Metode de cercetare în Histologie
Există următoarele tipuri de microscopie:
1) microscopie optică (cel mai frecvent tip de microscopie cu rezolutie de microscop este de 0,2 m) .;
2) microscopie UV (rezolutie microscopului este de 0,1 m);
3) microscopie fluorescentă (utilizată în test pentru a determina prepararea histologică a unor structuri chimice);
4) un microscop cu contrast de fază (utilizată pentru detectarea și studiul unor structuri din specimene de țesut necolorate);
5) microscopie cu polarizare (utilizate în principal pentru studierea structurilor de fibre);
6) microscopie cu câmp întunecat este utilizat pentru studiul lucrurilor vii;
7) microscopia în lumină incidente (concepute pentru studiul obiectelor groase);
8) Microscopie Electronică (cel mai modern microscop aspect având o rezoluție de 0.1-.7 nm).
Acesta este cel mai des folosit în experimente pe animale. Metoda interferonometrii permite determinarea masei de substanță uscată în viu sau obiecte fixe.
Metoda de cultură celulară - este în creștere a celulelor în eprubete sau în capsule speciale în organism și studiul ulterior al celulelor vii sub microscop.
metoda de colorare vitală - introducerea animalelor în sânge sau în colorant cavitatea abdominală (trepanovogo albastru) care, atunci când viața animalului este capturat de anumite celule - macrofage, dar după sacrificarea animalului și prepararea medicamentului sunt determinate și celule care conțin colorant numărate.
Metodele Immunomorfologichesky permit utilizarea reacțiilor pre-imune efectuate (pe baza interacțiunii dintre antigen - anticorp) pentru a determina o subpopulație de limfocite, gradul de celule străinătății efectua tipizarea histologice ale țesuturilor și organelor, adică, pentru a determina histocompatibilitate transplantul lor în continuare ...
Metoda de centrifugare diferențială - studiul organite individuale sau fragmente ale acestora, izolate din celule. În acest scop, piesa de testare a fost triturat corp, se toarnă ser fiziologic normal și apoi dispersată într-o centrifugă la viteze diferite (2-150 mii. 1 min). Ca urmare a centrifugarea fracțiunilor interesante sunt apoi studiate prin diverse metode.
Metode de morfometrie - metode cantitative. Acestea vă permit să determine mărimea și volumul nucleului - kariometriya, celula - citometrie, organitele - morfometrie electronice, precum și pentru a determina numărul de populații de celule diferite și subpopulații. Aceste metode sunt utilizate pe scară largă în cercetarea științifică.
Diferite metode experimentale - încărcare de hrană și apă, metode fizice (UHF, cuptor cu microunde, lasere, magneți). Acestea sunt utilizate pentru a studia reacția structurii de interes pe un anumit efect, și combinate cu metodele de morfometrie, cyto- și histochimie. Aceste metode sunt, de asemenea, utilizate în cercetare
Studii. Astfel, metoda principală și cea mai comună este studiul histologiei în microscopie.
Prepararea preparatului histologic cuprinde următoarele etape.
1. Material Capture - o bucată de țesut sau organ. Atunci când este necesar, materialul de gard să respecte următoarele reguli:
1) un material de gard ar trebui să se desfășoare cât mai curând posibil după moartea sau sacrificarea animalului, dacă este posibil din obiectul de viață la modul cel mai bine pentru a păstra structura de celule pot fi investigate;
2) un material de gard trebuie efectuată cu un instrument ascuțit, astfel încât să nu traumatizeze țesut;
3) Grosimea feliilor nu trebuie să depășească 5 mm, la soluția de fixare ar putea penetra întreaga adâncime a țesutului;
4) trebuie să fie sigur de a face piesa de marcare, numele specificat al corpului numărului de animale sau numele persoanei, data prelevării de probe.
2. Material de prindere. Această etapă este realizată în scopul de a opri procesele metabolice din celula si pastrati-l de la dezintegrare. Pentru ca acest lucru să preia piesa de studiu de tesut este cufundat într-o soluție de fixativ. Soluția poate fi simplu (alcool sau formol) și soluție de complex (Carnoy lui, reținere
Tsinker). Dispozitivul de retenție cauzează denaturarea proteinelor și păstrează structura celulei într-o stare aproape de o viață. Fixation poate fi efectuată, de asemenea, prin congelare - răcite cu azot lichid sau flux de dioxid de carbon.
3. Se umple bucăți de țesut în mediu (rășina parafine) de etanșare - sau congelare. Acest pas este necesar pentru a se ulterior din țesutul poate fi fabricat secțiune subțire.
4. Pregătirea secțiunilor privind microtom sau ultramicrotom folosind cuțite speciale. Secțiunile pentru svetovoymikroskopii lipite pe lamele de sticlă. și pentru e - montat pe o plasă specială.
5. Acoperirea sau secțiuni (pentru microscopie contrastante de electroni). Inainte de pictura felia pe care doriți să eliminați mediul de etanșare - a efectua deparafirovanie. Utilizarea de contrast de culoare a structurilor se realizează. Coloranții pot fi împărțite în bază, acide și neutre. coloranți bazici (hematoxilină) și acid (eozină) este cel mai larg utilizat. Frecvent utilizate și coloranți complecși.
6. secțiuni de iluminare în xilen și toluen. Acestea sunt închise în rășină (polistiren și Balsamul) și lamelă.
După aceste proceduri, medicamentul poate fi examinat sub un microscop cu lumină. Plasate sub secțiunile de sticlă pentru microscopie optică pot fi stocate lung și reutilizate. Fiecare dintre secțiunile de microscopie electronică se utilizează doar 1 dată, în timp ce este fotografiat, iar studiul structurilor tisulare produse prin difracție de electroni.
Dacă țesătura are o consistență fluidă (de exemplu, sânge, măduvă osoasă), atunci medicamentul este formulat ca un frotiu pe o lamă de sticlă, care este apoi de asemenea fixat, pătat
Din organe parenchimatoase casante făcute sub formă de preparate de organe Materialul tipărit efectuate fractură a organului, și apoi se aplică pe locul diapozitivul defect pe care aderă celulele de disponibilitate. După aceea, medicamentul este înregistrată și examinată.
Unele organe (de exemplu, mezenterice Pial) sau de preparate de țesut conjunctiv în vrac sunt realizate prin întindere a filmului sau le presat între două plăci de sticlă, urmată de fixarea și turnare în rășină.
Cell: definiția, structura generală a planului. Hyaloplasm: compoziția chimică, importanță. Organite și incluziune: definirea conceptelor, clasificare.
Cell - unitate elementară structurală, funcțională și genetică Cesky constând din toate plantele și animalele ?. Corpul uman adult este format din aproximativ 10> 3kletok, Koto? Rye împărțit mai mult de 200 de tipuri diferă în mod semnificativ? Schihsya caracteristicile lor structurale și funcționale. Vmese? Cei cu cele ale tuturor tipurilor de celule sunt caracterizate prin similitudinea autorităților generale? TION și structura celor mai importante componente.
componente ale celulei. Fiecare celulă este format din două componente principale - nucleu și citoplasmă. In nucleu sunt cromozomi conțin? -Care informații genetice, ca rezultat al procesului de transcriere este în mod constant selectiv citit și trimis la citoplasmă, unde monitorizează progresul proceselor multiple zhiz? Celulele inactive, în special, procese echilibrate sy? Pentru, anabolism (din limba greacă. Anabole - creștere), și distrugerea kataba ISM (din kataballo greacă - ?. distruge). Aceste procese implementate? Sunt in citoplasma din cauza interacțiunii componentelor sale.
componente citoplasmatice. Citoplasma este separată din exterior (pentru această celulă) mediu cu membrana celulară exterioară (plasmolemma) și conține organite și incluziuni, cufundata în hyaloplasm (matricea celulei).Organite - este în mod constant prezentă în citoplasmă structurii. specializate pentru a îndeplini funcții specifice în celulă. Acestea sunt împărțite în valoarea totală a organitelor și corpul? Nelli speciale.
organitelor valoare totală găsită în toate celulele și QS? Dima pentru a asigura mijloacele de subzistență. Acestea includ mitocondriile, ribozomii, reticulul endoplasmic (EPS), complexul Golgi, lizozomi, peroxizomi, centru de celule, componentele citoscheletului ?;
(2) organite speciale sunt prezente doar în anumite celule și să asigure conformitatea cu funcțiile lor de specialitate. Acestea includ cili, flageli, microvilozități, myofibrils, Acrozom (sperma). organite speciale sunt formate în timpul dezvoltării celulare organite ca derivați de importanță generală.
Structura multe organite includ membrana biologică elementară, astfel încât să divizeze organite, membrana și nu? Membrană. Prin membrana organite sunt mitocondriile, EPS, complexul Golgi, lizozomi, peroxizomi, la ribozomi non-membrană, centrul de celule, cili, microvililor, flagellum, cineva? Citoscheletului piesele originale.
sisteme funcționale de celule (dispozitive) - organite complexe, care se afla sub controlul miezului asigura conformitatea cu importanta Nation functiile celulare ?. Disting: (1) un aparat de sinteză; (2) Unitatea de energie; (3) dispozitivul digera Bani intracelular (endozomale-lizozomal?); (4) citoscheletului.
Incluziunile - componente citoplasmatice temporare formate prin acumularea de produse metabolice ale celulelor. Xia împărțit în mai multe tipuri:
lecitină trofice în celulele ou; glicogen; lipide sunt găsite în aproape toate celulele;
Secretorie: granule secretorii in celule secretoare (granule de zimogen în celulele acinare ale pancreasului); Granulele secretorii în glandele endocrine, și altele;
excretor: substanța care trebuie îndepărtată din corp (de exemplu, granule de acid uric din epiteliul tubular renal);
pigment: melanina, hemoglobina, lipofuscină, bilirubinei și altele.
În procesul de viață incluziuni accidentale se acumulează în unele celule: medicamente, particule de cărbune, siliciu și așa mai departe.
În plus față de structurile citoplasmei, care pot fi atribuite în mod clar op? Ganellam sau incluziuni, are un număr mare de diferite vezicule? De transport profilate fasonate care asigură nu numai transferul substanțelor între diversele componente ale celulelor, dar, de asemenea, transformarea lor parțială (procesare) datorită prezenței enzimelor în membrană, care formează peretele lor.
Structura (componente) de celule cu membrană - gradul cumulativ pentru citoplasmă diferite structuri și nucleu: plasmolemma, un număr de organite, incluziuni, bule de transport și plic nuclear (karyotheca), care includ membranele celulare ?. Postnatal? De diferite structuri de membrana de celule sunt organizate într-un mod similar. dar diferă în mod semnificativ, în primul rând, compoziția proteinelor membranei, determinând specificul funcțiilor lor.
Hyaloplasm (seva tsitozol celulară, matricea celulară) - mediul intern al celulei, care reprezintă aproximativ 55% din volumul total. Este un complex coloidal transparent ICI subiect, în care incluziunile și organite suspendate și conține diferite biopolimeri Nye ?: Proteine, polizaharide, acizi nucleici, și ioni. Transformări de tip suferă gelzol. În hyaloplasm despre? Vine cele mai multe dintre reacțiile metabolice intermediare.
Structurii membranelor celulare: SOIULUI. STRUCTURA ultramicroscop, UPDATE valoare.
Principiul Structura organite cu membrană
organite membranoase sunt închise și porțiunile izolate (compartimente) în hyaloplasm având structura sa internă. Peretele este format din bilipidnoy membrane si proteine, cum ar fi plasmolemma lor. Cu toate acestea bilipidnye organite membranare au caracteristici: grosime bilipidnyh membrane organite mai mici de plasmolemma (7 nm până la 10 nm), membrană diferă prin numărul și conținutul de proteine încorporate în ele. Cu toate acestea, în ciuda diferențelor, membranele de organite principiu au aceeași structură, astfel încât acestea au capacitatea de a interacționa unul cu altul, încorporat, îmbinare, diviza, otshnurovyvatsya. Structura generală a membranelor de principiu organite poate fi explicată prin faptul că acestea sunt formate în reticulul endoplasmatic și apoi merge pe restructurarea lor funcțională în complexul Golgi.
Mitocondriile - elementele structurale cele mai izolate ale citoplasmă celulelor, care au un grad mare de auto-activitate.
Se crede că, în trecut, mitocondriile au fost organisme vii independente, și apoi infiltrat în citoplasmă celulei. în cazul în care sunt existența saprofite.
Dovada acest lucru poate fi prezența aparatului genetic al mitocondriilor (ADN mitocondrial) si aparate sintetice (ribozomii mitocondriali). Forma mitocondriilor poate fi ovale, rotunde, alungite sau chiar ramificate, dar este dominat de ovalnovytyanutaya.
Peretele este format din două membrane mitocondriale bilipidnymi separate printr-un spațiu de 10-20 nm. Care membrana exterioară acoperă întreaga periferie a mitocondriilor sub forma unui sac și îl separă de hyaloplasm. Membrana interioara a mitocondrie separa mediul intern, în care acesta formează pliuri în interiorul mitocondriile - crista. Mitocondrii mediului intern (matricea mitocondrială) are o structură cu granulație fină și cuprinde granule (ADN-ul mitocondrial și ribozomi).
Funcția mitocondrială - formarea de energie sub formă de ATP. Sursa de energie a formării în mitocondrii este PVK (piruvat), care este format din proteine, grăsimi și carbohidrați în hyaloplasm. Oxidarea piruvat are loc în matricea mitocondrială, iar cristae transportului de electroni mitocondriilor efectuat, fosforilarea ADP și formarea ATP. Energia rezultată ATP mitocondrial este singura formă care este utilizat de celula pentru a efectua diverse procese.
Pe parcursul duratei de viață a celulei are loc în mod repetat de actualizare mitocondrii. Ei au restaurat vechea diviziune a mitocondrie.
reticulul endoplasmic (EPS) în celule diferite pot fi furnizate sub formă de rezervoare de aplatizat, tubulare sau vezicule separate. Peretele este format din membrană bilipidnoy.
Există două soiuri de EPS:
1) granular (granular sau rugos);
2) nezernistuyu (sau neted).
Pe suprafața exterioară a membranelor conținute granular EPM atașate ribozom. In citoplasma in timpul studiului microscopic de electroni poate fi găsit două tipuri de EPS, dar unul dintre ele predomină, care determină celulele de specificitate funcționale. Aceste două soiuri de EPS nu sunt separate și forme distincte, ca un studiu mai detaliat poate detecta trecerea de la o specie la alta.
Funcții EPS granulare:
1) sinteza proteinelor pentru excreție din celula (export);
2) separarea (segregarea) a hyaloplasm produsului sintetizat;
3) condensarea și modificarea proteinelor sintetizate;
5) Sinteza componentelor bilipidnyh membranelor.
Funcția lină a EPS:
1) implicate în sinteza glicogenului;
2) sinteza lipidelor;
3) funcția de detoxifiere (neutralizarea substanțelor toxice prin conectarea acestora cu alte substanțe).
complex Golgi Placă
Complexul placă este cunoscut ca aparatul de transport al celulei. complex placă Golgi (unitate mesh) reprezentată de rezervoare de acumulare de vezicule aplatizate și mici delimitate printr-o membrană bilipidnoy. Placa este împărțită într-un complex de subunități - dictyosomes. Fiecare dictyosome este o stivă de tancuri aplatizate, care sunt situate în jurul periferiei de bule mici. Astfel, în rezervorul fiecărei turtit porțiune periferică oarecum extins, în timp conic central. In dictyosome distinge doi poli: tsispolyus (bază direcționată către nucleu) și transpolyus (îndreptat spre tsitolemmy). Sa constatat că un cablu adecvat vacuole tsispolyusu de transport, având în produse complexe Golgi sintetizate în EPS. De la transpolyusa bule otshnurovyvayutsya care transporta secretul plasmolemma pentru eliberarea sa din celule. O parte din mici vezicule pline cu proteine, enzime, acesta rămâne în citoplasmă și se numește Lizozom.
Funcția Farfurie a complexului:
1) de transport (ieșirile din produsele sintetizate de celule din aceasta);
2) condensarea și modificarea compușilor sintetizați în EPS granulare;
3) formarea de lizozomi (cu EPM granular);
4) participă la metabolismul glucidelor;
5) sinteza moleculelor care formează glycocalyx tsitolemmy;
6) sinteza, stocarea, mucine excreție (mucus);
7) Modificarea membranelor sintetizate în EPS și conversia acestora în membrană plasmolemma.