Microbii instruire (microbiologie - Merck cultură media - mediu nutritiv uscat - lista

Nutrientul mediu Merck, Germania (Merck KGaA)

Ambalaje - 500 g

Mediu pentru numărarea bifidobacterii în produsele lactate

Bifidobacteria - un bacil anaerob nesporogen gram-pozitivi. Combinația de peptonă cazeină și extract de drojdie este bogat în bază nutriționale pentru o creștere excelentă de bifidobacterii. Adăugarea de sulfat de magneziu reface celulele deteriorate bifidobacterii. Sulfat de amoniu este o sursă de azot, dihidrogenfosfat de potasiu și hidrogenfosfat tamponeze mediul este menținut la un pH neutru. L-cisteină este un agent reducător și menține condițiile anaerobe necesare în mediu.

Galactooligozaharide TOS este un factor de creștere specific pentru toate bifidobacterii, în timp ce alte bacterii producătoare de acid lactic nu poate dispune de oligozaharidei. În combinație cu propionat de sodiu, care a inhibat semnificativ creșterea microflorei concomitent, mediu TOS propionat de agar este foarte selectiv pentru izolarea bifidobacterii.

mupirocin litiu inhibă creșterea lactobacililor, Lactococci, streptococi și leykonostoka fără a afecta creșterea bifidobacteriilor. lapte microfloră tipic inhibat mupirocin litiu. Mediu pe baza TOS propionat de agar-agar și mupirocin de litiu este atât de selectiv, care vă permite să definiți bifidobacterii, fără a fi nevoie de o confirmare suplimentară.

Peptona din cazeină - 10,0; extract de drojdie - 1,0; KH2 PO4 - 3,0; K2 HPO4 - 4,8; (NH4) 2 SO4 - 3,0; MgSO4 * 7H2O - 0,2; L-cisteină - 0,5; propionat de sodiu - 15; ; 10 - TOS galactooligozaharide agar - 15.0.

Se dizolvă 62,5 g în 950 ml apă distilată și se încălzește într-o baie de apă fierbinte sau abur care curge cu agitare frecventă până la dizolvare completă. Mediul este sensibil la căldură, acesta ar trebui să fie autoclavate în porții mici. De exemplu, 95 ml sau 190 ml din mediul de dizolvare sunt transferate în fiole adecvate și autoclavate la 115 ° C timp de 15 minute. După aceea, mediul este răcit rapid la 48 ° C într-o baie de apă. După autoclavizare mediul devine ușor opacă, dar se efectuează sub răcire până la 48 ° C într-o baie de apă. mediu de bază rămâne stabilă timp de 4 ore la găsirea într-o baie de apă la 48 ° C pH: 6,7 ± 0,2 la 25 ° C. Prepararea mediilor gălbui transparent.

aditiv selective mupiratsina litiu este furnizat într-o formă liofilizată (Kat.N1.00045.0010). Fiecare flacon conține 25 mg mupiratsina litiu calculat pentru 500 ml mediu TOS-MUP. Pentru prepararea aditivilor selectivi care se adaugă la un flacon de 25 ml de apă distilată sterilă. Ușor se amestecă până la dizolvarea completă a precipitatului.

Asigurați condiții aseptice în 5 ml aditivi MUP selectivi la 95 ml de mediu de bază (până la 190 ml de mediu de bază ar trebui să adăugați 10 ml de aditivi MUP selective). Medium este într-o formă topită într-o baie de apă la temperatura de 48 C. Atunci când se face aditivi selectivi pentru a evita formarea de bule de aer în mediu, care poate provoca mediu de oxidare. agar TOS-MUP conținând 50 mg / l mupiratsina litiu. După adăugarea de mediu de litiu mupiratsina trebuie utilizat imediat.

probe de testare sunt preparate în conformitate cu standardele internaționale ISO 8216 / IDF122 (produse lactate uscate) sau ISO 7889 / IDF117 (iaurt). Fiecare probă de 10 g se suspendă în 90 ml de soluție de diluare (soluție de concentrație 0,25% Ringer). Pregătirea unei serii de diluții de zece ori de 0,25% raportat la soluția Ringer, temperatura soluției este de 20 ° C trebuie evitate bule de aer sub agitare, ca bifidobacteria sunt ucise prin contactul cu oxigenul atmosferic. Pentru a reduce în mod substanțial riscul de deteriorare a celulelor bifidobacteria din momentul preparării și la prima semănatul de diluție în agar nu trebuie să depășească 15 minute.

Metoda de însămânțare în agar

proba insamantarea la mediu cu agar TOS-MUP se realizează prin însămânțare adâncime. Pentru acest 1 ml de probă sau diluări de zece ori a fost transferat într-un vas Petri goală și se amestecă cu 15 ml de mediu, se răcește la 48 ° C. Atunci când adăugarea eșantionului și mediul încearcă să evite bule de aer mediu de captare.

Imediat după solidificare plăcile cu agar inversate și incubate în condiții anaerobe (aparate de cultură anaerob Anaerojar complet cu un pachet de gaz generator Anaerocult ® -A pentru a crea condiții anaerobe) timp de 72 ± 3 ore la temperatura de 37 ° C. Condiții anaerobe trebuie monitorizată cu ajutorul unor indicatori adecvați în condiții anaerobe (Anaerotest ®).

Toate plăcile și 300 de colonii sunt numărate. Bifidobacterium cresc pe plăci sub formă de colonii albe, cu miros de acid acetic. morfologia coloniei poate varia foarte mult de la colonii rotunde de agar și stele colonii kleveropodobnyh pe suprafața de agar lenticular. Diametrul coloniei este de 1-4 mm.

Pentru a confirma coloniile necesare pentru microscopie. Bifidobacteria - se lipește forme neregulate, care sunt vizibile la o mărire x1000 sub un microscop cu contrast de fază. Alternativ, se poate de asemenea furniza fructoza 6-fosfat de testare fosfoketolazny coloniile tipice cultivate.

Contoriza numărul de colonii de bifidobacterii (colonii albe, cu miros de acid acetic), cultivate pe agar cu TOS-MUP, înmulțit cu gradul de diluție a probei pentru a obține numărul de Bifidobacteria în 1 g de probă.

mediu de cultură uscată păstrat la o temperatură de la 15 la 25 ° C, într-un loc uscat, într-un ambalaj etanș sigilat și poate fi utilizat până în prezent magazin înscrisă pe ambalaj. Mediul este pregătit bază stabilă de peste 3 luni când este păstrat între +2 și 8 ° C, atunci când este depozitat într-un flacon (protejat de uscare), și într-un loc întunecat. aditiv Selective după adăugarea de apă este stabil timp de 2 săptămâni, când este păstrată la frigider la 2 la 8 C și 3 luni atunci când sunt depozitate la -20 ° C,

Cea mai bună creștere a bifidobacteriilor în agar TOS MUP