diagnosticul microbiologic

Acasă | Despre noi | feedback-ul

Difterie bacilul - agenții cauzatori ai difterie.

Difteria - o boală infecțioasă acută caracterizată printr-o leziune toxică a sistemelor cardiovascular și nervos, precum fibrinoasa specific (diphtheritic), inflamație la locul porții de intrare.

Agentul cauzal a fost descoperit în 1883, Klebs, în 1884. F. Loeffler l individualizata în cultură pură. In 1888 g. Roux și Yersin primit toxina difterică, iar în 1895 Behring și Py primit independent ser difteriei. În 1923, Ramon a dezvoltat o tehnologie pentru producerea de toxoid difteric, iar mai târziu a primit serul difterie. NG Gabrichevsky aplicat ser difterie în scopuri terapeutice și a organizat producția în România.

View - C. diphtheriae

Corynebacterium Genul cuprinde aproximativ 60 de specii. În conformitate cu Clasificarea Internațională a Burgi acest gen este împărțit în 3 secțiuni:

1) patogene pentru om și animale;

2) patogen pentru plante;

curbat drepte sau ușor tijele de 0,3 - 0,6 x 4 - 8 microni, nu formează spori au microcapsule încă.

Caracteristicile bacilul difteric este prezența clavate Ingroșâri la capete; bețișoare difera ca polimorfism; caracterizat prin dispunerea reciprocă a bacteriilor în frotiurilor - sub formă de numere V, X, L (nu întreaga variație în fisiune);

Acestea sunt aranjate într-un „pin-beam“ In frotiuri groase. îngroșarea Clavate la capetele asociate cu prezența boabelor volutin (vițel Babes-Ernst) - derivați ai acizilor nucleici, granule metahromatinovye Polimetafosfat. Bacteriile pot forma filtrabil și formele L.

microorganisme Gram-pozitive. Când se colorează prin metoda corpului celulei Neisseria este colorată în albastru, iar volutin cereale - galben. Metoda Leffler colorează citoplasmă într-o culoare albastră, iar volutin cereale - în albastru închis.

Difterie - anaerobi facultativi otimalnaya temperatura lor de cultivare 37 C, pH 7,3-8,0. Cerând din mediul nutritiv necesar pentru creșterea prezenței cistina, histidină, fenilalanină, metionină, etc. Factorii de creștere sunt Ca2 +. Mg 2+. Fe 2+. Zn2 +. Mn 2+. Cu 2+. Pentru ser angajat cultivare (mediu Loeffler) suplimentat cu sânge hinozalnuyu mediu Buchina. media-diagnostic diferențial: telluritovaya medie (Conradi, Troch, 1913.) medie Glitserinovokrovyanaya cu telurit (Clauberg miercuri # 921; # 921;), zer telluritovy agar cu cistina (Tyndall), telurul ciocolată agar McLeod.

Miercuri Leffler bacteriile cresc sub forma unei colonii gri-crema de „șagrinului“ de tip.

În mediile telluritovyh excitatoare forme grayish colonie neagră de reducere a telurit datorită telur metalic având o culoare neagră și se acumulează bacterii.

Difterie bacillus inactiv, este fermentat pentru a forma acizi glucoză, maltoză, galactoză, dextrină, zaharoză nu se descompune, lactoză, manitol, reduce nitrații la nitriți. Ureea nu hidrolizat (proba Zaks negativ) nu formează indol. cisteină Descompus (proba Pisa pozitiv).

Conform culturii, biochimice, patogenetic și alte proprietăți ale bacililor difterice sunt împărțite în 3 biovar.

1) biovar Mitis, caracterizată prin următoarele proprietăți:

fermenți glucoză, amidon. maltoză nu fermentează zaharoza, glicogen, dextrina;
tsistinaznoy are activitate;
restabilește nitrați;
proba ureazei este negativ;
pe medii cu colonii netede negre lucioase forme Telurit fine, cu o margine netedă;
pentru a da o turbiditate mediu lichid uniform și precipitat sub formă de pulbere;
Acesta oferă hemoliză pe zona de mass-media din sânge;
toxicitate redusă;
agenți patogeni cauzează o ușoară incidență sporadică.

2) biovar gravis, caracterizată prin următoarele proprietăți:

fermentează glucoza, amidon, dextrină, maltoză,
tsistinaznoy are activitate;
restabilește nitrați;
proba ureazei este negativ;
pe medii cu forme telurit colonii mari, uscat, lipsit de strălucire, plat, gri-negru, ridicate în centru, cu striuri radiale și margine inegale (similar cu margarete);
într-un mediu format kroshkovidny opacitate peliculă lichidă sau precipitat grosier;
Acesta oferă hemoliză pe medii de sânge;

· Are un proprietăți toxigenic pronunțat;

· Distins de pacienți cu difterie severă, determină un grup de flash.

3) biovar intermedius, caracterizată prin următoarele proprietăți:

· Pe un suport cu formulare Telurit fin mat uscat gri negru colonie cu o periferie transparentă și marginea inegală;

· Pe mediul lichid, urmat de turbiditate dă Coated și genera precipitat fin;

· Hemoliza pe medii de sânge este absent.

Difterie bacillus are două antigen

1. - antigen (grup), polizaharidă peretelui celular, stabil termic, da reacții încrucișate cu micobacterii și nokardiyami;

2. - antigen (probă), capsule, termolabilă, imunogene, specific speciei.

În practică, serotiparea nu se aplică, cu toate acestea, produce un ser de diagnostic pentru RA, PHA.

Pentru identificare folosind lizotipia (22 fagului) și bakteriotsinotipirovanie (25 bacteriocine).

Toxinele. Stick eliberează o toxină - exotoxină difteriei. Prin forța este nevoie de al treilea loc după botulinum și tetanosului. Termolabilă, foarte toxic, imunogene, protector, are actiune anestezic. Gistotoksin are proprietati dermonecrotică, hemolitice. Acesta este sintetizat ca un precursor inactiv - un singur lanț de polipeptide cu o greutate moleculară de 61 kD. Activat sub acțiunea proteazei care taie polipeptida 2 interconectate prin legături disulfidice ale peptidei: A (21 kDa) și B (39 kDa). Peptide B îndeplinește funcția de acceptor - recunoaște receptorul se leaga de ea, formând canalul intramembrane prin care intră în peptida de celule A. Peptida A - este o enzimă care asigură transferul de riboză adenozin difosfat de la NAD la unul din restul de aminoacid (histidină), factorul de proteină de alungire EF- 2. Ca urmare a modificării EF-2 își pierde activitatea, având ca rezultat inhibarea sintezei proteinelor la etapa translocare ribozom. Toxina este sintetizat numai C. diphtheriae, lysogenic modera convertind tox-prophage este integrată prin recombinare situs specifică. Operon care codifică sinteza toxinei are promotorul și tox R 3 sectiuni: tox S, A tox, tox B. Tox S - asigură toxina ieșire prin membrana în spațiul periplasmatic al celulei bacteriene. Pierderea prophage de celule sau mutații în toxicologică-operonul face ca celulele sunt ușor toxice.

Enzime de patogenitate. hialuronidaza, neuraminidaza, fibrinolizinei, catalază - factori de invazie Leucocidina - asigură o rezistență la fagocitoză;

Componentele structurale și chimice ale celulei - potabila (pentru a promova adeziunea celulelor sensibile) microcapsule (conferă rezistență la fagocitoză), cablu-factor (trehaloză difosfoefir-6-6 și korinemikolovaya acidului korinemikolinovaya având dă fosforilare în mitocondrii) bacteriocine (koritsiny) care codifică plasmide a căror sinteză este transmis.

Când este încălzit la 60 C. coli mor timp de 10 min la 100 ° C vine moartea instantanee. Soluție de acid carbolic 5% asigură inactivarea prin - 1 min. Sub influența bacilului lumina directă a soarelui supraviețuiește timp de câteva ore, film uscat si varza creata - 3-4 luni. pe articole de uz casnic și îmbrăcăminte sunt stocate până la 15 zile, jucării moi - 3 luni. în apă și lapte - până la 20 de zile în praf - până la 5 luni. bacilii difteriei sunt sensibile la penicilină, tetraciclină, eritromicină.

Sursa de infecție - o persoană bolnavă, vehicul sau aflați în convalescență.

Mecanisme de transmisie:

- aerogenic (cale - praful din aer și din aer);

- pini (cale - contact indirect).

Pacientul este periculos (în sensul de provocare), cu ultimele zile ale perioadei de incubare.

Intrarea poarta - membranele mucoase ale nasului, faringe, laringe, trahee, bronhii, conjunctiva, organele genitale externe; suprafața plăgilor, rană ombilical.

Perioada de incubație - 2-14-20 zile.

Agenții cauzali sunt adsorbite pe celulele sensibile colonizeze epiteliului. Gistotoksin care inițiază secretă dezvoltarea inflamației fibrinoasa locale, necroză, vasodilatație paretic epitelială cu permeabilitate afectata, edem tisular și fibrinogen de ieșire de la vasele de sange. Fibrinogenul influențat de tromboplastină tisulară, țesut necrotic și coagulează oxigenul atmosferic. filmul fibrinous format pe suprafața. Pe epiteliu scuamos stratificat - gros, sudate la țesuturile adiacente; pe un singur strat - un strat subțire, ușor detașabile. Creșterea filmelor în căile respiratorii pot duce la asfixia (true crup). Procesul însoți limfadenită regională. Efectele sistemice ale toxinei duce la un compromis hemodinamic. Dezvoltă miocardita toxice și paralizia timpurie a inimii. Există un risc de sistem tubular renal, necroza stratului cortical. In sistemul nervos - citoliza celulelor nervoase cu dezvoltarea de paralizie avansată a palatului moale, diafragma, inima, nervul vag. Moartea se poate produce în difterie de la devreme sau mai târziu inima paralizie și diafragmă, și ca rezultat uruiala adevărate (pelicule obstructive ale căilor respiratorii rupere).

La sugari mai susceptibile de a dezvolta difterie gât (nasmokr, expresie slabă a manifestărilor comune). Este necesar să se examineze rana ombilical, pentru a evita un proces local.

Dupa ce se dezvolta boala, tulpinile rezistente la toxicitate și puțină imunitate antimicrobiană pronunțat. Poate că dezvoltarea statului purtător (10%) și re-infestarea (6-8%). Nivelul de imunitate poate fi setat în PHA. Diagnostic - credite - 1: 200 și mai mare. Cu același scop Schick reacție - microdoses intradermice toxina difterică (1/40 DLM 0,2 ml) intradermic. După 48 de ore, există o înroșire și infiltrare, sugerând fără anticorpi antitoxice; dacă orice reacție are loc. Din cauza riscului de sensibilizare a organismului, proba se efectuează rar.

Material de testare - mucus din gât, nas și amigdale de film, secreții plăgilor, Sânge

1. Metoda bacterioscopice - microscopie frotiu materialului de testat (colorația Gram, Neisseria, Leffler).

2. Metoda bacteriologice - selectarea unei culturi pure a agentului patogen și identificarea acestuia. Nu trebuie să fie izolate doar de la difterie bacilul materialului de testat, dar, de asemenea, pentru a determina toxigenității sale.

Determinarea toxigenicitatea S. dphtheriae:

a) proba biologică pe animale - infecție intradermice de cobai culturi filtratului bacterii difterie - provoacă necroză la locul injectării. Doza letală minimă (20-30 ng) ucide pe cobai în ziua 4-5;

b) infectarea embrion de pui (decese observate prin actiunea toxinei);

c) introducerea culturii celulare (detecție CPE);

g) tehnica ELISA cu anticorpul marcat cu peroxidază;

d) utilizarea unei sonde ADN pentru a detecta tox-operon în genom;

e) Ilek și Ouchterlony de testare (1948) - baza capacității de toxină și antitoxina difuză în agar și forma precipitatele (whiskers, săgeți) în cursul difuziei - metoda de precipitare cu dublă în răspunsul provizoriu gel poate fi eliberat după 48 de ore la 72 h - concluzia despre prezența Corynebacterii toxigene, după 96 de ore - răspunsul final.

3. Serodiagnosis - TPHA, ELISA, RIA, reacția co-aglutinare, reacția Schick.

4. Express - diagnosticare - reacție IFA, ELISA, TPHA la aglutinare.

5. biochimic și molecular-biologice Metoda - PCR (detectarea tox-gene).