de fixare a complementului

Acasă | Despre noi | feedback-ul

fixarea complementului (RSK), se bazează pe faptul că un antigen specific - anticorp toate adsoarbe pe ea însăși GDS (legături) complement.

Această reacție este larg utilizat pentru identificarea antigenilor și, în special, abatorizare serodiagnosis infecții cauzate de spirochete * timetotal (Wasserman) rikketsiyamy și viruși.

DGC - un complex de reacții serologice. În ei de predare-există și să completeze cele două sisteme de antigen - anticorp. În esență, acestea sunt două teste serologice.

Primul sistem - pe o țio n n I este compus dintr-un antigen și un anticorp (un bine-cunoscut, celălalt nu). La aceasta se adaugă o anumită cantitate de complement. Atunci când antigenul și anticorpii acestui sistem este relevant, se conectează și complement se leagă. Complexul rezultat al disperse fin și, nu este vizibil.

La formarea acestui complex este recunoscut de un al doilea sistem sau indicator pe termen-hemolitic. Se compune din celule roșii din sânge de oaie (antigen) și, respectiv, corespunzătoare lor hemolitic ser (anticorpi) t. E. Gata, complexe imune. În acest sistem, liza de celule roșii poate avea loc numai în prezența complementului. În cazul în care primul sistem este conectat complement (cu conformitate cu antigen și anticorpii acestuia), al doilea sistem de hemoliză nu va - pentru că nu există nici un complement liber. Absența hemoliza (conține trompele-turbiditate sau precipita pe fundul RBCs ei) au fost înregistrate ca rezultat pozitiv RSK.

În cazul în care antigenul nu este un anticorp adecvat, complexul imun este format și komple-ment va rămâne liber în primul sistem! Restul liber, com plement-play al doilea sistem, provocând hemoliza, - rezultatul negativ RAC (conținutul tuburilor au fost transparente - „sânge lac“).

Componente de fixare completează:

Antigen - de obicei lizat, extract, haptena; mai puțin suspensie.

1.Antitelo-ser a sistemului pacientului
2. Complement - ser de cobai

3.Antigen - eritrocite de oaie

4.Antitelo - hemolizinei de eritrocite de oaie

ivzyaty Deoarece CRN este implicat într-un număr mare de slozhnyhkomponentov, acestea ar trebui să fie pre-titrată au reacționat în cantități exacte și în cantități egale: 0,5ili la 0,25, cel puțin 0,2 ml. Prin urmare, întregul test a fost efectuat vobemah 2,5, 1,25 sau 1,0 ml (volume mari furnizează rezultatele boleetochny tat). Titrarea componentelor de reacție se realizează vtom aceeași măsură în care se obține experiență înlocuind soluția izotonică nedostayuschieingredienty.

ser hemolitic (hemolizină). Serul a fost diluat de trei ori mai mică decât titrul (vezi. P. 211). Se prepară o diluție totală de ser pentru întregul experiment, volumul care este determinat prin înmulțirea volumului de ser într-un tub (de exemplu, 0,5 ml) la numărul de tuburi puțin mai lungi decât numărul experimentului.

2.Eritrotsity berbec. Se prepară o suspensie de 3% din celulele roșii din sânge de oaie spălate (vezi. P. 211) la întregul număr de tuburi din experiment. Pentru a pregăti sistemul hemolitic timp de 30 de minute înainte de ao introduce experiență volume egale mixte ale suspensiei diluate de eritrocite și a hemolizinei, izvorate ser de eritrocite, bine amestecate și incubate timp de 30 min la 37 # 730; C.

3.Komplement diluat obicei 1:10. Înainte de fiecare experiment trebuie să se titreaza. Titrul complement - este cea mai mică sumă pe care atunci când este adăugat la sistemul este supus hemoliza hemolitici complet timp de 1h la 37 # 730; C. titrarea Schema de complement sunt prezentate în Tabelul 21.

Atenție! Cadou titrat în aceeași măsură în care a pus experiența principală, înlocuind ingredientele lipsă soluție izotonă.

Analiza profitabilității. Controalele nu ar trebui să fie chiar și hemoliză, ca unul dintre ei nu este un complement, în celălalt - hemolizinei. Controale indică absența reacției componentelor gemotoksichnosti (capacitatea spontană de a liza celulele roșii din sânge).

In tabelul de mai sus. Exemplul 21 titrului complementului în diluție 1:10 este 0,15 ml. In experimentul activitatea complementului poate să scadă datorită absorbției nespecifice a celorlalte componente ale reacției sale, astfel încât experiența compliment cantitate crescută: luând titru după administrarea primei doze. Această - doză de lucru. În acest exemplu este de 0,2 până la diluție 1:10 de complement. Deoarece toate componentele implicate în RNC, trebuie luate în volume egale (în exemplul nostru, este egal cu 0: 5 ml), este necesară dozarea complementului de lucru (ML1 0,2: 10) pentru a adăuga 0,3 ml de soluție izotonică. Pentru toate experiența volumul fiecăreia dintre ele (și se completează soluția izotonică.

Pentru toate experiența volumul fiecăreia dintre ele (complement și izotonică soluție) înmulțită cu numărul de tuburi implicate în RNC. De exemplu, pentru experimentul în tuburile de testare 50 trebuie să ia 10 ml completează 1:10 (mlh50 0,2) și 15 ml dintr-o soluție izotonică (0,3 mlh50).

4. Antigenul tipic gata preparat indicând titrului său, adică suma care urmează să fie conținută în 1 ml de antigen după diluare. de exemplu, un titru de 0,4 la capătul său diluat în 0,96 ml de soluție izotonă. Experiența antigen primesc o cantitate egală cu jumătate titrului (0,5 ml). Această doză de lucru sale. Numita de diluție a antigenului comun pentru întregul experiment, 0,5 ml de înmulțirea cu numărul de tuburi din experiment.

5. Anticorpul - serul pacientului. Serul proaspăt înainte de experiment inactivat pentru a distruge complement existente în acesta. În acest scop, se încălzește timp de 30 min la 56 # 730; baie de apă C sau inactivator cu termoregulatoruluicu. Această din urmă metodă este preferabilă: se elimină posibilitatea de ser supraîncălzire, adică ei ... Denaturarea Denaturate syvo-Rothko nu sunt potrivite pentru experiență. Serul pacientului este utilizat în mod tipic la o diluție de 1:10 până la 1: 160.

Furnizarea unui experiment de bază

La înființarea experiența extrem; se adaugă componentele de secvență esențiale debitului. Experimentul este efectuat în două etape.

Etapa I. Tuburile au fost turnat cantitatea dorită de soluție izotonică de clorură de sodiu, apoi - volumul necesar de ser diluat și în aceeași doză volum de lucru de antigen și se completează. Experiența va însoți controlul tuturor componentelor participante: antigenul din ser, sistemul complement hemolitic.

Tuburile au fost centrifugate bine și se incubează la 37 ° C 45 min-1 h sau la 4 ° C ( „RSK rece“) timp de 18 h. In acest timp, prezența complexului specific-PROIS se leagă de complement. Reacționând „la rece“ crește în mod semnificativ sensibilitatea și specificitatea acesteia.

Faza II. După incubare toate tuburile s-a adăugat 1 ml de sistem hemolitic, care a fost anterior incubate 30 min (sensorimotorie biliziruyut). Tuburile au fost agitate și puse înapoi în incubator.

Pe baza rezultatelor în. Tuburile au fost lăsate într-un termo-stat până la hemoliză completă la 2, 3, 6 și 7 tuburi (ser de control, antigen și completează pentru una și două doze). Mai întâi de toate hemoliza apare în flacon a 7, care este de două ori cantitatea de complement. Odată ce acest lucru se întâmplă hemoliza vitro și conținutul său va fi complet transparent, trebuie să urmați foarte atent restul comenzilor. Imediat ce lichidul din a 2, 3 si tuburi 6a devin transparente, îndepărtați urmele imediat trepied cu kami vadului din cuptor. Această experiență nu este reținută în cuptor mai mult decât este necesar, spune prezența unei turbiditate de lumină (hemoliza parțială), în tubul de testare a 5 - acesta este doar pe jumătate zîmbind doză de lucru de complement și hemoliza complet cu formularea corectă a experimentului nu poate fi.

Hemoliza în antigen ser martor (flacoane 2 și 3) indică faptul că dozele de ele au fost alese în mod corect și că, prin ele însele sau ser sau complement antigen nu sunt obligatorii.

În sistemul de control al hemolitic (culoarul 4) cu funcționarea corectă nu trebuie să fie chiar hemoliza - îi lipsește completează.

Asigurându-vă că controalele au fost luate în considerare în mod corespunzător, puteți experimenta. Absența hemoliză în tuburi experiențele considerate pozitive rea-TION. El sugereaza ca serul are anticorpi specifici pentru antigenul luate. Format dintr-un complement legat complex și redare pyatstvoval participarea sa în reacția hemoliza. Atunci când se produce hemoliza, rezultatul reacției este evaluată ca fiind negativ în eprubete. În acest caz, nu există nici o corelație între antigeni și anticorpi, complement nu este înrudit și este implicată în reacția hemolizei.

Simultan cu seruri pacient da aceeași experiență cu ser pozitiv cunoscut (m. E. Un ser, care are un anticorp la antigen) și cunoscut negativ, în care nici anticorpi specifici. Cu formularea adecvată a experimentului, în primul caz să fie întârziere hemoliză în al doilea caz se va hemoliză.

Intensitatea reacției este exprimată după cum urmează:

+ + + + hemoliza generală întârziere. Eritrocitele Obra-formează o turbiditate uniformă sau sedimentat. În acest caz, lichidul din tubul devenit incolor;

+ + + aproximativ 25% din eritrocite lizate. Precipitatul este mai puțin lichid ușor roz pe ea. Rezultatul RAC evaluează, de asemenea, cât de mult pozitiv;

+ + aproximativ 50% din eritrocite lizate. Precipitatul este un lichid mic, roz. Un rezultat pozitiv RSK;

+ aproximativ 75% din eritrocite lizate. Minor-ing reziduu intens colorat evreu os deasupra. Rezultate contestabile RSK;

- toate lizează celulele roșii din sânge. Lichid intens colorat și limpede ca cristalul. Rezultatul negativ al re-RAC.