-ului.

3. Mecanismele moleculare ale replicării ADN-ului: valoarea catenei ADN antiparalel: fragmente Okazaki. Etapele sintezei moleculelor de ADN ale unor copii.

4. Schema generală de transcriere ARN. ARN-polimerazei procariote și eucariote.

5. Etapele și enzime de sinteza ARN. semnale de transcriere: promotor de inițiere, terminator porțiune a genomului.

6. Prelucrarea - modificarea posttranscriptional a ARN-ului. Antibiotice - inhibitori ai transcripției.

7. Un genetic (biologic) structura codului triplet, proprietăți.

8. Sistemul ribozomal sinteza proteinelor, a componentelor sale. Structura ribozomilor eucariote.

9. Transportul activării ARN și aminoacizi. Aminoacil-ARNt sintetaza.

10. Etapele și mecanisme de traducere: inițiere, elongare, terminare. Inițierea ARNm și codoni stop; Rolul factorilor de proteine ​​ribozomii în traducere.

11. Modificarea post-translațională a lanțurilor peptidice. Regulamentul de radiodifuziune. Mecanisme moleculare de control al translației prin exemplul globină biosinteză.

12. Efectul substanțelor active fiziologic asupra proceselor de traducere. Antibiotice - inhibitori ai traducerea în procariote și eucariote, utilizarea lor în medicină.

13. Reglarea expresiei genei în procariote. Circuitul de F.Zhakobu și Zh.Mono: gene structurale și de control: un promotor, o genă de reglementare.

14. Caracteristici de organizare moleculara si expresia genomului ADN eucariotelor (exoni, introni, secvențe repetitive).

15. recombinare genetică în procariote (transformare, transducția, conjugare).

16. Semnificația biologică și mecanismele de repararea ADN-ului. Repararea mutațiilor genetice induse de UV; xeroderma pigmentosum.

17. Ingineria genetică sau prin tehnologia ADN-ului recombinant: concepte generale, importanta biomedicale.

18. Tehnologie gene de transplant și producerea de molecule ADN hibride. Clonarea genelor pentru a produce substanțe medicamentoase biotehnologice (hormoni, enzime, antibiotice, interferon, etc.).

19. Mutațiile: genomice, cromozomiale, genetice. Rolul în care cauzează enzimopaty și boli ereditare la om.

sarcini de testare pentru auto-control

11. Tânărul, în vârstă de 20 de ani, cu ajutorul reacției polimerazei diagnosticată cu infecția HIV. Indică faptul că este de bază în această reacție.

A. Genetic rekombinatsiya.V. Amplificarea genelor.

D. Gene mutatsiya.E. mutație cromozomială.