Cultura Embryo - cultura embrionilor
Postgamnaya incompatibilitate cu hibridizarea la distanță are loc după fertilizare. Adesea, atunci când acest lucru se formează semințe nevskhozhie. Motivul pentru această discrepanță ar putea fi la momentul de dezvoltare a embrionului și endosperm. Atunci când slaba dezvoltare a embrionului endospermului nu este capabil de germinare normală. În aceste cazuri, embrionul izolat și este cultivat într-un mediu nutritiv. Cultivarea embrionilor de pe medii nutritive artificiale numite cultură a embrionilor sau zarodysheyin vitro. Această metodă se bazează în 1904. Hannig. Cultivând embrionii in vitro pentru creșterea nucleelor special selectate media aseptic, izolate anterior de matur (în formă în mod normal), sămânța din semințe imature (în stadii incipiente de dezvoltare). In primul caz embrionii complet diferențiate, în al doilea - acestea sunt în diferite faze de dezvoltare [3, 4].
Semnificația practică a culturii de embrioni izolate din seminte mature este de a accelera producția de plante din semințe, slab sau germinativ, precum și în eliminarea fatului de repaus, care începe în timpul maturării seminței pe plantă. stare de repaus Embryo poate fi scurt, dar uneori trebuie să depășească pentru a aplica efecte speciale cu privire la metodele de semințe, cum ar fi stratificarea - efectul temperaturilor scăzute sau scarificarea - leziuni la nivelul pielii a semințelor solide pentru a spori capacitatea de umflare a accelera germinare. Practic mecanisme latența și germinare dependentă de iluminare, temperatura de stocare, prezența inhibitorilor endogeni. În special, semințele unor plante perene care se reproduc în mod vegetativ, nu încolțească în condiții naturale. Metoda embrion cultură - cultura embrionilor utilizate pentru studiu, precum și gestionarea eficientă a stării de somnolență. Cultivarea în condiții sterile de pe medii nutritive artificiale permite să aplice diferite substanțe pentru a depăși latența și pentru a stimula creșterea embrionului [1].
In timpul culturii de embrioni izolate din semințe de mature, de obicei folosesc simplu mediu mineral zaharozei fără regulatori de creștere și vitamine, deoarece substanțele active biologic cauzează adesea apariția unor forme anormale cu distorsionate de corpuri individuale și calus [1, 3, 4]. Embrionii sunt în general izolate din semințe mature după umflarea. Semințele sunt sterilizate, iar uneori se calcinează în continuare într-o lampă cu flacără spirit, și apoi se izolează aseptic embrioni. Din semințe uscate izolat din germeni mai greu, dar este posibil, dacă este necesar de condițiile de experiență sau de cultură. Cultivarea embrionilor din semințe mature un relativ simplu, astfel încât acesta poate fi aranjat în orice profil de laborator biologic.
Embrionii sunt izolați în stadii incipiente de dezvoltare cu germeni semințele sau necoapte imediat după fertilizare, foarte mici, sunt organisme mici, din care ies în evidență, deci cultura lor este asociată cu anumite dificultăți tehnologice. Complexul este selectarea mediului nutritiv, care ar trebui să asigure dezvoltarea embrionului la starea sa normală în semințele mature, în scopul de a menține germinare și creștere. fiziologic substanțe active cerințele de mediu sunt diferite în diferite stadii ale dezvoltării embrionului. Astfel, aditiv organic complex (imatur endosperm de nucă de cocos, castan sau nuc, lapte de cereale stadii de maturitate) necesare pentru maturarea (diferențiere) a embrionului. Cu toate acestea, după ultima de diferențiere care pot provoca o creștere anormală a organelor fatului, deci este transferat într-un mediu de cultură a unei compoziții diferite.
Embrionii cultivate cu semințe imature nu numai pe suprafața mediu semisolid agar, dar, de asemenea, într-un mediu nutritiv lichid, sub atmosferă de azot. Cele menționate mai sus condițiile de cultură a embrionilor susțin faptul că fătul în diferite stadii de dezvoltare necesită speciale, unice pentru această etapă, condițiile și alți factori externi de hrănire. Cultura izolată a embrionilor crescut nu numai în etapa în care dezvoltarea proceselor predomine embrionului propriu-zis, și apoi, atunci când există procese de separare doar un ou fertilizat, de exemplu, într-un stadiu foarte timpuriu 4 celule.
germ Cultivarea este foarte mică, aceasta nu este diferențiată se caracterizează printr-o serie de dificultăți, care pot fi evitate prin cultivarea germenilor de semințe cu bucăți de țesut la care sunt atașați și prin care se hrănesc (cu placenta). Pentru aceasta complet cultivată cu placenta și ovulului ovar care se maturizează ulterior în zigoți sau proembryo [1]. Lungimea optimă a embrionului imatur pentru a produce un bine dezvoltat și creștere răsaduri de porumb este de 4,5 - 5 mm, ceea ce este tipic de embrioni de la 14 - 18 zile după polenizare, în funcție de condițiile de creștere [2].
În ciuda dificultăților legate de izolarea si cultivarea ovarelor de semințe imature, metoda este utilizată pentru trecerile de la distanță, în urma căruia un embrion neviabil. Dacă embrionul nu moare ca urmare a unor anomalii genetice, ca urmare a incompatibilității cu endospermul, cultivarea embrion într-un mediu nutritiv prevede plante hibride valoroase. Astfel obținute plante hibride intergenerici și interspecifice.
Metoda de cultură a embrionilor imaturi este adesea folosit atunci când este imposibil de a obține în mod eficient o anumită combinație genetică de trăsături dorite prin metode tradiționale. În barieră incompatibilitate generală în dezvoltarea embrionului hibrid are loc la stadiile târzii ale embriogenezei de mijloc și. De obicei, acest lucru se manifestă prin încălcarea endospermul, sau lipsa acesteia, ceea ce duce la moartea embrionului. Special compoziții selectate pentru cultivarea componentelor medii de cultură a embrionilor imaturi furnizează substanțe toate necesare pentru dezvoltarea normală a embrionului și astfel înlocuiește endosperm.
Cea mai importantă cerință atunci când se lucrează cu nuclee izolate dintr-o varietate de medii nutritive capabile să susțină creșterea și dezvoltarea lor. În ciuda faptului că compoziția mediile nutritive variază în funcție de tipul de embrioni de cultură este evident că mai tânăr embrionul, cu atât cerințele față de compoziția mediilor nutritive. De exemplu, dacă un embrioni relativ mature pot fi cultivate pe medii cu adaos de sare și zaharoză, pentru dezvoltarea normală a embrionilor izolați în stadiile incipiente, vitamine, aminoacizi, hormoni vegetali, precum și aditivi complexe sofisticate sub formă de extract de drojdie, hidrolizat de cazeină, lapte de cocos etc. Se recomandă, de asemenea, adăugarea de manitol și alte componente care asigură presiunea osmotică optimă necesară pentru dezvoltarea adecvată a embrionului. Rezultante Plantele hibride sub doraschivat de seră [1]. Acesta a fost experimental dovedit că cel mai bun mod ar trebui să fie considerate ca fiind de 27 ° C, o oră și 27 zile ° C și noapte -15 0 C, în funcție de genotipul încolțire embrioni imaturi de porumb [2]. În ceea ce privește optimizarea compoziției mediului nutritiv, se demonstrează că adăugarea unui 2,5 g / l de cărbune activat nu a afectat germinarea, dar a permis prepararea mediului pentru a obține un stabile valori ale pH-ului [2]. Această măsură a permis, indiferent de marca de agar pentru a obține o dezvoltare bună rădăcină și nici o deteriorare a aloca răsadurile tuburilor de testare și transplantate în sol. Dacă este necesar, pentru a stimula germinarea embrionii tineri (12 zile) trebuie utilizat 1 mg / l 6-BAP [2].
Pe lângă depășirea neviabilitatea metodei embrionilor embrion imatur este important pentru rezolvarea altor probleme, cum ar fi obținerea liniilor și soiurilor de plante, semințele vechi care aproape pierdut viabilitatea, dar la aceleasi plante timp sunt foarte importante pentru determinarea programului de creștere. Recent, o mare importanță este utilizarea embrio - cultura embrionilor de selecție pentru servere la distanță culturile hibride [1].
În cazul în care embrionii hibrizi avorteze în primele stadii de dezvoltare, izolarea și cultivarea in vitro nu are efecte pozitive. Dezvoltarea normală a embrionilor în acest caz este posibil izolat din primordia seminale. Principalele avantaje ale acestei metode este acela că compoziția mediile nutritive este mai ușor decât în cazul cultivarea embrionilor imaturi. Mai mult decât atât, germenii de semințe sunt alocate mult mai ușor decât embrioni imaturi.
Mai mult, metoda embrio - cultura embrionilor permite selectarea plantelor rezistente la boala intr-un stadiu incipient de dezvoltare a acestora, cu condiția ca reacția plantei adulte coincide cu răsaduri de reacție derivate din embrioni [1].
Folosind metoda culturii embrionului - cultura de embrioni pentru cercetare, în funcție de evoluția embrionilor plantei gazdă și parazit, puteți cultiva semințele și embrionii unor paraziți în condiții aseptice obligatorii ai in vitro. Astfel, cunoașterea tehnicilor de germinare a semințelor și creșterea embrionilor, precum și sensibilitatea lor la diferite componente ale mediului de cultură promovează stabilirea controlului asupra dezvoltării plantei parazit și gazdă prin mijloace chimice adecvate sau extragerea unor astfel de forme de plante care sunt antagoniști ai parazitului.
Aplicarea metodei de cultură a embrionilor - cultura embrionilor permite chiar și în absența unui climat artificial cu drepturi depline la un cost minim pentru a primi generare suplimentară și în acest mod de a accelera procesul de selecție, traducerea liniilor de porumb asupra citoplasmă [2].