Sterilizarea echipamentului de laborator

Sterilizare (de la sterilis Latină - infructuoase) - sterilizarea eliberării de toate lucrurile vii. În practică, sterilizarea microbiologică supuse unelte, vase, medii de cultură și alte materiale utilizate în lucrare.

Sterilitatea poate fi realizată prin metode fizice și chimice.

Sterilizare, spre deosebire de dezinfecție, prevede distrugerea în obiectul sterilizabile tuturor vegetative și spori, microorganismele patogene și nepatogene. Sterilizarea se realizează în diverse moduri: .. abur, aer cald uscat, la fierbere, filtrare etc. Alegerea metodei depinde de calitatea și sterilizarea retortă proprietățile obiectului microflorei.

Pregătirea și sterilizarea echipamentului de laborator

Înainte de sterilizare, sticlărie de laborator se spală și se usucă. Eprubete, flacoane, sticle, saltele și flacoane închise cu dopuri de bumbac-tifon. Pe partea de sus a congestiei pe fiecare vas (cu excepția tuburilor) a pus capace de hârtie.

Cauciuc, plută și sticlă dopuri sunt sterilizate într-un pachet separat, legat de gâtul ware. Sterilizată placă Petri învelite în hârtie pentru 1-10 bucăți. pipete Pasteur din 3-15 PC. învelit în hârtie absorbantă. Porțiunea superioară a fiecărei pipetă a pus o bucată de bumbac, împiedicând pătrunderea materiei în mediul înconjurător. Atunci când împachetarea pipete trebuie să fie foarte atenți să nu se rupă la sfârșitul sigilat capilarelor. În timpul funcționării pipeta din pachet este îndepărtat de la capătul superior.

În partea superioară a pipetei gradate ca în lâna de siguranță introdusă o pipetă Pasteur și apoi învelite în hârtie grea, benzi de pre-tăiate cu o lățime de 2-2,5 cm și o lungime de 50-70 cm. Fîșia a fost plasată pe masa, capătul din stânga este pliat și înfășurat ei pipeta sfat, apoi rotiți pipeta, aceasta banda de hârtie navertyvayut. Pentru a preveni hârtia desfasurata, capătul opus al toarce sau pastă acestuia. Pe hârtie înfășurată pipetă de volum înscrie. În prezența canistre gradat pipetele sunt sterilizate în ele.

Vesela de laborator sterilizate:

a) căldură uscată, la o temperatură de 180 ° C și 160 ° C, respectiv, timp de 1 oră și 150 minute.

b) într-o autoclavă la o presiune de 1,5 atm. timp de 60 de minute pentru a distruge microflora spor - 90 minute la 2 atm.

Sterilizarea seringi. Seringile sunt sterilizate în formă explodată cilindru și piston separat într-o soluție 2% de carbonat acid de sodiu timp de 30 min. Atunci când se lucrează cu Sporiferous sterilizarea mikro¬floroy produc prin autoclavare la 132 ± 2 ° C (2 atm.) Timp de 20 de minute la 126 ± 2 ° C (1,5 atm.) - 30 min. seringă sterilizată este colectat după ce sa răcit, se introduce în pistonul cilindrului, a pus acul pred¬varitelno scoaterea din acesta dornului. Un cilindru ac și piston ia forceps care este sterilizat împreună cu seringa.

Sterilizarea uneltelor din metal. Instrumente de metal (foarfece, scalpele, forceps și așa mai departe.) în soluție de bicarbonat sterilizate sodiu 2%, ceea ce împiedică apariția ruginii și pierderea vederii. Bisturie și foarfece lama înainte de imersie în soluție recomandată lână folie.

buclă bacteriană sterilizare. buclă bacteriană din platină sau nicrom sârmă, sterilizate într-o flacără de alcool sau de un arzător cu gaz. Această metodă de sterilizare se numește calcinare sau o flacără.

Buclă într-o poziție orizontală, este făcută mai mică în cea mai rece, porțiunea din flacăra arzătorului pentru a evita stropirea materialului patogen combustiei aparute. După ce arde, bucla este transferată în poziție verticală, de jos strălucește, atunci partea înroșit întâi superioară a firului și arde graifărului. Calcinarea durează în general 5-7 secunde.

Pregătirea pentru sterilizare și hârtie de sterilizare, tifon și lână. Bumbac, tifon, hârtie de filtru, este sterilizat într-un cuptor termic la 160 ° C timp de o oră din momentul citirile termometrului date de temperatură sau într-o autoclavă la o presiune de 1 atm. timp de 30 minute.

Înainte de hârtie de sterilizare și se taie în bucăți de tifon, bumbac și laminate sub formă de perle sau tampoanele valoarea dorită. După aceea, fiecare tip de material individual, pentru una sau câteva bucăți învelite în hârtie grea. Atunci când materialul de rupere pachet sterilizate trebuie sterilizate in mod repetat ca sterilitatea este rupt.

Sterilizarea mănuși și alte produse din cauciuc. Produse din cauciuc (.. mănuși, tuburi etc.) contaminate cu forme vegetative de bacterii sunt sterilizate prin fierbere în 2% bicarbonat de sodiu sau abur care curge timp de 30 minute; la poluarea-sporeforming microflora într-o autoclavă la o presiune de 1,5-2 atm. timp de 30 sau 20 de minute. Mănușa de cauciuc înainte de sterilizare se toarnă în interiorul și în afara talc pentru a le proteja de lipire. Pavaj între mănuși de tifon. Fiecare pereche de mănuși este învelit separat în tifon și plasat într-o astfel de curvă.

Sterilizarea culturi microbiene patogene. Tuburile și plăci conținând bacterii culturi nu sunt necesare eforturi suplimentare, a pus într-un rezervor de metal, sigilați capacul și să treacă de sterilizare. Culturi microbi patogeni forme vegetative sunt ucise prin autoclavare timp de 30 minute la davle¬nii 1 atm. Rezervoarele de închiriere pentru sterilizare în autoclavă se realizează de către o persoană dedicată împotriva semnăturii. Modul de sterilizare este înregistrat într-un registru special. Când distrugerea culturilor microbiene I și II grupări patogenitate, precum și materiale, infectate sau suspecte de agenți patogeni de infectare acoperite de aceste grupe rezervoare cu material rezidual este transferat într-o tavă de metal cu laturi înalte, în prezența unei persoane însoțitoare autorizate să lucreze cu material infecțios.

Sterilizarea prin fierbere produs în sterilizatorului. Apa distilată este turnată în sterilizator, deoarece conducta formează un gunoi. (Obiecte din sticla sunt scufundate în obiecte reci, metalice, în apă caldă, cu adaos de hidrogenocarbonat de sodiu). articole sterilizați se fierbe la foc mic timp de 30-60 minute. Inceputul sterilizării este momentul de apă clocotită în sterilizatorului. La sfârșitul instrumentelor de fierbere ia forceps steril, care sunt fierte împreună cu alte obiecte.

Sterilizare prin căldură uscată.

Sterilizarea cu căldură uscată se efectuează la cuptorul Pasteur. Materialul pregătit să fie sterilizate sunt plasate pe un raft, astfel încât acesta să nu fie în contact cu pereții. Dulap închis, apoi includ încălzire. Sterilizare la 150 ° C timp de 2 ore, la 165 ° C - 1 oră la 180 ° C - 40 min la 200 ° C - 10-15 min (la 170 ° C, hârtie și lână îngălbenire, și la o temperatură mai ridicată char). Sterilizarea este considerat începutul timpului când tem¬peratura în cuptor ajunge la înălțimea dorită. La încetarea furnalului perioadei de sterilizare este oprit, dar nu și ușa dulapului este deschisă să se răcească, deoarece aerul rece care curge în interiorul incintei, poate duce la formarea tre¬schin pe o tigaie fierbinte.

sterilizarea cu abur sub presiune.

Sterilizarea produce abur sub presiune într-o autoclavă. Autoclava cuprinde două cazane, introduse una în cealaltă, carcasa și capacul. Potul exterioara numita camera vodoparovoy vnutren¬ny - camera de sterilizare. In vodoparovom are loc formarea de cazan de abur. In oala interior plasat materialul sterilizabile. În partea superioară a cazanului de sterilizare există găuri mici, prin care aburul din camera proho¬dit vodoparovoy. Capacul autoclavei ermetic înșurubată la carcasă. În plus față de aceste părți principale, autoclavă are un număr de părți care reglementează funcționarea sa: un manometru, solicat, supapa de siguranta, evacuare, aer și macarale de condensare. Manometrul este utilizat pentru a determina presiunea creată în camera de sterilizare. presiunea atmosferică normală (760 mm Hg. V.) este luată ca fiind zero, deci autoclava a fost oprită și manometrul la zero. există o anumită relație (tab. 1), între un manometru și temperatura.

raportul manometru și temperatura de fierbere a apei

Linia roșie pe scara manometrului indică presiunea maximă de funcționare, care este permisă într-o autoclavă. Supapa de siguranță utilizată pentru protecția la supra-presurizare. Acesta este situat la o presiune predeterminată, adică presiunea la care trebuie să fie sterilizate, cu săgeți merge pentru linia de ecartament al supapei autoclavă se deschide automat și eliberează excesul de abur, încetinind astfel creșterea în continuare a presiunii.

Peretele lateral are o autoclavă de apă de sticlă, care indică nivelul apei în vodoparovom cazanului. inferior și superior, reprezentând respectiv nivelul admis inferior și superior de apă în vodoparovoy camerei - două linii orizontale marcate pe geamul gabaritul tubului. Supapa de aer este proiectat pentru a îndepărta aerul din camera de sterilizare și vodoparovoy sterilizarea timpurie, deoarece aerul, fiind un slab conductor de modul termic de sterilizare dă. În partea inferioară a autoclavei este de condensare supapă pentru a elibera camera de sterilizare din condens produsă în timpul încălzirii materialului retortă.

Reguli pentru lucrul cu autoclavă.

Înainte de a începe vizita autoclavă și instrumentația. In autoclave cu cuplu regulator automat de vid electric gabaritul vodoparovoy săgeți de camera ajustată în conformitate cu regimul de sterilizare: săgeata de jos este pus 0,1 atm. inferior superior 0,1 atm. peste presiunea de operare camera vodoparovuyu este umplut cu apă până la fereastra dimensionale top mark. Între supapa de umplere cu apă pe o conductă prin care aburul intră în camera este menținută deschisă pentru o ieșire aer liber din cazan. O cameră de sterilizare încărcată de material sterilizabil autoclavă. După aceea, capacul (sau usa) autoclava a fost închisă ermetic fixare obturator central sau bolțuri; pentru a se evita deformarea, bolțuri înșurubate transversal (diametru). Apoi includ sursa de încălzire (curent electric, abur), închiderea robinetului pe conducta care leagă sursa de abur la o cameră de sterilizare. Odată cu debutul vaporizării și presurizarea produselor purjarea camerei vodoparovoy (indepartarea aerului dintr-un cazan de sterilizare). Metoda determinată prin proiectarea autoclavei de ventilare. Inițial ieșiri de aer în porțiuni, apoi un jet continuu de abur neted, indicând faptul că aerul din camera de sterilizare complet înlăturată. După îndepărtarea supapei de aer este închisă și începe o creștere a presiunii treptată din camera de sterilizare.

sterilizare Început este considerat momentul când manometrul arată o presiune predeterminată. După aceea, intensitatea încălzirii este redusă, astfel încât presiunea în autoclavă pentru o anumita perioada de timp a rămas la același nivel. La sfârșitul încălzirii timpului de sterilizare este oprit. Se închide supapa în conductă, aburul este alimentat în camera de sterilizare și deschiderea supapei pe condensare (downlink) abur reducerea presiunii în conducta din camera. După căderea manometrului la zero încet slăbi dispozitivul de strângere și se deschide capacul autoclavei.

Temperatura și durata de sterilizare a materialului sterilizabil determinat de calitatea și proprietățile acestor microorganisme care au infectat.

Controlul temperaturii în camera de sterilizare se realizează periodic prin teste bacteriologice. Testele biologice sunt fabricate laboratoare bacteriologică TSSEN. În caz de eșec pentru a produce datele de testare de starea tehnică a autoclavei.

Sterilizarea cu abur care curge.

Sterilizarea care curge aburul produs în aparat Koch tekucheparovom sau într-o autoclavă la deșurubat capacul și deschide robinetul de evacuare. aparat Koch este un cilindru tubular metalic cu un fund dublu. Spațiul dintre plăcile inferioare superioare și inferioare umplute cu apă de 2/3 (pentru coborâre rămasă după sterilizarea este apa de la robinet). Capac aparat are o deschidere centrală pentru un termometru și neskol¬ko mici găuri pentru aburul să scape. materialul sterilizabil încărcat în aparatul de camera vag pentru a permite un contact maxim cu vaporii săi. Început sterilizarea este timpul deoarece apa de fierbere și abur care intră în camera de sterilizare. Tekucheparovom aparat sterilizat mediu nutritiv în principal, ale cărui proprietăți schimba la o temperatură de peste 100 ° C, sterilizarea cu abur curgător trebuie repetate, deoarece o singură încălzire la o temperatură de 100 ° C nu asigură dezinfectarea completă. Această metodă se numește fractional sterilizare: materialul transportat de tratament retortă care curge abur timp de 30 minute pe zi, timp de 3 zile. Între materialul sterilizations este menținut la temperatura camerei pentru germinarea sporilor în forme vegetative, care sunt uciși în timpul încălzirile ulterioare.

sterilizare folosind temperaturi-Tyndallization fracționată sub 100 ° C, Tyndall propus. Încălzirea materialului sterilizuemogo produs într-o baie de apă, echipat cu un termostat timp de o oră la o temperatură de 60-65 ° C timp de 5 zile sau la 70 până la 80 ° C, timp de 3 zile. Între impregnare materialul proces este menținut la o temperatură de 25 ° C pentru germinare a sporilor în forme vegetative, care sunt uciși în timpul încălzirile ulterioare. Tyndallization folosit pentru sterilizarea mediilor de cultură care conțin proteine.

Mecanice bacteriene sterilizare folosind Ultrafilters. Filtrele bacteriene utilizate pentru a elibera lichid de a fi în ea de bacterii, precum și bacterii separate de virusuri, bacteriofagilor și exotoxine. Filtre bacteriene viruși nu sunt întârziate, și, prin urmare, nu poate fi considerată ca sterilizarea ultrafiltrare, în sensul acceptat al cuvântului. Pentru utilizarea Ultrafilters materialului fin poros (caolin, azbest, nitrat de celuloză, etc.) care pot întârzia bacteriile.

Filtru Azbestul (Seitz) sunt azbest placă cu grosimea de 3-5 mm și un diametru de 35 mm și 140 pentru a filtra volume mici și mari de lichid. În țara noastră, filtre de azbest, fabricate în două clase: „F“ (filtru), întârziind particulele suspendate, dar rateaza bacteriile, iar „SF“ (sterilizare), mai dens, împiedicând bacteriile. Înainte de utilizarea filtrelor de azbest montat în aparatul de filtrare, și cu ei sunt sterilizate într-o autoclavă. Filtrele de azbest utilizate individual. Filtre cu membrană din nitroceluloză și sunt discuri albe de 35 mm în diametru și 0,1 mm grosime.

Filtrele bacteriene diferă în mărime și porilor obozna¬chayutsya numere de secvență (tabelul. 2).

Imediat înainte de utilizare filtrele cu membrană sunt sterilizate prin fierbere. Filtrele sunt plasate în apă distilată, încălzită la o temperatură de 50- 60 ° C, pentru a le împiedica răsucirea, fierte la foc mic timp de 30 minute, schimbând apa de 2-3 ori. Filtru sterilizat pentru a evita deteriorarea lor eliminate din sterilizatorul și ostuzhennym flambat forcepsul cu capete netede.

Pentru filtrarea lichidelor filtrelor bacteriene montate dispozitive de filtrare speciale, în special în filtru Seitz.

Se compune din 2 părți: o parte superioară având o formă cilindrică sau o pâlnie, iar unitatea inferioară-o parte de susținere, așa-numitul tabel filtru dintr-o plasă metalică sau o placă ceramică netă, pe care este amplasat un filtru cu membrană sau azbest. Partea de susținere a dispozitivului are o formă de pâlnie, care se îngustează din care o parte este în dopul de cauciuc al flaconului Bunsen sticla. În timpul funcționării, partea superioară a dispozitivului este fixat pe partea inferioară cu șuruburi. Înainte de a începe spațiul de filtrare conectarea diferitelor părți ale sistemului pentru a crea o etanșare încorporat în parafină.

Tubul de evacuare al vasului este atașat un tub de cauciuc cu pereți groși la o nacocy apă, ulei sau cu bicicleta. Ulterior, unitatea cilindru sau pâlnia și se toarnă într-un lichid filtrat, pompa creând un vid în nava receptoare. Ca urmare a diferenței de presiune care rezultă lichidul filtrat trece prin porii filtrului în receptor. Microorganismele rămân pe suprafața filtrului.